BIOLOGIE MOLCULAIRE

(COURS DE 1RE ANNE)

 PLAN DU COURS
INTRODUCTION GNRALE
- Dfinition : biologie molculaire
STRUCTURE ET PROPRITS GNRALES DES ACIDES NUCLIQUES
- Structure : ADN et ARN
- Proprits biologiques et chimiques du DNA
ORGANISATION DES GNES ET RPLICATION DU DNA
- Comparaison cellules procaryotes et eucaryotes
FLUX DE L INFORMATION GNTIQUE : MCANISMES MOLCULAIRES DE
L EXPRESSION DES GNES
- TRANSCRIPTION DU DNA OU BIOSYNTHSE DU mRNA
- TRADUCTION OU BIOSYNTHSE DES PROTINES
EXPLORATION ET MANIPULATION DES GNES : BIOTECHNOLOGIE DE L ADN
RECOMBINANT
- Clonage des gnes
- Transgnse
NOTIONS SUR LA PATHOLOGIE DU DNA
- Mutation
- notion de thrapie gnique (gne mdicament)
 INTRODUCTION GNRALE

Dfinition de la biologie molculaire = tude de la vie l chelon molculaire : domaine trs

vaste (trop?) de la biologie.
= commande, mise en uvre et rgulation des fonctions molculaires (cellule, tissu, organisme)
Biologie du gne = biochimie gnomique

(Rplication de
l ADN)
division
S1
Biosynthse des
S2 protines = traduction
Survit

S3 Expression de gnes
spcifiques
S4 diffrenciation

Mort cellulaire
physiologique Fragmentation
(apoptose) de l ADN
ADN = molcule universelle de l hrdit chromosomique (except certains virus)

n=23 n=23
miose Cellules germinales Cellules haploides
= gamtes
mle femelle
fcondation

2n=46 Cellule diploide

Transmission de l ADN = caractres gntiques d un individu

Transmission d une altration de l ADN = pathologies molculaires (mucoviscidose,
drpanocytose, myopathies )
Flux de l information gntique

ARN t
Effets biologiques
Gnes = ADN ARN m protines -dveloppement
transcription traduction
-diffrenciation
-mtabolisme ...
rplication
Rgulation : activation
ou rpression

ADN et ARN = commande la vie cellulaire Protines = effecteurs

Altration de l ADN ou ARN protine dfectueuse situation pathologique (ex. cancer)

Grandes tapes des avances en biologie molculaire
Naissance du concept de gne

1865 : Travaux de Mendel : (publis par De Vris en 1900) thorie de l hrdit

particulaire
1880-1920 : hrdit chromosomique (travaux de Morgan sur la drosophile)

Gne = lment sur chromosome, responsable d un caractre

volution du concept de gne : hrdit molculaire

1944 et 1952 : Travaux de Avery (pneumocoques) et Hershey et Chase

(bactriophages) : ADN = support physique et chimique des gne
1953 : Watson et Crick : double hlice de l ADN Naissance de la
Biologie
1957 : gne et structure primaire d une protine molculaire
1961 : Concept de l ARN messager un gne -une enzyme (Jacob et Monod)
1963 : dcouverte du code gntique (Niremberg, Ochoa et Khoranea)

Gne = segment d ADN codant une protine

 Depuis 1970 : dveloppement techniques : la rvolution gnomique
(gne =outil = entit manipulable)
dcouverte : - des enzymes de restriction
- la transcriptase inverse (ARN ADN)

- Techniques de Squenage des gnes (application au gnome humain)

- Clonage molculaire des gnes ( clonage organismes)
- Trans-gense animal (souris KO) et vgtal (OGM)
- Usine cellulaire : production de protines recombinantes (depuis 1980)
- Identification de gnes responsables de maladies (mutations : diagnostic)
- Traitement des maladies du gne : thrapie gnique (maladies gntiques,
cancers)
- Thrapie cellulaire
STRUCTURE ET PROPRITS DES ACIDES
NUCLIQUES
ADN = Acide dsoxyribonuclique
Acide nuclique (noyau) (+ mitochondries, chloroplastes, procaryotes)
ARN = Acide ribonuclique = polymres de nuclotides
Nuclotide = base azote + sucre (pentose) + acide phosphorique

nucloside
Bases

Purine
pentose pentose
Pyrimidine

Bases puriques Bases pyrimidiques

Adnine (A) Guanine (G) Thymine (T) Cytosine (C) Uracile (U)

(ADN) (ARN)
 Les diffrents nuclotides
Base purique ou
pyrimidique
N9 : base purique
N1 : base pyrimidique
= liaison N-glycosidique
Groupement
phosphate Pentose
- ribose (RNA) OH en 2
- dsoxyribose (DNA) H en 2

ADN : 4 types de nuclotides

Dsoxyadnylate Dsoxythymidilate
Dsoxyadnosine 5 monophosphate Dsoxythymidine 5 monophosphate (dTMP)
(dAMP) (dGMP) (dCMP)
ARN

