Estructura y replicación

del material genético

Dr. Antonio Barbadilla

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Tema 6: Estructura y replicación del
material genético

1

Objetivos tema 6:
Estructura y replicación del material
genético
Deberán
Deberán quedar
quedar bien
bien claros
claros los
los siguientes
siguientes puntos:
puntos:
•Cómo
se descubrió
descubrió la
la naturaleza
naturaleza química
química del
del
•Cómo se
material
material hereditario
hereditario
•La
composición química
química de
de los
los ácidos
ácidos nucleicos
nucleicos
•La composición
•La
estructura 3D
3D del
del DNA:
DNA: naturaleza
naturaleza
•La estructura
complementaria
complementaria yy antiparalela
antiparalela de
de la
la doble
doble cadena
cadena
del
del ácido
ácido desoxirribonucleico
desoxirribonucleico (DNA)
(DNA)
•La
extraordinaria capacidad
capacidad explicativa
explicativa del
del
•La extraordinaria
modelo
modelo del
del DNA
DNA de
de la
la función
función biológica
biológica
fundamental
fundamental de
de esta
esta molécula
molécula
•La
•La replicación
replicación semiconservativa
semiconservativa
•Enzimología
de la
la replicación
replicación
•Enzimología de
Dr. Antonio Barbadilla

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Tema 6: Estructura y replicación del
material genético

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La transformación bacteriana en
Streptococcus pneumoniae (Griffith 1928)
Rugosa

Muerte por neumonía

Cepa resistente

Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

No muere
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Tema 6: Estructura
Muere y replicación del
material genético

3

¿Cuál es el Principio transformante?

Principio
Rugosa

Lisa

Dr. Antonio Barbadilla

4

Tema 6: Estructura y replicación del
material genético

4

Colin MacLeod

El elemento transformante
es el DNA (1944)

Maclyn McCarty
Oswald
Avery

Ver animación
experimento
tranformación
bacteriana
Dr. Antonio Barbadilla

Tema 6: Estructura y replicación del
Sólo DNA produce transformación

5

material genético

5

Antonio Barbadilla 6 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 6 .Experimento de Alfred Hershey y Martha Chase con fagos (1952) Bacteriófago T4 El DNA es el material infeccioso Dr.

Componentes de los ácidos nucleicos adenina timina guanina citosina Dr. Antonio Barbadilla 7 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 7 .

Antonio Barbadilla 8 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 8 . Proporción de purinas = Proporción de pirimidinas A+G=C+T 2.Reglas de Chargaff 1. G=C Dr. A=T 3.

Crick resuelven la estructura tridimensional del DNA (Nature 171: 737-738) Watson y yo hemos encontrado el secreto de la vida Dr. Antonio Barbadilla 9 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 9 .1953. Año culminante: J. Watson y F.

1953. Año culminante: Dos líneas de evidencia: •Reglas de Chargaff •Fotografías de difracción de rayos X Dr. Antonio Barbadilla 10 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 10 .

Significado reglas de Chargaff Dr. Antonio Barbadilla 11 Complementariedad de las basesy replicación del Tema 6: Estructura material genético 11 .

Difracción de rayos X Hemoglobina Linus Pauling Dr. Antonio Barbadilla 12 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 12 .

Interpretación del patrón difracción de rayos X del DNA Rosalind E. Antonio Barbadilla 13 Crick del Tema 6: Estructura y replicación material genético 13 . Franklin Dr.

Antonio Barbadilla .Modelo en metal del DNA J. formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas). Crick Concluyen: La estructura del DNA es una doble hélice. La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de 14las Tema 6: Estructura y replicación del material genético 14 cadenas Dr. Watson y F.

Antonio Barbadilla 15 La estructura se mantiene gracias a enlaces de hidrógeno entre las bases nitrogenadas que se encuentran orientadas hacia el interior de las cadenas Tema 6: Estructura y replicación del 15 Doble hélice. formada por cadenas orientadas en direcciones opuestas (antiparalelas). material genético .Dr.

Antonio Barbadilla 70 80 90 100 110 Temperatura de fusión (desnaturalización) Tema 6: Estructura y replicación del 16 material genético 16 .Desnaturalización del DNA •Separación de las dos hebras por calor •Una mayor proporción G-C tiene una mayor temperatura de desnaturalización (‘fusión’) Porcentaje G + C 100 80 60 40 20 Dr.

Antonio Barbadilla 17 Hélices levógiras y dextrógiras Tema 6: Estructura y replicación del material genético 17 .Dr.

