Reactores biolgicos

Reactores biologicos
Es un equipo que provee todas las condiciones para realizar un
cultivo :
 Funcionamiento

Un proceso de fermentacin tpico que se lleva a

cabo en;
Fermentador Birreactor
Determinados sustratos que componen el medio de
cultivo son transformados por accin microbiana en
Biomasa.
Producto
El microorganismo va aumentando en su
concentracin en el transcurso del proceso al mismo
tiempo que el medio se va modificando y se forman
productos nuevos como consecuencia de las
actividades catablicas y anablicas.
Los requisitos para el crecimiento microbiano
son:

Inculo viable
Medio de cultivo con los nutrientes
necesarios
Fuente de energa
Ausencia de inhibidores
Condiciones ambientales apropiadas.
n de las fermentaciones por la natura
Tipo de producto formado
Tipo 1 Producto relacionado directamente con
utilizacin de carbohidratos
Velocidades especficas

Tipo II Producto indirectamente relacionado con

utilizacin de carbohidratos: cido ctrico y
aminocidos

Tipo III Producto resultado de las rutas biosintticas

Producto aparente mente no asociado con el
consumo de la fuente de carbono y energa :
penicilina

qS
qP
Clasificacion de las fermentacion
Tipo de reaccin
Simple Nutrientes convertidos a productos en una relacin
estequiomtrica fija sin acumulacin de intermediarios

Simultanea Nutrientes convertidos a productos en una proporcin

estequiomtrica variable sin acumular intermediarios

Consecutiva Nutrientes convertidos a productos con acumulacin de un

intermediario

En etapas Nutrientes convertidos completamente a un intermediario

antes de convertirse en producto o nutrientes convertidos
selectivamente a productos en orden preferencial
Clasificacion de las fermentacione
Tipo de producto formado con el crecimiento
Formacin de producto Formacin de producto relacionada directamente con
asociada a crecimiento crecimiento por medio de un factor
Se presenta en fermentaciones donde el producto
pertenece a una ruta catablica como etanol.
Formacin de producto La formacin tiene lugar durante el crecimiento y en la
parcialmente asociada a fase estacionaria: cido lctico
crecimiento
Formacin de producto no No existe relacin entre el patrn de crecimiento y la
asociada a crecimiento formacin de producto .
El producto se forma una vez detenido el crecimiento,
ocurre tpicamente con metabolitos secundarios como
antibiticos
 Crecimiento diauxico
Es un fenmeno producido en medios complejos industriales donde uno
de los compuestos acta como:
Fuente de carbono
Energa
Se caracteriza por la presencia de mas de una fase de adaptacin, como
resultado del uso secuencial de los sustratos, situacin que ocurre
cuando un substrato reprime la sntesis de las enzimas necesarias para
la utilizacin de un segundo sustrato.
Cuando ocurren dos fases de adaptacin recibe el nombre de diauxia o
crecimiento diauxico.
De acuerdo a su modo de operacin los reactores
biolgicos se clasifican en :
Lote
Fed-batch

Semicontinuo
Continuo
Quimiostato
Turbidiostato
 Cultivo por lote (Batch)
Proceso de fermentacin

El fermentador se carga al inicio del ciclo con

medio fresco y se inoculan los microorganismos.

La fermentacin procede sin reemplazo del medio

fermentado y sin la entrada de ninguna otra corriente
de medio fresco.

El tiempo de operacin esta definido hasta que se

alcanza el rendimiento, concentracin o productividad
mxima
 Crecimiento en cultivo Bach

Se observan 6 fases de crecimiento :

A B C D E F
Fase lag (latencia)
12
Fase de crecimiento acelerado
Fase de crecimiento exponencial

ln CN
Fase de crecimiento de desacelerado 10

Fase estacionaria
Fase de muerte 8

t
 Fase lag

Tipo de microorganismo
Edad del microorganismo
Tamao del inoculo
Volumen del cultivo a inocular
Condiciones del cultivo
Bajas a altas concentraciones de nutrientes
Altas a bajas concentraciones de nutrientes
 Fase acelerada
Final de la fase lag
La divisin incrementa gradualmente

Fase exponencial
Incremento de la poblacin microbiana

El tiempo del incremento de dCn

la poblacin es proporcional rn Cn
al numero de densidad dt
 Fase de desaceleracion
El crecimiento disminuye paulatinamente
Disminucin de sustrato

Fase estacionaria
El crecimiento neto es nulo
Hay nutrientes limitantes , pero necesarias para
mantener la actividad

Fase muerte
Disminucin de reservas de energa
Acumulacin de productos txicos
La muerte es en funcin exponencial
Desintegracin por lisis celular
Mtodos para cuantificar el crecimiento de poblaciones
microbianas

Recuento directo de clulas en celda

Recuento de colonias crecidas en placa

NMP

Medida de peso seco por gravimetra

Nefelometra

Turbidimetra

Correlacin entre microorganismos y el nivel de un componente

celular (nitrgeno, protena, ADN, ATP, etc.)

