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COCOS AEROBIOS Y ANAEROBIOS

FACULTATIVOS

Tema 5 del libro tomo I.


Laboratorio de Diagnstico Clnico
Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Microbiolgico

Profesor: Jos ngel Pina Alburquerque


INTRODUCCIN
Cocos Gram +: Comprende tres
familias segn el Bergeys Manual:
Micrococaceae, Streptococaceae y
Peptococaceae. Siendo de mayor
inters clnico los gneros
Staphylococcus y Streptococcus (de
la primera y segunda familia
respectivamente).
Staphylococcus Catalasa
positivos y agrupados en
racimos.
Streptococcus Catalasa
negativos y agrupados en
cadenas.
Cocos Gram
Neisseria
Branhamella
Gnero Staphylococcus.
Concepto y caracteres generales.
En el Manual de Bergey: Pertenece a la
familia Micrococaceae (junto con los
gneros Micrococcus, Stomacoccus y
Planococcus de menor inters clnico)
Gnero Staphylococcus:
Cocos G+ inmoviles, aerobios y anaerobios
facultativos no formadores de esporas.
Agrupacin en racimo.
Catalasa positivos
Fermentan azcares
Forman parte de la flora normal de la piel
y mucosas.
Participan en procesos infecciosos (heridas,
intoxicaciones alimentarias, etc)
Gnero Staphylococcus.
Especies ms importantes
S. aureus (estafilococo dorado): La ms
patgena.
Pigmento no difusible de color amarillo.
Produce coagulasa
Fermenta el manitol
Antgenos en su pared: Polisacrido A y
Protena A
S. epidermis y S. saprophyticus:
Son oportunistas (presentes en el medio
ambiente, piel y mucosas)
No producen toxinas ni pigmento amarillo.
Coagulasa negativo y manitol negativo.
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
ANTGENOS DE SUPERFICIE
(PARED):
Polisacrido A y Protena A:
Presentan propiedades
antifagocitarias e inducen a la
liberacin de factores quimiotcticos
que intervienen en la formacin de
estructuras pigenas
(caracteristicas de las lesiones por
Staphylococcus).
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
TOXINAS:
HEMOLISINAS: Exotoxinas citotxicas muy sensibles al
calor (lisan G.R. y afectan a macrfagos y leucocitos). En
funcin del grado de hemlisis en edios de agar sangre a
37 C se clasifican:
Hemolisina : Hemlisis parcial
Hemolisina : Hemlisis total
Hemolisina : No producen hemlisis. Poca importancia
patgena aunque pueden intervenir en lesiones y heridas.
TOXINA EXFOLIATIVA: Exotoxina causante de
eritemas.
LEUCOCIDINAS: Destruyen leucocitos
(polimorfonucleares y macrfagos) Gran resistencia.
ENTEROTOXINAS: Exotoxinas que producen vmitos y
en menor proporcin diarreas.
S. Aureus - Hemolisinas
S. Aureus - Hemolisinas
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
Antgenos, toxinas y enzimas
ENZIMAS:
COAGULASA: Coagula el plasma sanguneo
(activa la protrombina) facilitando procesos
spticos localizados
FIBRINOLISINAS: Efecto proteoltico,
rompiendo los cogulos de fibrina.
PENICILINASA (o -lactamasas) rompen el
anillo -lactmico de las penicilinas, por lo
que provocan resistencia a estos
antibiticos.
S. aureus. Accin patgena e inters clnico:
S. aureus puede estar presente en la flora
normal en piel y mucosa nasal.
La patogenicidad depende de la mayor o menor
presencia de los factores de virulencia
(antgenos, toxinas y enzimas), pudiendo
afectar:
Piel y mucosas: Fornculos, infecciones de
heridas y quemaduras, procesos inflamatorios,
supurativos y pigenos, etc.
De forma generalizada: Trombos
intravenosos (por la coagulasa), septicemia,
artritis, endocarditis, pleuritis, etc. en
individuos debilitados.
Aparato digestivo: Cuadros de gastroenteritis
por intoxicacin alimentaria debido a la
enterotoxina producida cuando crece sobre
alimentos (sobre todo en cremas ricas en
hidratos de carbono).
No presenta fiebre (intoxicacin, no
infeccin)
S Nauseas, vmitos y diarreas durante 1 a 2
das.
Se transmite por manipuladores portadores
sanos.
Aislamiento de Staphilococcus

Medio selectivo y diferencial:


