ESTUDIO MICROSCPICO

DE LOS
MICROORGANISMOS

Lic. TM Manuel
 Preparaciones
Microbiolgicas
Preparaciones en fresco (microorganismos vivos)
Preparaciones fijas y teidas (microorganismos
muertos)
 Frotis
Una capa delgada de muestra extendida sobre un
portaobjetos que permite el paso de la luz a travs de
ella.

Impront Gota de cultivo Cultivo

a lquido slido
resuspendido

Cinta adhesiva Hisop

Frotis
transparente o
sanguneo
 Tinciones

POSITIVAS NEGATIVAS

Se observa teida la El fondo se tie de

clula sobre un fondo oscuro para observar
claro. clulas o estructuras
refringentes.

Frotis Cryptococcus neoformans

Sanguneo
 Bacillus

Tinciones megaterium.
Tincin simple con
cristal violeta.

SIMPLES
Frotis sanguneo
Se utiliza un solo con
colorante (bsicos). Yersinia pestis.
Azul de metileno Tincin de
Safranina Wrigth.
Cristal violeta
Mdula sea.
COMPUESTAS Tincin de
Se utilizan dos ms May
colorantes. Pueden usar Grnwald-
mordentes y Giemsa.
decolorantes
Giemsa Trypanosoma
sp
Wrigth en
May Grnwald sangre.
(Eosina-Azul de metileno) Tincin de
 Tinciones Tincin
negativa de
cpsula.
Streptococcus
Tincin negativa pneumoniae.
de Cpsula

Tincin de
SELECTIVAS endosporas.
Bacillus
Son utilizadas para subtilis.
dar color y aislar
partes especficas de
los microorganismos
Tincin
Endosporas de
Flagelo flagelos.
Ncleo Proteus
sp
 Tinciones
Tincin de
Ziehl-
Neelsen.
DIFERENCIALES
Reaccionan de manera
diferente entre las
distintas clases de Tincin
de
bacterias.
Gram.
Ziehl-Neelsen
Gram

Tincin
de Gram.
 Colorantes
Compuestos coloridos que al combinarse con otras sustancias les
imparten color; estn formados por un grupo cromforo que es la
parte responsable del color, y un grupo auxcromo que al formar
sales le permite disociarse y combinarse. Mordente : compuesto
qumico intensificador de color.

cidos. Bsicos.
El cromforo es el anin El cromforo es el
de la molcula. catin de la molcula.
Br Br
NaO O O N Cl -
Br Br
S
COO- Na + (CH3)2N N(CH3)2
+

Azul de metileno
Eosina
 Tcnicas de tincin
Frotis

Tincin simple
Colorante bsico
(1 minuto)

Enjuagar con agua

Bacillus anthracis Neisseria Pseudomonas Staphylococcus

Tincin simple gonorrhoeae. aeruginosa. aureus.Tincin
con cristal Tincin simple Tincin simple con
violeta. con safranina. simple con azul de
safranina. metileno.
 Tcnicas de tincin

Tincin de
cpsula

Extendid
Streptococcus pneumoniae
o
Muestra + tinta china
o nigrosina

Secar al aire

Safranina de Gram o
Cristal Violeta (1
Acinetobacter calcoaceticus
minuto)
 Tcnicas de tincin
Tincin de
endosporas

Verde de maquila 5%
con emisiones de vapor
de agua (10 minutos)

Bacillus subtilis
Lavar con agua

Safranina 0.5%
(1minuto)

Clostridium tetani
 Tcnicas de tincin
Tincin de
flagelo

Colorante primario.
Para- rosa anilina
Proteus vulgaris

Mordente. Acido
tnico

Colorante de
contraste. Azul
de metileno

Vibrio cholerae
 Tincin de Gram

Colorante primario.
Cristal violeta 1% en
solucin de oxalato de
amonio al 0.85% (1
minuto)

Mordente. Lugol I/KI 1g/2g Streptococcus pyogenes

en 300 mL de agua (1
minuto)

Decoloracin. Alcohol-
Acetona 70:30. Hasta
eliminar el exceso de
colorante

Colorante de contraste. Bacilos Gram

Safranina 0.25% (1 negativos y
minuto) levaduras
 Bacilo
Tincin de Ziehl- cido
Alcohol
Neelsen Resistente
(BAAR)
Colorante primario:
Fucsina fenicada con
emisiones de vapor de
agua (10 minutos)
M
y
c
o
b
a
c
t
Colorante de contraste. e
Azul de metileno de r
Mycobacterium
i
Loeffler (1 minuto)
tuberculosis
u
 Fijar carbol- fucsina calentar Tincin
de
Ziehl-
Neelsen

Mantener humedo calentar lavar con agua

Contrastar con azul

Decolorar con ETOH-HCl Observar 1000X
de metileno
Nocardia sp.

Bacterias filamentosas,
Acido-Alcohol-Resistentes
Microscopa
Microscopa
 Microscopa

Las bacterias
y las clulas
de arqueas
tienen aprox.
15
micrmetros
(m) largo.

Comparacin de tamao entre varios tomos, molculas y microorganismos.

Microscopa ptica y
electrnica
 Tipos de microscopas
ptica de campo claro ptica de campo oscuro

Contraste de Diferencial de
fases contraste
de interferencia (DIC).
 Tipos de microscopas
Confocal De
fluorescencia

Electrnica de Electrnica de
barrido transmisin
 En la microscopa de fluorescencia, el
especmen es cubierto con un colorante
fluorescente y se ilumina con luz ultravioleta.

Microscopa de fluorescencia de clulas esporulantes de B.

subtitlus
La microscopa electrnica provee imgenes
detalladas de clulas, partes celulares,
Los electrones son absorbidos, reflejados o
y virus.
transmitidos dependidendo de la densidad
de las estructuras en la muestra.
El lmite de resolucin es aprox. de 2nm.

Microscopa
electrnica de
Transmisin (TEM)
Confocal image of some dividing cells that
are triple labeled for Golgi apparatus
(green), microtubules (red), and DNA (blue).
Microscopa