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Test de ELISA

INTEGRANTES :
ANA MIRANDA
MARTINA RIQUELME
ORIANA PALMA
RAQUEL VERGARA

Que es el test de ELISA


La prueba ELISA son las iniciales de Enzyme-Linked

Immunosorbent Assay, que en ingls significa


ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas ,es
un mtodo de laboratorio calificado de
immuno-enzimtico. Se trata de una prueba
inmunolgica, porque tiene como principal objetivo
poner en evidencia la presencia de anticuerpos o de
antgenos especficos de una enfermedad en una
muestra de sangre

Este examen utiliza una protena llamada enzima, que


se fijar a ciertos componentes especficos de la
enfermedad; por la identificacin y la cuantificacin de
esta enzima se puede confirmar la enfermedad y
evaluar su intensidad.

Cuando se hace ELISA

Se recomienda realizar un ELISA en todas las situaciones en las que se


quieran detectar antgenos cuya existencia pueda ser determinante para un
diagnstico o para establecer conclusiones en un estudio cientfico. Algunas
de las situaciones ms frecuentes donde se usa el ELISA son:

Diagnstico de VIH:
es la primera prueba que se realiza para descartar una infeccin por VIH. Se
trata de una prueba muy sensible, as que prcticamente detecta todos los
casos. Sin embargo, puede dar falsos positivos, por lo que se suele repetir
de nuevo un ELISA y se confirma con un Western-Blot.

Deteccin de anticuerpos contra microorganismos:


a veces el antgeno a estudiar puede ser otro anticuerpo. Esta situacin se
da, por ejemplo, en la identificacin de anticuerpos contra el bacilo de
la tuberculosis, entre otros.

Diagnstico de hepatitis B:
Al igual que con el VIH, el virus de la hepatitis B puede ser
reconocido fcilmente mediante un ELISA en sangre.
Deteccin de grmenes en heces:
ciertos virus pueden detectarse en las heces cuando provocan
diarreas; los ms frecuentes son los rotavirus. A veces no se
detecta al propio germen, sino que se pueden identificar toxinas que
produce el mismo, como sucede con el E. coli
Deteccin de antgenos en orina:
es una prueba muy til y sencilla para identificar grmenes
causantes de neumonas. En las infecciones respiratorias las
bacterias pasan a la sangre y de ah a la orina, por lo que se pueden
identificar antgenos fcilmente con un ELISA, que orienta el
tratamiento antibitico directamente.

Preparacin para ELISA

Si te van a realizar un estudio mediante la tcnica de ELISA estas son las cuestiones
que debes tener en cuenta:

Duracin: la recogida de la muestra suele durar muy poco tiempo, lo mismo que
tarda en realizarse una analtica sangunea. Suele tardar segundos o minutos. Los
resultados tardan bastante ms, habitualmente varios das. En situaciones de
urgencia se puede realizar un ELISA y obtener los resultados en una hora
aproximadamente.
Ingreso: nunca requiere ingreso. La recogida de la muestra se realizar en el
momento. Tambin se puede dar el caso de que te realicen la prueba durante un
ingreso para identificar la causa de tu enfermedad, pero en este caso el motivo del
ingreso ser tu estado de salud.
Es necesario ir acompaado?: no, tan slo se recibe un pinchazo cuando la
muestra que se tiene que tomar sea sangre, y no suele ser muy doloroso. Puedes
acudir solo a la clnica, caminando o conduciendo, y volver del mismo modo.
Medicamentos: no es necesario tomar ningn medicamento previo. Hay que decirle
al mdico todos los medicamentos que se estn tomando en ese momento. Algunos
medicamentes pueden dar falsos negativos de la prueba, por ejemplo si
tomas antibiticos y quieren detectar el germen que produce la infeccin.

Comida: puedes comer con normalidad, no hace falta ir en ayunas. Pero si la


muestra es sangunea es frecuente que aprovechen el pinchazo de la analtica para
medirte otros parmetros en sangre (azcar, colesterol, etctera

Documentos: es recomendable llevar tu tarjeta sanitaria, aunque la mayor parte de


las veces es suficiente que lleves el volante con el que el mdico te mand la
prueba.

Embarazo y lactancia: se puede realizar esta prueba con normalidad en cualquiera


de las dos situaciones. De hecho, es una prueba que suele realizarse en
los controles peridicos de embarazo establecidos.

Contraindicaciones: no existen contraindicaciones. Tan solo hay que valorar si


realmente merece la pena realizar la prueba y si los resultados serviran de algo

Que es antgeno y anticuerpo ?


Se entiende como antgeno (Ag) cualquier
molcula que puede ser reconocida
especficamente por cada uno de los
componentes del sistema inmunolgico. En un
sentido ms estricto, el antgeno
es cualquier molcula capaz de
inducir la produccin de anticuerpos
especficos y la activacin de
linfocitos T, tambin precisos.

