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Obtencin de glucgeno a partir de

hgado de rata y su caracterizacin


qumica y cromatografica.
Bioqumica general.
Gpo. 3IV2 Secc.2

INTRODUCCIN
El glucgeno, el polisacrido de los animales,
se halla presente en todas las clulas pero su
presencia es ms predominante en el
msculo esqueltico y en el hgado, en donde
aparece
en
forma
de
grnulos
citoplasmticos.
La estructura primaria del glucgeno se
parece a la amilopectina, pero el glucgeno
se halla mucho ms ramificado, con puntos
de ramificacin que aparecen cada 8 a 12
restos de glucosa.
En la clula el glucgeno se degrada para su
empleo metablico por intervencin de la
fosforilasa del glucgeno, que escinde
fosforoliticamente los enlaces (1-4) del
glucgeno secuencialmente.
La estructura muy ramificada del glucgeno,
que posee muchos extremos no reductores,
permite la movilizacin rpida de la glucosa
en las ocasiones de necesidad metablica.

El glucgeno muscular funciona como


fuente fcil de disponibilidad de
unidades de hexosa para la gluclisis
dentro del propio msculo. El glucgeno
heptico sirve en gran medida para
exportar unidades de hexosa para la
conservacin de la glucosa sangunea,
en particular entre comidas.
Por su parte el glucgeno muscular solo
disminuye de manera significativa
despus de un ejercicio vigoroso
prolongado. Las enfermedades por
almacenamiento de glucgeno son un
grupo de transtornos hereditarios que se
caracterizan
por
la
deficiente
movilizacin o deposicin de formas de
glucgeno anormales, que puedan
causar debilidad muscular e incluso la
muerte.

1. Obtencion de
glucgeno.
a) Sacrificar una rata con ter (sin
excitarla).
b) Extraer rpidamente el hgado y
lavarlo al chorro de agua.
c) Pesar y cortar en pedazos
pequeos, lavar nuevamente
con agua fra.
d) Colocar el hgado en un mortero,
previamente sumergido en hielo,
aadir acido tricloroacetico al
10% en proporcin de 1 ml/g de
tejido y 0.5g de arena lavada.
Triturar hasta formar pasta
homognea.
e) Centrifugar por 5 minutos a 200
rpm.

f)

Decantar el liquidosobrenadante
en un vaso de 250 ml y
mantener en hielo.

g) Lavar mortero y pistilo con 10 ml


de acido tricloroacetico al 5%y
en este liquido resupender el
precipitado de la centrifugacin
anterior, homogeinizando bien
h) Dejar en reposo 5 min,
centrifuga a 2000 rpm por 5 min.
i)

Decantar sobrenadante y
reunirlo con el obtenido en inciso
f)

j)

Aadir dos volmenes de etanol


de 96 por volumen de
sobrenadante. Agitar y dejar en
reposo hasta floculacin del
glucgeno. Si no sucede, aadir
un poco de NaCl y colocarlo a
bao maria a 37C, hasta
formacin de floculo.

k) Centrifugar a 2000 rpm por 5


min.

l)

Desechar sobrenadante y
resuspender precipitado con 5
ml de agua destilada.

m) Volver a precipitar con 2


volmenes de etanol 96.

n) Centrifugar a 2000 rpm por 3


minutos.

o) Decantar y suspender con la


menor cantidad de alcohol
absoluto y pasarlo a un vidrio de
reloj. Dejar que seque y
cristalice.

Caracterizacin qumica del


glucgeno sin hidrolizar
Dentro del procedimiento de la practica,
fue necesaria llevar a cabo
una
caracterizacin qumica del glucgeno
extrado, esto para corroborar la
presencia de este, adems de descartar
la misma presencia de otras sustancias
como las protenas.
Para esto fue necesario llevar acabo 3
reacciones, las cuales fueron:
Biuret
Ninhidrina
Molish

Reaccin de Ninhidrina
Tiene como objetivo detectar los grupos -amino libres de los
aminocidos, pptidos y protenas en pH alcalino. Los aminocidos,
en general reaccionan con la ninhidrina cuando son calentados con
un exceso de la misma. Esta reaccin da lugar a la formacin de un
producto color azul o prpura. En el caso de prueba echa al
glucgeno esta debe ser negativa, en el caso de ser positiva se
concluye que en la muestra existe la presencia de alguna protena o
aminocido.

Reaccin de biuret.
Es una prueba general para protenas y pptidos de cadena no menor
de 4 unidades de aminocidos si la reaccin da positivo este tendr un
color violceo lo que significa que hay protenas y pptidos. En este
caso para la prueba del glucgeno la reaccin da negativa teniendo un
color azul claro, el cual nos descarta la presencia de protenas y
pptidos.

Reaccin de Molish
Es una prueba basada en la formacin del furfural el cual se deriva a
partir de los carbohidratos; si la reaccin da positivo se vera un anillo
color violeta en la interfase. En este caso para la prueba de glucgeno
da positivo vindose el anillo mencionado lo que significa que es claro la
presencia del glucgeno sabiendo que este es un polisacrido de la
glucosa, siendo esta una aldosa

Caracterizacin qumica del glucgeno


hidrolizado.
Hidrlisis del glucgeno
Tubo

Glucgeno
(ml)

HCl 1N (ml)

HCl 2N (ml)

HCl 4N (ml)

Amilasa
concent. (ml)

Amilasa 1:2
(ml)

NaCl al 5%

1 gota

Agua
destilada
Incubar 30

2
92

1 gota

Resultados
cida

Testigo

Enzimtica

Prueba

Fehling

++

+++

++

Lugol

Amarillo

Amarillo

Amarillo

Caf
rojizo

Amarillo

Amarillo

Seliwanoff

Porcentaje de glucgeno.

Los almacenes principales de


glucgeno en el cuerpo de los
mamferos son el msculo
esqueltico y el hgado; en
muchas otras clulas se
almacena en muy bajas
cantidades.

Porcentaje de glucgeno.

Aproximadamente 1 o 2 % del
peso hmedo del msculo en
reposo de un adulto bien
alimentado, unos 400 g, son
glucgeno; por el contrario, en
el hgado, unos 100 g son
glucgeno, entre el 6 y 8 % de
su peso hmedo. en los
animales que se almacena en
elhgado(10% de la masa
heptica) y en los msculos(1%
de la masa muscular) de
losvertebrados.

Porcentaje de glucgeno.

Datos:

Peso de la charola vaca.

Peso de la charola mas el hgado


lavado.

Peso de la charola mas el


glucgeno obtenido seco.

Clculos:

P del Hgado = P de la
charola con hgado P de la
charola vaca
P del glucgeno = P de la
charola con glucgeno P de
la charola vaca