-Rutinarias

- Confirmatorias

CURSO : INMUNOLOGA
DOCENTE : MIRTHA
ALUMNA : CARDENAS ESPINOZA,
La sfilis es una
infeccin sistmica y
crnica, causada por el
Treponema pallidum,
generalmente se
transmite por contacto
sexual.
Trepo: giro
Nema: hebra
La infeccin se clasifica en:
Sfilis primaria.- Ulcera indolora y dura
(chancro).

Sfilis secundaria.- Exantema maculoapular en

palmas y plantas.

Sfilis latente.- Pacientes seroreactivos con

ausencia de manifestaciones clnicas.

Sfilis terciaria.- Neurosfilis , sfilis cardiovascular.

DIAGNOSTICO
Tenemos 2 formas de diagnosticar la Sfilis:

DIRECTA: Observacin del T. pallidum, en las lesiones

(chancro) y observamos en microscopio de campo
oscuro.

INDIRECTA: Estudios inmunolgicos en el suero del

paciente.
Diagnostico serolgico
Sin embargo desde el inicio de la infeccin aparecen
en el suero del individuo infectado ciertas sustancias
denominadas REAGINAS que reaccionan con
antgenos de cardiolipina, lecitina y colesterol. Estas
reaginas junto a los signos clnicos son por lo tanto los
procedimientos ms rpidos y tiles disponibles para
diagnstico de sfilis.
 Un individuo que ha sido infectado con T. pallidum su
sistema inmunolgico va a reaccionar dando lugar a la
formacin de reaginas (anticuerpos).

Estas reaginas se presentarn en el suero del paciente,

el cual reacciona frente al antgeno de cardiolipina,
lecitina y colesterol.

El husped produce anticuerpos:

-Contra material lipoidal liberado por las clulas daadas
(reaginas).
-Contra material lipoproteico y cardiolipina liberada por los
treponemas.
DIAGNSTICO SEROLGICO DE LA
SFILIS

P. No VDRL
trepon TAMIZAJE
mica RPR

P. FTA-ABS CONFIRMATOR
Trepon IO
mica MHA-TP
TECNICAS NO TREPONMICAS
Significa que no usaremos Treponema para investigar la Sfilis.
Consiste en una deteccin de anticuerpos de reagina, contra el
antgeno cardiolipina-colesterol-lecitina. Se utilizan como
prueba de tamizaje para Sfilis. Las pruebas positivas se
reportan como un ttulo de anticuerpos y pueden emplearse
para el seguimiento de la respuesta al tratamiento.

Pruebas realizadas con antgenos de naturaleza lipoidal

(cardiolipina, lecitina y colesterol).

Detectan anticuerpos de tipo IgG e IgM anti material

lipdico liberado por las clulas del husped daadas y
material lipoproteico de la bacteria.

La metodologa que usan es la floculacin en lmina o

tarjeta.
 VDRL (Venereal Disease Research
Laboratory)
Fundamento del Mtodo
Las reaginas presentes en
individuos infectados por T.
pallidum se detectan en suero
por la reaccin con un antgeno
cardiolipnico purificado y
estabilizado.
Si la muestra contiene reagina,
sta se unir al antgeno
produciendo una floculacin
visible al microscopio.
 Reactivo.- Suspensin acuosa
de antgeno cardiolipnico y
lecitina purificados, en buffer
fosfato con cloruro de colina.
Estable en el refrigerador (2-10
C). No congelar.

Muestra.- Suero, Plasma o LCR

Reaccin de Ag-Ac de
floculacin en lmina.

Permite anlisis cualitativo y

cuantitativo
 PROCEDIMIENTO
Tanto los reactivos como la
muestra tienen que estar a
temperatura ambiente, antes de
realizar la prueba.

PRUEBAS CUALITATIVAS EN SUERO:

- Muestra 50ul + 1 Gota de Reactivo
- Agitamos horizontalmente la placa a 180 rpm durante 4minutos.
- Observamos inmediatamente en microscopio con poco aumento.

PRUEBA SEMICUANTITATIVA EN SUERO

- Preparar diluciones de la muestra 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32, con solucin salina
fisiolgica y realizar para cada dilucin la prueba como si fuera cualitativa.
 Prueba que te ayuda al monitoreo de la enfermedad
VDRL nica prueba que est estandarizada para ayuda
diagnostica de neurosifilis.

LECTURA E INTERPRETACIN
Reactivo : Presencia de floculacin
No reactivo : Ausencia completa de floculacin
Prueba semicuantitativa : El ttulo estar dado por la
inversa de la ltima dilucin que se observe reactiva.
 RPR (Rapid Plasma Reagin)
Fundamento del Mtodo
RPR-carbn es una tcnica no treponmica de
aglutinacin en porta para la deteccin cualitativa y
semicuantitativa de reaginas plasmticas en suero
humano. Las partculas de carbn sensibilizadas con
una mezcla de lpidos, son aglutinadas en presencia
de reaginas presente en la muestra del paciente.
 Reactivo.- Suspensin de antgeno de cardiolipina,
lecitina y colesterol adsorbido sobre partculas de
carbn especialmente tratado en buffer fosfatos con
cloruro de colina.