Adnylate, adnosine Uridylate, uridine

5 monophosphate (AMP) 5 monophosphate (UMP)
(GMP)
AMPc et GMPc
 Union de plusieurs nuclotides : formation des polynuclotides

Extrmit 5
PO4 libre
Liaison
phosphodiester
5 5
(liaison covalente)

DNA pol
RNA pol

3 3

Extrmit
3 OH libre ADN
ARN

Extrmit 5 A T C G A
C1
C3 Extrmit 3
( gauche)
P P P P P OH ( droite)
C5
5 3
p ATCGAOH ou ATCGA : ordre des bases = information gntique
Oligonuclotide polynuclotide
Structure tridimensionnelle du DNA: la double hlice (Watson et Crick 1953 prix Nobel en 1962))
- 2 chanes nuclotidiques (2 brins) antiparallles

5 3

3 5

Appariement des bases

- complmentarit des bases 5 A T 3

C G
En face de : A on a : T G C
A T
En face de : C on a : G . .
. .
3 C G 5
Brin 1 Brin 2

Raisons de cette complmentarit : 1 - encombrement strique (purine + pyrimidine)

2 - formation de liaisons hydrogne
 A T
6
7
1
5 3 5

4 3 2 2 1 6
8
9

P dsoxyribose dsoxyribose P
G C

P dsoxyribose
dsoxyribose P
- appariement des bases (stabilit relative, possibilit de dnaturation)
- squence des bases = information gntique
Ex : 5 CTAGCGGA 3
3 GATCGCCT 3

Produit = protine Produit = son musical

 - conformation spatiale de l ADN
Chane sucre 5 3
phosphate

Interaction avec Petit sillon

3,4 nm (10 pdb)
des protines
(Facteurs de d entre 2 bases = 34A
transcription) Grand sillon

Paires de bases

3 5

2,0 nm
Mise en vidence des proprits biologiques de l ADN
Travaux de Morgan : hrdit chromosomique
Exprience de transformation des pneumocoques (Avery-Mc Leold-Mc Carty) (1944)

Capsule
polyosidique

Forme S ( smooth ) Forme R ( rough )

virulente Non virulente
 Mort de la souris
Forme S

La souris reste vivante

Forme R

La souris reste vivante

Forme S tues
par la chaleur

Mort de la souris

Mlange forme R + forme S tues par la chaleur

Conclusion : existence d un principe transformant R en S
Exprience complmentaire : prparation d extrait acellulaire de S tues par la chaleur
+ Protines La souris reste
vivante
Forme R

+ ADN Mort de la souris

Forme R

Conclusion : le principe transformant est l ADN

Exprience de Hershey et Chase (1952)
Capside protique

ADN

Bactriophage T2
Problme : ADN ou Protine qui infecte ? Utilisation de T2 marqus au 32P ou au 35S
Protine
ADN marqu au 32P marque au 35S

Eschrichia coli

Sparation bactrie et phages et analyse du contenu de la bactrie : prsence de 32P pas de 35S
ADN pntre dans la bactrie

Multiplication de T2 : 32P retrouv dans la descendance

ADN = support de l information gntique
 Structure des acides ribonucliques (ARN ou RNA)
Monocatnaire
A U
ADN + court Appariement possible
Sucre = ribose
C G - pingles cheveux (mRNA)
Bases A, C, G et U ( T) - tRNA

ARN ribosomial (rRNA) (80%)

Ribosomes = usine protines de la cellule : RNA (65%) + protines (35%)

Procaryotes (E.coli) Eucaryotes

rRNA 5S et 23 S
50 S 60S
34 protines

r RNA 16S
mRNA 30S (1542 nuclotides) 40S
70 S (S = Svedberg) 21 protines 80 S

ARN messager (mRNA) (F. Jacob et J. Monod 1961)

= copie de l un des deux brins ADN d un gne (transcription)
Message = Code trois lettres 3 nuclotides (triplet) = codon spcifique d un acide amin
Dcodage : grce aux tRNA
 ARN de transfert = tRNA
tRNA (adaptateur)

AA codon

mRNA

Acide amin
Bras acide
Extrmit 3
amin
Extrmit 5

ribose
Bras DHU Bras Ty C
ribose 1-mthylguanine
Dihydrouridine
(DHU)

ribose
Bras anticodon

Structure en feuille de trfle d un tRNA

Pseudouridine (y)
Proprits Physico-chimiques des acides nucliques
Absorbance dans l UV
absorbance DO ADN db [1mg.ml-1] = 20
DO ARN ou ADN monocatnaire = 25
Simple brin
Effet hyperchrome
Double brin
Intrt : quantification ADN et ARN

l (nm) puret des Acides nucliques

220 260 300

Dnaturation thermique
Temprature de ADN dnatur
Chaleur fusion

Absorbance 260nm

Tm fonction :- de la taille de l ADN

Temprature C
Tm - nombre GC
80 100

renaturation refroidissement