Medio Manitol Salado

(Medio Chapman):
NaCl: Selectivo para
Staphilococcus spp (por su
carcter halfilo)
Manitol: Fermentacin
Diferencial para S. aureus
(manitol +).
Tras obtener cultivo puro
Resiembra en Agar Sangre
para ver posible hemlisis y
morfologa y color de las
colonias.
Caracteres Bioqumicos de
Staphilococcus
Cocos G+ y catalasa +
Oxidasa negativos
Fermentan muchos azcares (glucosa, sacarosa,
fructosa, etc.) con produccin de cidos.
Indol
Gelatinasa +
Reducen NO3 a NO2
No poseen fibrinolisinas (excepto excepciones)
Coagulasa (salvo S.aureus)
Colonias grandes aplanadas y lisas con alfa y beta
hemlisis en agar sangre o agar chocolate
Caracteres Bioqumicos de Staphilococcus
Diagnstico bacteriolgico de
Staphilococcus

Toma de muestra con torunda


estril (heridas y lesiones
superficiales) o por puncin.
Tincin de Gram de la muestra
Aislamiento: Medio Chapman
Cultivo puro en Agar Sangre
Pruebas bioqumicas:
Coagulasa
Fermentacin de glucosa en medio
O/F
Catalsa y gelatinasa
Sensibilidad a la novobiocina
Diagnstico bacteriolgico de Staphilococcus
Streptococcus
Cocos Gram +
Anaerobios facultativos
Agrupacin en cadenas
Catalasa
Oxidasa
Fermentan la glucosa
(produccin de cidos)
Solo algunas especies son
patgenas.
Muchas especies son saprfitas
de la flora normal y patgenas
oportunistas.
Clasificacin de Streptococcus
Se clasifican en funcin de:
Tipo de hemlisis.
Clasificacin de Lancefield: Por
los caracteres antignicos del
carbohidrato C de su pared
(polisacrido).
Comportamiento antignico
frente a diversas pruebas
serolgicas de aglutinacin
pasiva, inmunofluorescencia,
etc.
Streptococcus.
Tipo de hemlisis en placas de agar sangre.

-hemoltico: No hemlisis
-hemoltico: Tipo viridans
(de verde). Hemlisis
parcial: Decoloracin
pardo-verdosa.
Ej.: S. pneumoniae
-hemoltico: Hemlisis
total Halos de
transparencia grandes
alrededor de las colonias.
Streptococcus.
Clasificacin de Lancefield.
Rebeca Lancefield (1895 1981)
Se designan por letras de la A a la V en funcin
de las diferentes caractersticas antignicas que
puede presentar el carbohidrato C de su pared.
Existen Streptococcus que no tienen
carbohidrato C, por lo que no pueden
clasificarse en estos grupos.
El grupo ms importante en patologa humana
es el A.
Presentan diferentes factores de virulencia
adems del carbohidrato A:
Protena M en su pared.
En las cpsula: cido hialurnico con caractersticas
antifagocitarias (Grs. A y C) y un carbohidrato
asociado infecciones Respiratorias y nerviosas (S.
pneumoniae)
Streptococcus. Clasificacin
por pruebas serolgicas
+ hemlisis + pruebas bioqumicas
Streptococcus -hemolticos de los
grupos A,B,C,G y F.
Streptococcus del grupo D de
Lancefield enterococo y
Streptococcus del grupo D de
Lancefield no enterococo.
Streptococcus tipo viridans.
Streptococcus
Accin patgena e inters Clnico

Streptococcus del grupo A (S. pyogenes).


-hemolticos
Patgenos (suponen el 90% de las
infecciones estreptoccicas).
Se encuentra en la mucosa nasal y
farngea de los enfermos y tambin en
portadores sanos.
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
Efecto patgeno por factores de virulencia:
ANTGENOS:
Polisacrido C: Carctersticas de grupo.
Protena M (solo en Gr. A): Facilita adherencia y proteccin frente a
fagocitosis.
TOXINAS:
Hemolisinas: Estreptolisina O y Estreptolisina S (Antignica y
Afecta tambin a leucocitos)
Toxina eritrognica (Exantema de la escarlatina)
ENZIMAS:
Estreptoquinasas: Lisis de fibrina (rotura de cogulos).
Desoxiribonucleasa estreptoccica (4 grupos antignicos A, B, C,
y D): Despolimeriza el ADN
Hialuronidasas: Hidroliza el cido hialurnico del tej. conectivo.
Proteinasa estreptoccica: Acta sobre el tejido conectivo
ayuda a la difusin. Procesos inflamatorios y necrosis.
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
PROCESOS INFECCIOSOS:
Localizadas en piel
(escarlatina) o mucosas
(anginas, sinusitis, etc.)
Localizadas en vsceras
(endocarditis, meningitis)
Infecciones generalizadas
(sepsis)
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
Los cuadros ms frecuentes
son de ANGINAS o
FARINGITIS
Pueden dar lugar a

complicaciones:
Supuradas: Otitis, sinusitis,
meningitis, etc.
No supuradas:
Glomerulonefritis