Correlacin entre microorganismos y una actividad metablica

(consumo de substrato, formacin de producto, emisin de luz,
etc.)
Factores que afectan el indice de crecimiento especifico

pH
Temperatura
Concentracin de sustrato
Concentracin del producto
Suplemento de oxgeno
 pH y Temperatura
Durante el crecimiento los microorganismos modifican el pH del medio
de cultivo, normalmente hacindolo disminuir; por tal motivo es frecuente
incluir en el medio substancias que acten como tampon (buffer).

El efecto de la temperatura sobre el crecimiento es complejo. Por un

lado cada reaccin qumica individual, de todas las que conforman el
metabolismo, es afectada por la temperatura, por lo que un incremento
de sta resulta en una mayor velocidad de reaccin.
 Concentracion de sustrato

El modelo cintico ms difundido es el propuesto por Monod

(1942).
Establece una relacin funcional entre y la concentracin de
un nico nutriente esencial limitante.
Es un modelo sencillo de dos parmetros.
Se basa en las ecuaciones de Langmuir y en la cintica
enzimtica de Michaelis & Menten.

max Cs

Ks Cs
Se aplica bsicamente para el cultivo de un microorganismo que
crece formando clulas aisladas (separadas) sobre un
substrato simple y cuando no hay inhibidores del crecimiento.

El modelo de Monod se aplica bsicamente para la fase de

crecimiento exponencial.

Modelo flexible, ha mostrado predecir adecuadamente el

crecimiento de cultivos que no cumplen totalmente los requisitos
anteriores (un solo m.o, clulas aisladas, sustrato simple, sin
presencia de inhibidores)

Existen modificaciones del modelo de Monod para extender su

aplicacin a otros casos: inhibicin, crecimiento diuxico (varios
substratos), substrato complejos no definidos, cultivos mixtos,
etc.
Valores tpicos de la constante de saturacin (KS) del modelo
cintico de Monod

Substrato Organismo (gnero) KS (mg/L)

Glucosa Escherichia 0,07 2,0
Glucosa Aspergillus 5,0
Glucosa Saccharomyces 25
Lactosa Escherichia 20
Glicerol Candida 4,5
Oxgeno Candida 0,04 0,5
Metanol Pseudomonas 0.7
Fosfato Escherichia 1,6
Mg2+ Klebsiella 0,6
Triptofano Escherichia 0,0005 0,001
Arginina Aspergillus 0,5
 fP
1
P m
a
PP


S
f
S
K fPe
fK
Modelos cineticos para inhibicion de sustrato o producto

m
P
P
K
P
Modelo para inhibicin del crecimiento por alta concentracin de

S
substrato (Modelo de Andrews o Haldane).

S
m

P
S2
K S
S K
I

Modelo para inhibicin del crecimiento por alta concentracin

de producto.

fP puede tener diferentes expresiones y puede usarse tambin para corregir la ecuacin
(Modelo de Andrews o Haldane). cuando existen ambos tipos de inhibiciones.
(h )
-1
0.7
0.70 S

max commercial
2
0.6 = (R = 0.90)
S + 207
0.5

0.4

0.3
(h )
-1

0.2
0.68 S 2
= (R = 0.97)
max native

2
0.1 S + 215 + S /608

0 200 400 600 800 1000 1200

Initial fat concentration (mg/l)
 La formacin de producto y el crecimiento estn relacionados con la
utilizacin (consumo) de nutrientes. El balance para un cultivo en general
puede plantearse de la siguiente manera

Velocidad de Velocidad de Velocidad

acumulacin = ingreso - + Velocidad de -
Velocidad de
de salida formacin consumo

V = Volumen del cultivo

F1= Caudal de alimentacin
F2 = caudal de salida
Ci1= Concentracin del componente i en la alimentacin
Ci = Concentracin en el caudal de salida
rfi = Velocidad de formacin
rci = Velocidad de consumo
 Balance para Cultivo Batch

