Analisis

Vitamin dan Hormon

 Vitamin

Vitamin C Nikotinamid Vitamin B1.HCl

VIT-HOR Vitamin B12 2

 Vitamin

VIT-HOR 3
 Multivitamin

Vit. Vit.B2 Vit.B1

C

Niaci
n
Vit.B6 Niacinamid

Folic Acid
VIT-HOR 4
 Pemisahan Vitamin-Vitamin Yang Larut Air
[ ion-pairing reagents ]

VIT-HOR 5
 Kolom

VIT-HOR 6
 Gambar: 1
VIT-HOR 7
 Ion Pair Reagent
Alkylamines Alkylsulfonates

VIT-HOR 8
 Vitamin B-12

VIT-HOR 9
 Vitamin B-12

Untuk Zat Tunggal,

dapat dianalisis
secara:
Spektrofotometri
UV atau Vis

VIT-HOR 10
 HPLC Multivitamin

VIT-HOR 11
 Kromatogram HPLC

VIT-HOR 12
 Hasil Pemisahan HPLC

VIT-HOR 13
 Vitamin C = Ascorbic Acid

VIT-HOR 14
 Metode Penetapan Kadar Zat Tunggal
Titrasi Secara Iodimetri (Redok)
Titrasi dengan Diklorofenolindofenol (DCIP)

VIT-HOR 15
 Pen. Kadar Vitamin C
Netralisasi
[ Iodimetri ]

Timbang seksama lebih kurang 400 mg,

larutkan dalam campuran 100 mL air dan
25 mL asam sulfat 2N, tambahkan 3 mL
kanji LP. Titrasi segera dengan iodium 0,1N
LV.

Kesetaraan:
- Satu (1) mL iodium 0,1N setara
dengan 8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ]

VIT-HOR 16
 Pen. Kadar Vitamin C
[ Iodimetri ]

BM = 176,13

Satu (1) mL iodium 0,1N setara dengan

8,806 mg C6H8O6 [ Vitamin C ]

VIT-HOR 17
 Metode Diklorofenolindofenol [ DCIP ]
Vitamin C
Ascorbic Acid Dehydroascorbic Acid

CH2OH CH2OH
HOCH O HOCH O
-2 H
O O
+2H

HO OH O O

HSCH2CH(SH)CH2OH : 2, 3-dithiol-Propanol
Reducing agent and converts dehydroascorbic acid to ascorbic acid

VIT-HOR 18
Titration Method for Reduced Vitamin C

1. Extract with metaphosphoric acid (HPO3) in HOAC.

2. Titrate with 2, 6-dichloroindophenol (blue).

At end point, rose pink (2, 6-dichloroindophenol in acidic

condition).

VIT-HOR 19
Oxidation and Reduction of Ascorbic
Acid
2,6-dichloroindophenol
HO OH Cl
+ O N OH
H
H O H 2C O O Cl

Blue Color

Cl
O O
HO NH OH
+
H
O Cl
H O H 2C O

Pink color in acidic condition

Extra oxidized indophenol form in the absence of ascorbic acidic gives pink color
at end point
VIT-HOR 20
Calculation for Reduced Vitamin
C
F V
mg Ascorbic Acid/g = (A-B) x x
E X

A= ml of 2,6-dichloroindophenol for sample titration

B= ml of 2,6-dichloroindophenol for blank
F= mg of ascorbic acid equivalent to 1 ml of indophenol standard solution
V= Initial assay solution volume
E= Number of grams
X= Volume sample aliquot titrated

VIT-HOR 21
 Vitamin B1 HCl

VIT-HOR 22
 Vitamin B1.HCl

N + S CH2-CH2-OH
H3C NH3

+ .2Cl-
N CH2 N CH3
TBA
Metode Penetapan Kadarnya:

Titrasi dengan NaOH

Titrasi Bebas Air (dengan HClO4)
Titrasi Argentometri
 Vitamin B-1 HCl

Titrasi Bebas Air (TBA) dengan HClO4, dalam

asam asetat glasial, indikator p-Naftol benzein
atau Quinaldin merah.
-Adanya Cl, dihilangkan/diendapkan dg pe +
an (CH3COO)2Hg. Mengapa ?

Kesetaraan:
1 mL 0,1 N HClO4 0,1 x BM/2 mg Vit B1

VIT-HOR 24
 Vitamin B1 HCl
Klorin total dalam Vitamin B1 dapat
ditentukan dengan:
-melarutkan dalam air + asam nitrat encer +
larutan AgNO3 >>>, ttt.
Endapan yang terbentuk disaring, dicuci
dengan air.
Cairan hasil cucian (sisa AgNO3) dititrasi
dengan NH4CNS.
Kesetaraan:
1 mL 0,1 N AgNO3 35,46 mg klorin

VIT-HOR 25
 Vitamin B1 HCl
Klorin sebagai hidroklorid ditentukan dengan
cara titrasi menggunakan 0,1 N NaOH,
indikator biru brom timol.