Dr. Antonio Barbadilla 18 DNA-B dextrógira Tema 6: Estructura y replicación del material genético 18 .

Antonio Barbadilla 19 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 19 .Ver Ver artículo artículo Nature Nature 1953 1953 Dr.

Antonio Barbadilla 20 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 20 .Dr.

C) •El mecanismo de replicación exacta de los genes •La naturaleza química de las mutaciones •Por qué la mutación. Antonio Barbadilla 21 material genético .T. la recombinación y la expresión génica son fenómenos separables a nivel molecular Tema 6: Estructura y replicación del 21 Dr.G.La estructura del DNA suministra una explicación asombrosamente simple del fenómeno de la herencia La estructura explica: •La naturaleza de la secuencia lineal de los genes (información digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monómeros A.

Esencial a la relación íntima entre estructura molecular y función genética del DNA es el concepto de molde La complementariedad de las bases nitrogenadas permite que la secuencia de una cadena sencilla de DNA actúe como un molde para la formación de una copia complementaria de DNA (replicación) o de mRNA (transcripción) Dr. Antonio Barbadilla 22 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 22 .

Esto es para mí la prueba verdadera de la existencia de Dios Salvador Dalí Antes pensábamos que nuestro futuro estaba en las estrellas. James Watson Dr. Antonio Barbadilla 23 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 23 . Ahora sabemos que está en nuestros genes.Y ahora las declaraciones de Watson y Crick sobre el ADN.

Una estructura tan bonita tenía. que existir Dr. por fuerza. Antonio Barbadilla 24 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 24 J. Watson .

por fuerza. Watson 25 .Una estructura tan bonita tenía. que existir Dr. Antonio Barbadilla 25 Tema 6: Estructura y replicación del material genético J.

C (cristal aperiódico) 26 Dr.El DNA contiene información digital cuaternaria en secuencias unidimensionales de monómeros A.G.T. Antonio Barbadilla Tema 6: Estructura y replicación del material genético 26 .

que mientras este planeta ha ido girando según la constante ley de la Hay grandeza esta concepcióny de gravitación.. a partir deplaneta una molécula girando según la constante ley de helicoidal asombrosa. Antonio Barbadilla 27 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 27 . seen han desarrollado se la están vida.. infinidad de formas cada vez más bellas y maravillosas Charles Darwin Dr. infinidad delaformas gravitación. han desarrollado y se están cada vez mássebellas y maravillosas desarrollando..Hay grandeza en esta concepción de la vida... a partir de un comienzo Charles Darwintan sencillo. que mientras este ha ido desarrollando..

Antonio Barbadilla 28 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 28 .Dr.

Replicación del DNA Dr. Antonio Barbadilla 29 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 29 .

25 de Abril 1953 It has not escaped our notice that the specific pairing we have postulated immediately suggests a possible copying mechanism for the genetic material. Antonio Barbadilla 30 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 30 . Dr.

Antonio Barbadilla 31 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 31 .Posibles modelos de replicación Dr.

Antonio Barbadilla 32 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 32 .Replicación del DNA •Semiconservativa: una cadena sirve de molde para una nueva cadena •El experimento de M. Meselson y F. Stahl (1958) demuestra que la replicación es semiconservativa Mathew Meselson Frank Stahl Dr.

Antonio Barbadilla 33 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 33 .Dr.

Sustituye bases mal emparejadas (10-5) por correctas (10-7). coli •DNA polimerasa I (rellena huecos y repara) •DNA polimerasa II y III (función principal en la síntesis) •Añade bases en ambas cadenas en la dirección 5’  3’ •Requiere un 3’ OH final •Eucariotas •5 polimerasas  y  principal en replicación . mecanismos de reparación Dr. Antonio Barbadilla adicionales la reducen hasta 10-10 34 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 34 .  y  exonucleasas •Corrección de pruebas: actividad 3’  5’ exonucleotídica.Replicación del DNA •Enzimas que sintetizan (replican) el DNA •E.

Antonio Barbadilla 35 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 35 .Las polimerasas conocidas añaden nucleótidos solamente en la dirección 5’  3’ 3’ 5’ Dr.

Dr. Antonio Barbadilla 36 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 36 .

Antonio Barbadilla 37 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 37 .¿Por qué no hay una enzima que polimerice en la dirección 3´-> 5? No funcionaría la corrección de errores por falta de un trifosfato que suministre la energía de enlace covalente azúcar-fosfato Dr.

Adición 5’3’ Dr. Antonio Barbadilla 38 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 38 .