Fiebres reumticas (x

infecciones no tratadas)
afectando a articulaciones e
incluso al corazn.
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo B

Solo una especie: S.agalactiae


Saprfito
Localizacin: Rinofaringe, aparato urogenital e intestinal.
Patgeno oportunista: En tracto respiratorio, mucosas,
piel, etc. y meningitis e infecciones pulmonares en
neonatos contagiados a partir de la vagina de la madre.
-Hemolticos (la mayora).
Descomponen el hipurato sdico
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus del grupo D
- y -Hemolticos.
Resisten a bien agentes externos y antibioticos
Enterococos (S. faecalis y S. faecium ahora en el
gnero Enterococcus): Saprfitos del intestino.
Crecen bien en medios ricos en NaCl (6,5%)
Utilizan la esculina
No enterococos (S. bobis y S. equinus) afectan a
vacas y caballos.
Los enterococos se encuentra en la flora intestinal
normal y la infeccin a menudo procede de
contaminacin fecal.
Son una causa importante de infecciones del tracto
urinario (mucho menos comn que E. coli) y tambin
infecciones oportunistas (incluyendo infeccin intra-
abdominal, septicemia y endocarditis).
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus de los grupos:
Grupo C, G, F y E :
-Hemolticos
Sensible a agentes externos
Saprfito de rinofaringe (G, F y E tambin vas genitales
e intestino).
Pocas veces patgenos oportunistas (en vas urinarias,
heridas, etc.)
Grupos H (S. sanguis) y K (S. salivarius):
Saprfitos de la rinofaringe.
No patgenos
- y -Hemolticos (cuando lo son)
Grupo N (S. thermophilus, S. lactis, etc):
Estreptococos lcticos (industria): Fermentadores de
lactosa
No patgenos
No hemolticos
Accin patgena e inters Clnico en
Streptococcus de los grupos:
Grupo viridans:
- y -Hemolticos
Saprfitos de orofaringe, mucosa bucal y placa dental.
Patgeno oportunista:
Caries dental
Endocarditis y complicaciones de valvulopatas tras la
extraccin de un diente (si pasan a la sangre).
Streptococcus neumoniae (neumococo):
Diplococos
No crecen en medios de bilis-esculina.
Sprofitos en la flora normal del aparato respiratorio.
Patgenos en neumonas o en procesos pigenos e
inflamatorios como meningitis, sinusitis, otitis, etc.
Son patgenos si presentan cpsula con un polisacrido
que facilita la invasin. Tambin protena M y
polisacrido C se relacionan con la virulencia.
Identificacin de Cocos G+
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos

Toma de muestras:
De rinofaringe con Hisopo
estril.
Muestra del pus si hay.
Frotis y tincin de gram de
las muestras.
+ Tincin de cpsulas (tincin
negativa)
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos
Aislamiento por cultivo:
2 Tubos de agar sangre (uno
aerobio y otro microaeroflico):
Siembra por picadura (hemlisis
en profundidad tpica de S.
pyogenes).
Placa de agar sangre o
chocolate: Agotamiento del asa.
En Agar sangre de Carnero al
5%: Colonias grisceas redondas
bordes lisos.
Aislamiento. Caracteres Bioqumicos
PRUEBAS BIOQUMICAS:
Catalasa ()
Hemlisis en Agar sangre
Sensibilidad a la optoquina (S.
pneumoniae)
Sensibilidad a la bacitracina (Gr. A: +).
Hidrlisis del hipurato (Gr. A: +).
Crecimiento en Bilis Esculina
Crecimiento en medios al 6,5% de NaCl
(D enterococo:+)
Grupos antignicos de Lancefield para
los distintos tipos de sustancia C: Por
mtodos inmuolgicos.
Pruebas serolgicas: Buscan anticuerpos
en el suero del paciente:
ASLO (Antiestreptolisina O)
ASK (antiestreptoquinasas)
ASH (antihialuronidasas)
DNAasa, etc.
Identificacin de Streptococcus por grupos
Hemlisis Inhibicin Inhibicin Crec. En Hidrolisis NaCl Grupo
bacitracina optoquina Bilis Hipurato 6,5%
esculina sdico