Como se hace el ELISA


El anlisis por ELISA lo pedir el mdico cuando sea necesario y
sea la mejor arma diagnstica para estudiar tu enfermedad. Para
hacerla, te tomarn primero la muestra sobre la que se realizar el
ELISA.
Segn el lugar de recogida de la muestra se recomienda adoptar
unas u otras medidas. Por ejemplo, si es uretral no debes orinar las
dos horas previas; si es un esputo es mejor recogerlo a primera hora
de la maana, y si se trata de una muestra de sangre es mejor que
coincida con un pic de fiebre..
Para que sepas cmo se hace un ELISA resumimos los pasos a
continuacin:

Se deposita la muestra recogida en bandejas con pequeos pozos. Al


lado habr pozos para muestras que se sepan que estn
contaminadas y libres de antgenos conocidos.

Una vez depositada la muestra se aaden los anticuerpos que


detectan los antgenos si los hay. En el otro extremo de los anticuerpos
hay enzimas acopladas.
Si es un ELISA indirecto se pueden aadir otros anticuerpos que
detecten los anticuerpos previos; as se ampla la seal.
Se realiza un lavado de los pocillos; as se eliminan los anticuerpos
que no estn unidos a antgenos.

Se aade un sustrato, es decir, una sustancia qumica


que reacciona con las enzimas de los anticuerpos que
queden. Al reaccionar se forman metabolitos.
Por ltimo, se mide la cantidad de metabolito que hay
mediante diferentes tcnicas, como la
espectrofotometra.

lector de placas

Microplacas de poliestireno

Lavador de placas

Tipos
ELISA directo:

Es la forma ms bsica de realizar la tcnica. Consiste en


recoger una muestra a estudiar y ponerla en un pocillo (un
recipiente pequeo) en frente de una muestra igual pero
contaminada con el germen a estudiar, y otra muestra en la
que se sabe que no hay germen. Se aplica el anticuerpo
con la enzima en los tres pozos y se compara la muestra a
estudio con las otras dos.

ELISA indirecto:

Se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en


este caso se aade primero un anticuerpo sin enzima y
despus uno con enzima. De esa forma, la seal que
emite el enzima es mucho ms potente y la prueba es
ms sensible.

ELISA sndwich:

En este caso en los pocillos primero se aade un


anticuerpo y despus la muestra, para que los antgenos
queden ya retenidos en el fondo del pozo. Despus se
aade el anticuerpo con la enzima. Es la forma ms
eficaz de realizar la prueba.

RESULTADOS DE ELISA
Los resultados del ELISA pueden tardar varios das desde
que se toma la muestra para estudiarla. Para recogerlos hay
que acudir a otra cita, ya que la documentacin por s sola no
puede ser interpretada por el paciente. En la consulta el
mdico podr realizar la interpretacin ms adecuada del
resultado.

El ELISA se expresa en valores cualitativos, es decir, o


es positivo o es negativo. Slo el ELISPOT puede aportar
resultados cuantitativos, pero no hay unos lmites estndar
para todos los estudios. Cuando el ELISA es positivo quiere
decir que se han detectado antgenos en la muestra
recogida, y por tanto hay grmenes presentes. Cuando es
negativa, no se han podido detectar antgenos y se
considera que la muestra no est contaminada.

Aunque es una prueba muy eficaz puede proporcionar


falsos positivos o falsos negativos. En las situaciones en
las que el ELISA sea determinante y cambie radicalmente
la actitud del mdico, es habitual realizar la prueba dos
veces seguidas, o realizar otra para asegurar el
resultado. Es el caso de la prueba del VIH: su
diagnstico es determinante para una persona, y por eso
se realizan dos ELISA seguidos y otra tcnica ms que
permite confirmar el diagnstico con mucha ms
fiabilidad.

Prueba ELISPOT
Una variante de la prueba ELISA, llamada ELISPOT, es
capaz de detectar cuantitativamente el nmero de clulas
en una poblacin productora de anticuerpos especficos
contra un antgeno determinado o un antgeno contra el
que se dispone de un anticuerpo especfico. Aqu, dichas
placas se recubren con el antgeno reconocido por el
anticuerpo de inters o con el anticuerpo especfico para
el antgeno cuya produccin se valora. Seguidamente, se
aade a las placas recubiertas una suspensin de la
poblacin celular que se investiga e incuba.

Las clulas se disponen en la superficie de la placa, y las


molculas secretadas reactivas a las molculas de captura
son unidas en la cercana de las clulas secretoras,
producindose un anillo de complejos antgeno-anticuerpo
alrededor de cada clula que sintetiza la molcula de
inters. Despus, la placa se lava y un anticuerpo unido a
enzima especfico para el antgeno secretado, o para la
especie de anticuerpo secretado, se aade y deja que se
unan. El posterior revelado del ensayo mediante adicin
de un sustrato cromgeno o emisor de luz adecuado indica
la posicin de cada clula productora de anticuerpo (o de
antgeno) como un punto de color o luz.

Conclusiones

El E.L.I.S.A es una herramienta util que ayuda al diagnostico y


seguimiento de muchas enfermedades infecciosas.
No debe utilizarse como tcnica nica.
Se debe tener conocimiento husped-parasito en la interpretacin.
Exactitud y precisin
Exactitud : el valor verdadero o real de una muestra con un margen
estrecho de error que no afecta la interpretacin de resultados.
Precisin : la posibilidad de ejecutar repetidas pruebas con las
mismas muestras y obtener resultados muy pocos diferentes .

gracias