P P P P P P P P P P P P OH PP P P P P OH OH 3’ 5’ PP + H2O P P P P P P P P P P P P 39 OH OH P PP OH Dr. Antonio Barbadilla Tema 6: Estructura y replicación del material genético 39 .

Antonio Barbadilla 40 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 40 .Adición 3’5’ (hipotética) Dr.

P P P P OH P P P P P P P P OH P P + H2O P P P P P PP OH PP P PP P P P OH 5’ 3’ P PP P P P P 41 P PP OH OH Dr. Antonio Barbadilla Adición 3’5’ (hipotética) Tema 6: Estructura y replicación del material genético 41 .

Corrección de errores Dr. Antonio Barbadilla 42 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 42 .

Antonio Barbadilla Adición 5’3’ Tema 6: Estructura y replicación del material genético 43 .P P P P P P P P P P P P OH PP POH P P P P OH 3’ 5’ PP + H2O P P P P P P P P P P P P 43 OH OH Dr.

OH P P P P P P P P P P PP 44 POH Dr. Antonio Barbadilla P P P P OH 5’ 3’ Adición 3’5’ (hipotètica) Tema 6: Estructura y replicación del material genético 44 .

cebador sólo inicio) y discontinua (cadena retrasada) •Discontinua •Cebador (pequeño RNA 2-60 nucleótidos añadido por enzima primasa o RNA pol que provee 3’ OH. Antonio Barbadilla 45 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 45 . •Fragmento de Okazaki por DNA pol III (1500 bp en procariotas y 150 en eucariotas) •Pol I elimina cebador 3’ -> 5’ y llena huecos (gap) •Ligación (DNA ligasa.Replicación del DNA (2) •Replicación: continua (cadena adelantada. enlace fosfodiéster) Dr.

Dr. Antonio Barbadilla 46 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 46 .

Dr. Antonio Barbadilla 47 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 47 .

Polimerasa III Polimerasa I Dr. Antonio Barbadilla 48 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 48 .

Antonio Barbadilla 49 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 49 . por lo que debería eliminarse y el RNA puede detectarse y eliminarse fácilmente por la DNApol I Dr.¿Por qué el cebador es RNA? El cebador es más proclive al error.

maquinaria molecular •Dímero de la DNA pol III (núcleos catalíticos) •Primosoma: formado por dos enzimas •Primasa •Helicasa (desenrolla el DNA) •Proteína de unión a cadena sencilla. estabiliza el DNA de cadena sencilla) •Topoisomerasas tipo I (rotura una cadena) y II (rotura de dos cadenas) junto a DNA ligasa -> Relajación del superenrollamiento Tema 6: Estructura y replicación del 50 Dr. Antonio Barbadilla 50 material genético . ssb (Unión Y.Replicación del DNA (3) El replisoma: complejo enzimático de la replicación que coordina la síntesis de las dos cadenas.

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr. Antonio Barbadilla 51 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 51 .

Antonio Barbadilla 52 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 52 .El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr.

Antonio Barbadilla 53 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 53 .El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria DNA pol III + abrazadera beta -> Enzima procesiva Dr.

El replisoma: una maquinaria de replicación extraordinaria Dr. Antonio Barbadilla 54 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 54 .

Antonio Barbadilla 55 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 55 .Topoisomerasas Dr.

Replicación del DNA (4) •Origen de replicación: •Secuencia reconocida (Ori C en E. Antonio Barbadilla 56 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 56 . coli) por proteínas iniciadoras. Varios orígenes en eucariotas •La replicación es bidireccional Horquilla replicación Dr.

En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en levaduras y 60000 en mamíferos). La replicación es bidireccional Dr. Cada unidad de replicación es un replicón. Antonio Barbadilla 57 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 57 .

Cada unidad de replicación es un replicón. La replicación es bidireccional Dr.En el DNA nuclear de eucariotas hay muchos orígenes de replicación (~500 en levaduras y 60000 en mamíferos). Antonio Barbadilla 58 Tema 6: Estructura y replicación del material genético 58 .

The Birth of Molecular Biolog y Dr.DNA DNA berkeley DNA Learning Center Beginner's guide to Molecular Biology Glosario de Genética molecular DNA Replication Tema 6: Estructura y replicación del Animación de la replicación material genético 59 .Links de interés Watson-Crick original paper (1953 Nature) Trabajos estelares del descubrimiento de la doble hé lice DNA: el secreto de la vida (Animación) Celebración 50 aniversario descubrimiento de la dobl e hélice en la UAB DNA Structure The Search for DNA . Antonio Barbadilla 59 Image Library of Biological Macromolecules .

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