Importancia de la Citometra de flujo en el

Diagnstico de Hemopatas Malignas

LAURA J. RABELO CARRASCO

LABORATORIO DE HEMATOLOGA ESPECIAL
SERVICIO DE HEMATOLOGA
UMAE HECMN SIGLO XXI
 Funcin de los Laboratorios de
Diagnstico en Hemopatas Malignas
por Citometra de Flujo

a) Establecer Diagnstico

b) Pronstico

c) Evaluacin del Tratamiento va deteccin

de EMR
Cmo se establece un diagnstico?

-Origen y funcin de las clulas

hematopoyticas normales
-Caractersticas morfolgicas
de la MO y SP normales
- Expresin de sus marcadores
durante su diferenciacin

Dao medular

Pb. Hemopata
 ESCENARIOS CLNICOS

SLP
LINFOMAS
AA??
SMD??
HPN??

MO
AFECTADA

Falla Medular
LEUCEMIAS (SMD, AA)
HPN
Morfologa y citoqumicas

1976-Clasificacin FAB
LLA y LMA
1985- LMA-M7
1986-Clasificacin MIC
1991- LMA-M0
1994- CD45
1995- Identificacin de
Aberraciones fenotpicas
2008- Clasificacin WHO
Expresin de marcadores durante la
diferenciacin de las clulas
hematopoytica
 Citometra de Flujo(CF)
Tecnologa que permite evaluar
simultneamente diversas caractersticas
de partculas y clulas.
 Parmetros de superficie
Parmetros extracelulares

Parmetros
nucleares

Parmetros citoplasmticos
MDULA SEA SANGRE PERIFRICA
INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA
 Fluorescencia
La intensidad de fluorescencia es
proporcional al nmero de sitios de unin

FITC FITC
FITC

FITC
FITC
Nmero de eventos

FITC FITC
FITC

FITC
FITC

Intensidad de fluorescencia escala logaritmica

 Utilidad en la clnica

Diferenciacin Celular
Inmunotipificacin de Hemopatas (LA, SLP, SMD,
HPN..)
Cuantificacin de clulas CD34+
Estudio de funcin plaquetaria
Oncogenes
Estudios de resistencia a drogas
Estudio de Citocinas Intracelulares
Estudio de DNA y ciclo celular
Deteccin de EMR
Determinacin de subpoblaciones CD4 y CD8
 DIFERENCIACIN

Large Small Immature Mature

Pro-B Pre-B I Pre-B II Pre-B II Pre-B II

CD34+ CD34+ CD34+ CD34- CD34- CD34- CD34- CD34-

CD22+ CD22+ CD22+ CD22+ CD22+ CD22+ CD22+ CD22+
CD10- CD10+ CD10+ CD10+ CD10+ CD10+ CD10+ CD10-
CD19- CD19- CD19+ CD19+ CD19+ CD19+ CD19+ CD19+
CD20- CD20- CD20- CD20+ CD20+ CD20+ CD20+ CD20+
CD79a+ CD79a+ CD79a+ CD79a+ CD79a+ CD79a+ CD79a+
TdT+ TdT+ TdT- TdT- TdT- TdT- TdT-
cyIg- cyIg+ cyIg+ cyIg+ sIgM+ sIgM+
Pre-BCR+ Pre-BCR- sIgM- sIgD- sIgD+
IGH DJ VDJ

IGK rearranged deleted (in Ig+ cells)

IG rearranged (in Ig+ cells)

 Diferenciacin T Ag-independiente

SUBCAPSULAR CORTICAL MEDULAR

Timocito I (<10%) Timocito II (80%) Timocito III (<10%)

CD8-
CD7+ CD2+ CD1a+
CD4+ CD4+

TdT+ TdT+ TdT+ CD71+,- CD71+,-

CD7+ CD7+
CD38+ CD38+
CD71+,- CD71+,- CD71+,- CD2+ CD2+
CD2+,- CD7+ CD7+ CD5+ CD5+
CD38+,- CD38+,- CD38+,- CD1a- CD1a-
CD34+ CD34- CD2+ CD45+++ CD45+++
HLADR+ HLADR- CD5+ CD3+/TCR CD3+/TCR
CD5+,- CD5+ CD4+
CD45+ CD45+ CD8+
CD44+ CD44- CD45++
CD8+ CD8+
cCD3+ cCD3+ cCD3+/CD3+d/preTCR
CD4-
TCR reordenamientos deleciones (en la mayora de las clulas TCRab+)
TCR reordenamientos
TCR reordenamientos: D-J V-DJ
TCR
TIMO reordenamientos (en cels TCRab+)
SP
Van Dongen et al, 2002; Blom et al 1999
 MDULA SEA