Velocidad de Velocidad de Velocidad

acumulacin = ingreso - + Velocidad de -
Velocidad de
de salida formacin consumo
Aplicando a la biomasa, al producto y al sustrato resulta:
 FERMENTACION ALIMENTADA (FED BATCH)

Es un modo de operacin donde uno o ms (en algunos

casos todos) Nutrientes son alimentados al reactor durante el
cultivo.
La alimentacin puede ser en funcin del tiempo, pero el
medio que contiene los metabolitos es retirado una vez
finalizada la corrida (no hay salida continua).
Debido a esto el volumen del caldo aumenta a travs del
tiempo y todas las variables se ven afectadas : Biomasa,
sustrato y producto.

F(t)
F(t)
si
si
Vf
Vo
to to
UTILIDAD DE UN FERMENTADOR FED BACH

Inhibicin del crecimiento por sustrato: Al existir una alta

concentracin de sustrato se puede producir una
inhibicin del crecimiento, efecto de la glucosa, metanol,
Ac. actico, Compuestos Aromticos
Alta concentracin: Si se desea una alta concentracin de
clulas se necesita una alta concentracin de sustrato, la
cual se puede producir inhibicin por sustrato.
Represin catablica: Los m.o. tienden a metabolizar las
fuentes de C ms rpida y no generan otras enzimas que
se utilizara para degradar otras fuentes, con este tipo de
alimentacin se mantiene la tasa de crecimiento pero con
la produccin de la enzima de inters.
 Fed bach

Mutantes auxotrficos: m.o. que requieren de un

nutriente que no son capaces de sintetizar, y si se
tiene un exceso de este nutriente se tiene un
crecimiento abundante sin acumulacin de
metabolitos deseados, luego se requiere alimentar a
este nutriente a bajas tasas.
Control On- Off de expresin de algn gen: cuando
un promotor de un gen forneo es encadenado en
un plsmidio regulable su expresin puede ser
controlado por la adicin de algn compuesto (gen
inducido) o puede deprimirse.
Productos no asociados: Los m.o. rpidamente
utilizan fuentes de C para su crecimiento y luego
sintetizan otros metabolitos, generalmente en la
etapa estacionaria o declinatoria.
 Formas de operacin del FED BACH
F(t)
F(t)
si
si
Vf
Vo
to tf
Dos etapas:
1er Etapa Bach que finaliza con V=0 y x=x0
2da Etapa donde se comienza una alimentacin F(t) hasta V= Vf
La demanda de nutrientes esta dada por el sistema:
xV
Demanda
Yx / s
Alimentacin del sustrato = F * So
Si la alimentacin Demanda = max
Si la alimentacin < Demanda < max
 BALANCE DE MASA

Balance de Masa Global

Masa que entra Masa que sale = Acumulacin

d (V )
FentradaV FsalidaV
dt

Considerando:
No hay flujo de salida, Fs= 0
Flujo de entrada Fe= F(t)
Densidad es constante e= s
Entonces:
d (V )
F
dt
 BALANCE DE BIOMASA:
Acumulacin = generacin
d ( XV )
Vr x VX
dt Suponiendo
dV dX No hay flujos de salida
X V VX
dt dt Fs= 0 ; Fe= F(t)
dX F
X X
dt V
BALANCE DE SUSTRATO:
Acumulacin = entrada- consumo
d ( SV )
FentradaSo Vr s
dt
dV dS X
S V FSo Vr s So V
dt dt Yx / s
dS F
So S 1 X
dt V Yx / s
 BALANCE DE PRODUCTO:
Acumulacin = generacin
d ( PV )
Vr p VqpX
dt qp= formacin de producto
dV dP asociado al crecimiento
P V VqpX
dt dt
dP F
qpX P
dt V
 VENTAJAS
Costos de inversin baja
No requiere de control
Tiene gran flexibilidad porque se elaboran varios productos
Niveles de conversin altos, como un resultado de un periodo
de cultivacin bien definido.
Menos riesgo de contaminacin y mutacin de clulas debido a
periodos relativamente cortos de cultivo.