Kesetaraan:
1 mL 0,1 N NaOH 35,46 mg klorin

VIT-HOR 26
 Thiamin HCl

N + S CH2-CH2-OH
H3C NH3

+ .2Cl-
N CH2 N CH3

VIT-HOR 27
 Vit.B1
K 3Fe(CN)6 / NaOH

N N S CH2-CH2-OH
H3C

N N
CH3
Tiokrom Fluorescensi Biru
 PK. Obat Secara
Spektrofluorometri
 PK. Riboflavin
OH OH OH
CH2-CH-CH-CH-CH2OH

H3C N N O

NH
H3C N

O
 Riboflavin
1%
nm E 1cm

222 942
267 873
371,5 277

445 324
VIT-HOR 32
VIT-HOR 33
 Riboflavin

PK. Spektrofluorometri
dalam asam asetat 5
%,
eksitasi = 445 nm
emisi = 530 nm
(Fluorescensi : hijau
kekuningan)
 Riboflavin
Riboflavin (g/mL) Intensitas
fluorescensi
0,10 5,8
0,20 12,2
0,40 22,3
0,80 43,3
.... ? 15,4
Y = 52,9739 X + 1,0348 ; r = 0,999;
= 88,90 Kadar = 0,27 (g/mL)
 Riboflavin
Bila intensitas fluorescensi dibagi : 100
Riboflavin (g/mL) Intensitas fluorescensi
0,10 0,058
0,20 0,122
0,40 0,223
0,80 0,433
.... ? 0,154
Y = 0,5297 X + 0,0104 ; r = 0,999;
= 27,90 Kadar = 0,27 (g/mL)
 Tabel : Koef. Korelasi [r]
db p 0,10 0,05 0,02 0,01 0,001
1 0,988 0,997 0,999 1,000 1,000
2 0,900 0,950 0,980 0,990 0,999
3 0,805 0,878 0,934 0,959 0,992
4 0,729 0,811 0,882 0,917 0,974
5 0,669 0,754 0,833 0,874 0,951
. . . . . .
. . . . . .
20 0,360 0,423 0,492 0,537 0,652
 Y=bX+a
Y = nilai respon
X = kadar senyawa baku
r = koefisien korelasi
db = derajad bebas
p = taraf kepercayaan /
limit of confidence
 db = n - 2
Literatur :
Skoog, D.A., 1985, Principles of
Instrumen- tal Analysis, Third Edition,
Sounders College Publishing, New York.
Harris, D.C., 1987, Quantitative Chemical
Analysis, Second Edition, W.H.
Freemand and Company, New York.
Miller, J.C. and Miller, J.N., 1988,
Statistical for Analytical Chemistry,
Second Edition, John Wiley & Sons,
New York.
 Labu Takar TC 20 OC

VIT-HOR 40
 Perlukah
Metode Titrasi DiValidasi
???
 European Pharmacopoeia 6.0
2008 (p.514), 4.2.2
Volumetric solution do not differ from the
prescribed strength by more than 10 per
cent. The molarity of the volumetric solution
is determined by an appropriate number of
titrations. The repeatability does not exceed
0.2 per cent (relative standard deviation).
Misal, akan dibuat larutan baku 0,1 N,

0,09 - 0,11
Yang diperbolehkan :
[ RSD 0,2 % ]
VIT-HOR 42
 Validasi Metode Titrasi

2005

VIT-HOR 43
 Ermer and Miller, 2005, p.327

VIT-HOR 44
Is the volumetric method to be validated ?

30
VIT-HOR 46
 Hormon

VIT-HOR 47
 Kortison dan Hidrokrtison

Kortison Hidrokortison
Kelarutan dalam pelarut: Kelarutan dalam pelarut:
Air : 1 : 5.000 Air : 1 : 10.000
Etanol : 1 : 300-350 Etanol : 1 : 230
Kloroform : 1 : 4 Kloroform : sedikit larut
Sedikit larut dalam eter Larut dalam dioksan
VIT-HOR 48
 Hormon Hidrocortison dll

VIT-HOR 49
 Kortison

VIT-HOR 50
 Hidrokortison

VIT-HOR 51
Reprodusibilitas Antar Column Batch

VIT-HOR 52
 Hormon

VIT-HOR 53
 Steroid

VIT-HOR 54
 Norgestrel

VIT-HOR 55
 Norgestrel

VIT-HOR 56
 Hormon Norgestrel

VIT-HOR 57
 Norgestrel

VIT-HOR 58