Muestra.- Suero fresco o plasma. No LCR

Reaccin Ag-Acs de floculacin en tarjeta.

Conservar a 2-8C, No congelar

Control positivo y Control negativo

 PROCEDIMIENTO
Mtodo cualitativo en suero
- Depositar 50ul de la muestra y una gota del reactivo de
RPR-carbn.
- Mezclar las gotas con un palillo , procurando extender la
muestra por toda la superficie del circulo.
- Situar sobre un agitador rotatorio 80-100rpm por 8
minutos.

o Mtodo Semicuantitativo
- Realizar diluciones dobles de la muestra en solucin salina
9g/L
- Proceder para cada dilucin como en la prueba cualitativa.
 LECTURA E INTERPRETACIN

Presencia de aglutinacin visible en forma de grumos negros

sobre el fondo claro que indica la presencia de REAGINAS en la
muestra.
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para
controlar la funcionalidad del reactivo de carbn.

Las pruebas se reportan como : Reactivo y No Reactivo

Cuando se tiene que titular:
Ejemplo:
REACTIVO : Suero diluido
REACTIVO : 2 Diluciones
 TECNICAS TREPONMICAS
Son ms complejas y suelen usarse como pruebas
confirmatorias cuando la prueba no treponmica es
reactiva.

Utilizan el antgeno de T. pallidum de la cepa Nichols y se

basan en la deteccin de anticuerpos dirigidos contra los
componentes celulares treponmicos.
Absorcin de anticuerpos fluorescentes treponmicos (FTA-ABS)
Microhemaglutinacin de anticuerpos contra T. pallidum
(MHA-TP).

Estas pruebas confirman el diagnostico de la sfilis pero no indican

si la enfermedad est activa o curada; a menudo siguen siendo
reactivos por aos.
 Las tcnicas ms ampliamente usadas son RPR y
VDRL en screening y para determinar la eficacia del
tratamiento.

El test de Treponema usa T. pallidum subs. Pallidum

o sus derivados (protenas recombinantes). Ellos son
usados como Test de confirmacin y para establecer el
diagnostico de Sfilis tarda o latente tarda.

Las tcnicas ms usadas son: FTA-ABS, TP-PA

(aglutinacin de partculas de T. pallidum). Han sido
usados varios test de ELISA como test de
confirmacin de sfilis.
 ELISA
Basado en la reaccin de los anticuerpos de la
muestra con el antgeno unido a la superficie de
poliestireno. Las inmunoglobulinas no unidas por
reaccin con el antgeno son eliminadas en el
proceso de lavado. En un paso posterior la
globulina anti-humana reacciona con el complejo
antgeno-anticuerpo y la que no se une es
eliminada por los lavados; la unida reacciona con
el sustrato (TMB), para dar una reaccin
coloreada azul, que cambia a amarillo tras la
adicin de la solucin de parada.
 CARACTERSTICAS

Todos los reactivos a excepcin de la solucin de lavado

viene listos para su uso.
Las soluciones de dilucin de muestras y de conjugado
estn coloreadas como ayuda a la realizacin de la
tcnica.
No se precisa dilucin previa de la muestra.
Los pocillos son individuales, por lo que slo se
consumen tantos pocillos como pruebas se van a
realizar.
Nuevas pruebas diagnosticas
El estudio del genoma completo del T. pallidum y la
tecnologa de ADN recombinante, que involucra la
clonacin expresin y purificacin de antgenos
treponmicos como TpN15, TpN17. TpN47 y TmpA
han llevado al desarrollo de pruebas de anticuerpos
treponmicos de nueva generacin, como son las tiras
inmunocromatogrficas, enzimoinmunoensayos
(EIA), Westerblot (WB) y reaccin en cadena a la
polimerasa. (PCR).
Western blot
El inmunoblot o enzimoinmunoensayo de membrana es un
mtodo que consiste en transferir protenas a una membrana
sinttica. Las membranas sintticas pueden ser de
nitrocelulosa o nylon, stas luego se cortan en tiras y se
incuban con la muestra del paciente, en el WB se usa un
segundo anticuerpo marcado con una enzima y sustrato o con
material luminiscente. Mediante WB se logra la identificacin
de un antgeno especfico mediante anticuerpos
monoclonales o policlonales, por una reaccin cromognica o
luminiscente; es importante destacar que ste mtodo es
altamente sensible ya que detecta cantidades muy pequeas
de antgeno. Mediante WB pata T. pallidum mediante
anticuerpos tipo IgM e IgG o ambos se puede detectar los
antgenos ms relevantes como TpN15, TpN17, TpN37, TnP45,
TmpA, y TpN47.
El WB de tipo IgM es de gran valor para la confirmacin de
Sfilis congnita.
 PCR
El PCR para T. pallidum utiliza cebadores diseados a
partir de fragmentos de ADN del gen TpN47. Se puede
realizar a partir de MUESTRAS como lquido
amnitico, suero neonatal y LCR neonatal, tambin se
puede usar en sangre y tejidos; permite detectar de 1 a
10 treponemas por muestra.
 GRACIAS