DESVENTAJAS
Tiempos muertos
Frecuencia en la esterilizacin de equipo
Altos gastos debido a la preparacin de varios subcultivos para
el inoculo.
APLICACIONES

til para pequeas cantidades de producto

Para producir diversidad de metabolitos
Cuando existen altos riesgos de contaminacin
Riesgos de mutacin de microorganismos
Cuando la separacin del producto de un medio de
cultivo es discontinuo.
 Cultivo continuo

El reactor continuo o de tanque agitado (CSRT)

Es un recipiente agitado con adicin y sustraccin continua
de material y energa
Conocido tambin como Backmix y reactor de flujo continuo
de tanque agitado.
En el cultivo continuo las poblaciones microbianas pueden
mantenerse en un estado exponencial durante un periodo
largo de tiempo.
Es ampliamente usado en industrias qumicas
principalmente por su fcil control en el proceso y de
escalamiento ascendente.
Sin embargo en los bioprocesos su ms extensa aplicacin
es como herramienta de investigacin de estudios
microbiolgicos, genticos y bioqumicas.
 Usos de cultivo continuo

Puede ser utilizado para enriquecer y/o seleccionar una cepa o

cultivo mixto al hacer constantes las condiciones ambientales y la
tasa de dilucin
Algunos productos qumicos obtenidos por fermentacin continua de importancia industrial

Acetona Butano Glucosa

isomerasa
cido actico Butanodiol Glicgeno

cido ctrico Celulasa Penicilina

cido gluconico Cloramfenicol Penicilinasa

cido itacnico Etanol Protena

unicelular
cido lctico Estreptomicina Vitamina B12
 Se considera a un CSTR como sistema ideal cuando no hay
variaciones en Temperatura, Concentracin, Propiedades del
fluido o velocidades de reaccin, por lo que las propiedades de
corriente de salida pueden ser consideradas como las mismas
dentro del reactor.
Aun cuando esto generalmente no se logra, el biorreactor es
diseado de forma tal que las condiciones de operacin,
posicin de los baffles y geometras del impulsor, entre otros,
proporcionen un buen mezclado.

F
Si
Xi
Pi
S Figura esquemtica de
X un fermentador
P continuo de tanque
agitado
SXP
VENTAJAS

Es posible fijar la velocidad especifica de crecimiento entre cero

y un valor mximo de acuerdo a las necesidades del
experimento.
Se puede obtener clulas en un estado definido
independientemente del tiempo
Gran alcance para la mecanizacin y automatizacin
Poco volumen en el reactor
No hay tiempos muertos (para llenado, esterilizacin, etc.)
Menos deterioro de instrumentos por esterilizacin.
DESVENTAJAS
Poca flexibilidad a los cambios como composicin de medio,
temperatura, concentracin de oxgeno
La calidad del material crudo debe ser uniforme para las
condiciones de operacin.
Altos costos de inversin causado principalmente por el control y la
automatizacin del equipo.
Contina esterilizacin del medio.
Alto riesgo de contaminacin debido a largos periodos de cultivo.
Alto riesgo de mutacin de microorganismos por periodos largos de
cultivo.
Debido a todas las ventajas y desventajas mencionadas anteriormente
la operacin continua es preferida para procesos con altas
velocidades de produccin, para gas, liquido o sustratos slidos
solubles y cuando se involucran microorganismos con alta estabilidad
de mutacin.
 Clasificacin de los sistemas de cultivo continuo

Criterio I Sistema abierto Un reactor agitado: tanque

Recirculacin de perfectamente agitado y
las clulas homogneamente disperso
Sistema cerrado Tanque con una recirculacin de
100%
Criterio II Homogneo Tanque agitado (clulas
Mezclado homogneamente dispersas en
una mezcla homognea de fases
liquidas y gaseosa)
Heterogneo Tanque tubular (los organismos
son retenidos por sedimentacin)
Una sola etapa No se puede tener una serie de
Criterio III sistemas cerrados; se pueden
No de etapas combinar sistemas cerrados con
abiertos.
Multietapas Se pueden combinar cadenas
abiertos para formar cadenas de
dos o mas reactores
Existen dos formas bsicas:
Cultivo de flujo tapn donde el cultivo viaja sin mezclarse a trves
de un tubo o canal
Quimiostato:
Consiste en un tanque agitado con una suspensin de biomasa
perfectamente mezclada y homognea,
Se alimenta medio fresco a una tasa constante; el caldo de
fermentacin es extrado a la misma velocidad de modo que el
volumen permanece constante (sistema abierto, homogneo y de
una sola etapa).
 BALANCE DE MATERIA:

dX
FXi FX Vr x V
dt
Clulas de entrada clulas de salida + crecimiento dentro del fermentador = Acumulacin (cambio
de la conc. dentro del
VX -VX fermentador).