Cell complexity

granularity

Cell size
CD45
 cMPO+d/++
HLADR+/-
CD45+d/+
CD117+/-
CD33+/-
CD64+/-
CD13+/-/+
CD11b-/+
CD15/+++
CD16-/+++
CD10-/+
CD66c-/++

cMPO+d/+/+d
HLADR+/++
CD45+d/+
CD117+/-
CD33+d/++
CD64+d/++
CD13+/-/+
CD11b-/+
CD15-/+++/+
CD16-
CD10-
CD66c
CD300e
CD14
CD35
cMPO-
HLADR+/-
CD45+d/-
CD117+/-
CD105+d/+/- Progenitores
CD71-/+++
CD36-/+++
CD33+d/-
CD13+d/-
CD11b-
CD61-
 Caracterizacin Inmunofenotpica de
clulas neoplsicas

a) Identificacin de clulas de diferente

linaje y estado de maduracin

b)Deteccin de clulas anormales a

travs de la identificacin de la
expresin de antgenos que difieren de
lo normal.
 c) Documentacin detallada del
fenotipo de la poblacin anormal y la
comparacin con la contra parte de
clulas normales.
Cell complexity

granularity

Cell size
CD45
Deteccin de clulas anormales a travs de la identificacin de
la expresin de antgenos que difieren de lo normal.
Identificacin
cuantificacin

Mieloide
55%
Monocitoide
5%
Eritroide
36%
Progenitores
3%
cuantificacin

Blastos 87%
Linfocitos 13%
 Caracterizaci
n

Blastos 87% CD10+/CD19+

+/CD20+
+/CD21+/-/CD34+/-/CD38+/CD79a
+/TDT-/+/IgMcy+
 Leucemias Mieloblsticas Agudas

M0: CD34, CD33 o CD13, MPO

M1: CD34, CD117,CD11b, CD13,CD33, MPO
M2: CD117, CD11b,CD13,CD33,MPO
M3: CD34, CD117, CD13, CD33, MPO,
HLA-DR neg
o M4:CD4,CD11b,CD13,CD14,CD34,CD36,CD117,MPO
M5:CD4,CD11c,CD13,CD14,CD33,CD36,CD64,IREM2
M6: CD36, CD71.
M7: CD33, CD34,CD41/CD61, CD42
CASO 1
 CD15++het/CD11b+
CD7++

LMA con maduracin y coexpresin de CD7

CD13++/CD33++
CD117++het
 CD19+het
CASO 2

CD15+/-
 CD34+/CD38++

HLA-DR+++

MPO++

LMA sin maduracin y

coexpresin de CD19
 Clasificacin Inmunofenotpica de las
Leucemias Linfoblsticas Agudas

PreB temprana calla negativo: TdT/ CD19/

CD22/CD34/CD38/CD79a

PreB temprana calla positivo:

TdT+/-/CD10/CD19/CD22/CD34/CD38/CD79a

PreB: CD10(+/-)/CD19/CD20+het/CD22/
CD34(+/-)/CD38/CD79a/IgMc

Tipo B: CD19/CD20/CD22/CD79a/IgMs
LLA

CD34++het

CD19++/CD79a++het CD10+/CD20-/+ TdT+/-

INMUNOFENOTIPOS ABERRANTES

Infidelidad de Lnea

Perdida de la
sincrona de la
maduracin

Sobre expresin de
receptores

Defectos en el SSC
LLC
ESCENARIOS CLNICOS

SLP
LINFOMAS

Falla Medular
MO
LEUCEMIAS (SMD, AA)
AFECTADA
HPN

ENFERMEDAD
MNIMA
RESIDUAL
INMUNOFENOTIPO
CARIOTIPO Y
BIOLOGA
MOLECULAR

DIAGNSTICO Y
PRONOSTICO
AGRADECIMIENTOS

-Dr.CarlosFernndez, Dr. Orfao y Equipo del

Servicio general de Citometra de Flujo,
Hospital Universitario de Salamanca,
Espaa

-Dr. med. et phil.nat. Paula Fernndez (Jefe

del servicio de Citometra de Flujo y Banco
de Sangre) (Kantonsspital Aarau,Suiza)

-Equipo del Laboratorio y Mdico del

Servicio de Hematologa H.E.C.M.N. siglo
XXI
MUCHAS GRACIAS

rabelocl7@gmail.com