B
Beta
D enterococo

D no
enterococo

C, G y F

Alfa Viridans

S.
pneumoniae
Neisseria
Familia Neisseriaceae
Gram
Diplococos
Aerobios estrictos
Saprfitas o patgenas de la
especie humana y animales.
Oxidasa y catalasa positivos
Neisseria. Especies ms importantes.
Neisseria meningitidis (meningococo)
Producen meningitis
Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
Producen gonorrea.
Neisseria spp saprfitas. Habituales de rinofaringe
y aparato genital, no patgenas.
-----------------------------------------------
Las neiserias saprfitas son poco exigentes, fciles
de cultivar en medios comunes y crecen entre 22 y
35 C.
N. meningitidis y N. gonorrhoeae son muy
exigentes, dificiles de cultivar y solo crecen entre 35
y 37 C
Neisseria meningitidis: Accin
patgena
Diplococos en granos de caf
Afecta a vas respiratorias superiores y
causa meningitis epidmica (sobre todo en
nios con alta tasa de mortalidad).
Factores de virulencia:
La cpsula que le confiere gran resistencia
Protenas de membrana con accin muy
txica.
Fimbrias para adherirse al epitelio que
invade
La cpsula presenta un polisacrido con
distintas propiedades antignicas que
permiten clasificar al menigococo en
serogrupos (las cepas ms patgenos
pertenecen a los serogrupos A, B, y C).
Los serogrupos ms frecuentes en Espaa
son el B y el C
Neisseria meningitidis: Cuadro clnico
Comienza con rinofaringitis leve
que evoluciona a ms severa y
posible bronquitis.
Puede pasar a sangre y de all a
piel dando petequias, fiebres
altas y artralgias.
Puede pasar a lquido
cefalorraqudeo y meninges
(meningitis): Fiebres muy
altas, cefala, rigidez de nuca,
vmitos, diarreas, etc. que
pueden acabar en muerte si no
se trata rpidamente.
El examen de lquido
cefalorraqudeo es turbio,
purulento y con abundantes
meningococos.
Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena

Diplococos con afinidad por las


mucosas urogenitales.
Produce la Gonorrea de
transmisin por contacto
sexual.
Factores de virulencia:
Protenas de membrana con
diferentes caractersticas
antignicas.
Fimbrias (adherencia y
dificultad para ser fagocitadas)
Endotoxina que inactiva
anticuerpos prximos.
Neisseria gonorrhoeae: Accin patgena
Tras el contacto sexual:
A las pocas horas los gonococos se
adhieren a las mucosas mediante
las fimbrias
Penetran a tejidos subepiteliales, se
multiplican y liberan endotoxinas
con efecto sobre uretra, cuello
uterino, ano, etc. con destruccin
de clulas epiteliales, formacin de
procesos supurativos purulentos,
dolor a la miccin por uretritis,
afectando tambin a cuello de tero
y vaginitis en mujeres.
Sobre el 50% son asintomticos
cronificacin (al no ser tratado).
Neisseria meningitidis. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.
TOMA DE MUESTRAS:
De LCR por puncin lumbar
Examinar rpidamente (sensible)
A la muestra de LCR turbio y purulento
se le realiza:
Examen directo: Se centrifuga:
Sedimento Frotis para tinciones
(gram, tinta china, etc.)
Sobrenadante: Tcnicas inmunolgicas
para detectar Polisacridos capsulares
y protenas.
Siembra en Agar sangre, agar chocolate,
etc.
Puede realizarse tambin un
hemocultivo.
Neisseria meningitidis. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.

Pruebas bioqumicas:
Catalasa (+)
Oxidasa (+)
O/F con glucosa y maltosa
(oxidativo)
Reduccin de NO3 a NO2
(-)
Estudios serolgicos del
LCR o del Suero.
Neisseria gonorrhoeae. Aislamiento.
Caracteres bioqumicos.
TOMA DE MUESTRA:
En el laboratorio a primera hora antes de
la primera miccin (si es posible)
De uretra, recto y cuello de tero.
EXAMEN DIRECTO: Frotis y tincin de
gram.
CULTIVO: en medios enriquecidos (agar
sangre, agar chocolate, Thayer Martin
modificado, NYC medium)
Incubar a 35 37 C, humedad al 70 %
y 5 10 % de CO2.
Pruebas bioqumicas: O/F, oxidasa,
catalasa, etc.
Pruebas serolgicas (ELISA).