rx= vel. de crecimiento celular en el fermentador ( >>)

dx/dt= cambio de conc. celular en el fermentador con el tiempo, que en estado

estacionario es cero, volvindose la ecuacin

V X Xi
m
F rx

= tiempo de residencia que es igual al ara del rectangulo de ancho
x
X-Xi( >>)
1/rx= altura
Cuando la alimentacin representa el modelo de Monod con max=
0.935, Ks= 0.71 g/l, Yx/s=0.6, Si=10 g/l, Xi=0
 Cuando mas corto es el tiempo de residencia en alcanzar una
cierta concentracin celular, ms efectivo es el fermentador
Si la alimentacin es estril y las clulas crecen
exponencialmente (rx= X) la ecuacin anterior se convierte en:

1 1
m D = tasa de dilucin
D

Por lo tanto, en un CSFT en estado estacionario, con alimentacin estril, la velocidad

de crecimiento especfico () es igual a dilucin (D) por lo que tiene una gran
implicacin:
Todos los eventos que tiene lugar en el interior de la clula, metabolismo,
composicin e incluso su forma de crecimiento y el tamao de las clulas se pueden
controlar ajustando la Dilucin
La velocidad especifica de crecimiento puede ser controlada cambiando la
velocidad del flujo del medio.
Si puede expresarse con la ecuacin de Monod entonces:

max Cs
D
Ks Cs
 Balance para sustrato

Si el sustrato limitante suministrado en la alimentacin es la

fuente de carbono y energa,
Su utilizacin por las clulas puede seguir 3 distintas vas

- Fuente de C y energa para crecimiento

Substrato - Fuente de C y energa para mantenimiento
- Fuente de C y energa para producto

dS F dS dS dS
So S c m p
dt V dt dt dt

qp= vel. especifica de formacin de producto X mX qpX

(asumiendo que el producto es asociado al
crecimiento) Yx / s Yp / s
 Suponiendo:
Que se alcanzan los rgimen estacionario
Los requerimientos para mantenimiento son muy pequeos
comparados con los de crecimiento
La biomasa es el nico producto

X
D ( So S )
Yx / s
y como D=
X Yx / s ( So S )

Ecuacin bsica que indica que la concentracin de biomasa

mxima que se alcanza en el fermentador continuo, es proporcional
al consumo de sustrato
 Ahora bien, si el modelo de Monod aplica al sustrato limitante, la
concentracin del sustrato despejada del modelo, esta dada por:

En estado estacionario =D KsD

Ks S
S Donde Dc es la velocidad de dilucin crtica Dc
max Dc=max

La expresin determina la concentracin de sustrato limitante en

rgimen estacionario como funcin de la velocidad de dilucin.
La concentracin es independiente de la concentracin de sustrato
de alimentacin

KsD
X Yx / s ( So )
Dc D
Productividad en un sistema continuo
La productividad volumetrica para el cultivo continuo esta
definido por el producto = DX y de manera anloga para un
producto dado P=D x P

KsD
P DYx / s ( So )
Dc D
El valor de la velocidad de dilucin crtica est dado por:

max So
Dc
Ks So
La productividad por otro lado:
Alcanza un valor mximo para valores intermedios de D
El valor de D cuando la productividad es mxima puede
calcularse al derivar la ecuacin de productividad con respecto
a D e igualando a cero, la cual resulta en:

Ks 1
1/ 2

Dm Dc 1
Ks So

Por lo que la productividad mxima ser :

P= Dm X
 La productividad del fermentador se expresa como:
La cantidad de producto producido por unidad de tiempo y
volumen.

Si la alimentacin es estril la productividad de biomasa es igual a

X / m que es la pendiente de la curva X vs

Cuando la pendiente incrementa la

productividad tambien.
Las condiciones a las que alcanza
la mayor productividad son:
Xopt
mm
opt ,
 x
x
Este valor se puede ser obtenido de la grfica de X vs 1/
O bien derivando la ecuacin

Xopt Yx / sSi
1

Sopt
donde

La concentracin de sustrato optimo

Si
1

El tiempo de residencia optimo

mopt

de la figura
con respecto a X e igualando a cero.
Sustituir el valor de S a partir de la definicin de rendimiento.

Biomasa optima para la productividad

mxima

Ks Si
Ks

max 1