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La PCR se realiza
en un Thermo
Cycler
Termociclador.
Es una mquina
que calienta y
enfra la reaccin
en periodos cortos
de tiempo.
El proceso de PCR incluye 3 pasos
bsicos que se repiten 25 veces o ms:
1. DESNATURALIZACIN: CONSISTE EN SEPARAR LA DOBLE HEBRA DE DNA Y
CONVERTIRLA EN HEBRA SENCILLA.
-TPICAMENTE SE USA UNA TEMPERATURA DE 95C - 97C, POR 15 A 40 SEGUNDOS
EL TIEMPO DEPENDE DEL TAMAO DEL GENOMA.
2. APAREAMIENTO O ANNELING:
DEPENDIENDO DEL
TAMAO DE LA
AMPLIFICACIN Y LA
RESOLUCIN QUE
DESEEMOS UTILIZAREMOS
DIFERENTES MEDIOS
(AGAROSA,
POLIACRILAMIDA) A
DISTINTAS
CONCENTRACIONES.
ANLISIS DE LA MUESTRA
La posterior visualizacin se puede realizar
con bromuro de etidio (lmpara de luz UV),
tincin de plata, fluorescencia, radioactividad
Ladder: pesos conocidos
1: Fragmento a 1857 pb
2 y 4: Fragmento a 800
pb
3: No hay producto
5: Multiples bandas
(primers inespecficos se
pegan a varios sitios)
SE PUEDE AMPLIFICAR DIRECTAMENTE DE:
ADN GENMICO
CDNA (RT-PCR)
APLICACIONES
Deteccin de agentes infecciosos como:
hepatitis B y C, papiloma virus, HIV, entre otros
Anlisis de DNA de cualquier organismo vivo o
muerto, anlisis de fsiles
Mutagnesis dirigida (cambios en la
informacin contenida a travs de primers
con mutaciones)
Investigacin forense
Pruebas de paternidad
APLICACIONES
Criminalstica
EJEMPLO DE UN CASO DE
CRIMINALSTICA RESUELTO
UTILIZANDO ELECTROFORESIS
EN GEL VERTICAL DE
ACRILAMIDA.
LLEVE A REACCIONAR EN EL
TERMOCICLADOR.
GRACIAS
POR SU ATENCIN
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