Universidad Nacional Autnoma de

Mxico
Tcnica de Quimioluminiscencia
Anlisis Bioqumicos Clnicos Especiales
Profesores:
Vernica Ruiz Solorio
Ren Damin Santos
Alumna: Cynthia Itzel Venegas A.

FUNDAMENTO DE LA QUIMIOLUMINISCENCIA
Luminiscencia

emisin de luz
asociada a la disipacin de energa
con
una
sustancia
electrnicamente excitada.

Si

los
electrones
de
un
componente
luminiscente
son
estimulados en estado normal,
estos dan energa en forma de luz
cuando ellos regresan a su estado
fundamental.

QUIMIOLUMINISCENCIA
INTRODUCCION

Es un fenmeno qumico en el cual una reaccin (enzima-sustrato) libera energa

(reaccin exotrmica) en forma de luz, debido a la excitacin de electrones que
al retornar a su estado original emiten radiaciones en el espectro visible.

Absorcion
de
energia

Figura 1: Movimiento entre rbitas electrnicas. Un tomo de hidrgeno en

su estado fundamental.
Un
electrn
se
encuentra en rbita
n=1.
El electrn cae a la
posicin original en el
estado
fundamental
(rbita n = 1).

Cuando el tomo de
hidrgeno absorbe cierta
energa, es promovido a un
estado energtico superior (
n = 2) y ahora est en un
estado
excitado
(alta
energa). Esto se indica
dibujando un asterisco (*) al
lado de la molcula.

En el proceso, un paquete de
energa (fotn) es liberado en
forma
de
radiacin
electromagntica. La longitud
de onda depende de la
cantidad de energa.

Quimioluminiscencia
directa:

Quimioluminiscencia indirecta

dos reactivos, A y B. reaccionan dando un intermedio de

reaccin en un estado electrnicamente excitado. Este
intermedio, al relajarse hasta el estado fundamental,
emite un fotn. A veces se requiere un catalizador que
disminuya la energa de activacin y aumenta el
rendimiento cuntico de la reaccin .

Marcador es el sustrato unido a Ag o Ab

mecanismo mismo para la formacin del intermedio, pero este intermedio no puede emitir directamente
el fotn para dar la QL y requiere la presencia de un fluorforo al cual le transfiere la energa, de forma
que se excita y al volver a su estado fundamental emite un fotn. El marcador es una enzima unido al Ag
o Ab.

Figura 3. Mecanismos de la
quimioluminiscencia.

la intensidad de emisin es funcin de la

concentracin de las especies qumicas, usa
fines analticos.
Limitaciones.
*dependencia de la emisin QL de factores
ambientales que deben ser controlados.
*falta de selectividad, un reactivo QL no se
limita a un nico analito.
*la emisin QL no es constante vara con el
tiempo (el flash de luz est compuesto de
una seal que se produce tras la mezcla de
los reactivos, alcanza un mximo y despus
cae hasta la lnea de base),
varia
ampliamente.
Detectar seal periodos de tiempo definidos

Figura 2. Quimioluminisencia
en funcin del tiempo.

Metodologa

Compartimiento cerrado a la luz

Se coloca la clula de reaccin con objeto de que toda la luminiscencia sea captada por el
detector. El tipo de clula va depender de que la reaccin de QL se lleve a cabo en fase
lquida, slida o gaseosa.
Debe estar sellado a luz ambiental para evitar posibles interferencias.
Debe colocar tan cerca como sea posible del detector para conseguir una mxima eficiencia
ptica.

Introduccin de la muestra y los

reactivos
los sistemas pueden clasificarse en: estticos o sistemas en flujo.

En los sistemas estticos, pequeas porciones de muestra y reactivo CL se

mezclan rpidamente en la cubeta de reaccin, frecuentemente a
temperatura controlada.

Detector
Hay cuatro requerimientos bsicos.

debe ser capaz de detectar una seal luminosa de varios rdenes de

magnitud de intensidad.

debe ser sensible al menos en la regin espectral de 400-600 nm,

idealmente en la regin completa del visible (380-750 nm).

La seal registrada por el detector debe estar relacionada

directamente con la intensidad de luz que ha llegado a l. La seal
producida por el detector debe poder ser fcilmente leda, registrada
y analizada.

La velocidad de respuesta del detector debe ser ms rpida que la

velocidad de la reaccin de QL, si no, la seal ser una versin
distorsionada de la seal original.

Acondicionamiento de la seal,
manipulacin y lectura

La corriente fotoandica procedente del fotomultiplicador es convertida en

primer lugar en voltaje con un amplificador operacional en la configuracin
corriente-a-voltaje. La seal de salida de los transductores analgicos se
convierte a digital.

PRINCIPALES APLICACIONES QUIMIOLUMINISCENTES

Las

grandes aplicaciones analticas de la QL hacen

de esta tcnica un campo de investigacin muy
interesante en una amplia variedad de disciplinas,
que incluyen tcnicas de separacin en anlisis
qumico, inmunolgico, biolgico, farmacutico,
biomdico y alimentario, control de calidad,
medicina forense etc.

VENTAJAS DE LA QUIMIOLUMINISCENCIA
Alta

sensibilidad. (ms de 100,000veces que ELISA)

Qla

(indirecta y directa) representan una alternativa

automatizada como mtodo de anlisis inmunolgico

No

emplea radioactividad.

No

genera riesgo contaminante ni ruido de fondo a la

hora de efectuar el proceso del anlisis de una muestra.

Los

resultados son rpidos (generalmente a los 15 min).

Equipos

automatizados de fcil manejo.

Relativamente

bajo costo

Bibliografia

http://www.revistasbolivianas.org.bo/pdf/vc/v1n2/v01n2a10.pdf

http://www.scienceinschool.org/2011/issue19/chemiluminescence/spanish

http://katnishzescience.blogspot.com/2011/01/principios-de-la-quimiolumini
scencia.html

http://aportes.educ.ar/quimica/nucleo-teorico/influencia-de-las-tic/lasnuevas-herramientas-de-medida/innovacion_tecnologica.php