Universidad de Chile

Facultad de Medicina
Curso Histopatologa 2007

Tincin Histolgica
Tutora: TM Solange Zapata
Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz

3 de Mayo del 2007

Tcnica Histolgica
Fijacin
Deshidratacin
Aclaramiento Seminario Anterior

Inclusin
Corte
Tincin
Montaje
Tincin y Montaje
Corte
Desparafinado Rehidratacin
Tincin
Deshidratacin
Montaje
Cubreobjetos: funciones
Proteccin del tejido
refraccin de luz polarizada
 Colorantes
Por qu colorear una
muestra?
Los diversos elementos de
los tejidos poseen
prcticamente el mismo
ndice de refraccin, lo que
hace que el reconocimiento
de distintas estructuras sea
una tarea difcil.
Definicin de Colorante
Un colorante es un cuerpo coloreado que
puede comunicar su color a otro cuerpo.
La coloracin es la propiedad que tienen ciertos
cuerpos de ejercer una absorcin selectiva
sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se
ve de tal color porque trasmite por transparencia
o por difusin las radiaciones complementarias
de las que l absorbe.
Tipos de Colorantes
Colorantes que diferencian los componentes
cidos y bsicos de la clula.

Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos de la matriz
extracelular.

Sales metlicas que se precipitan en los tejidos

y forman depsitos de metales en ellos.
Tipos de Coloraciones
Directas: se producen por inmersin en el bao
colorante.

Indirectas: en este tipo de coloracin, el

colorante no puede actuar directamente, el
objeto a colorear debe ser tratado de antemano
por otra sustancia que lo prepare para admitir el
colorante, esta se llama mordiente.
Fundamentos Qumicos de la
Coloracin
Clasificacin colorantes segn afinidad:

Colorantes nucleares o bsicos: su componente

colorante activo es una base coloreada que se
combina con los cidos nucleicos.
Colorantes citoplasmticos o cidos: su componente
activo es un cido coloreado que se combina con el
citoplasma.
Colorantes neutros, tanto el cido como la base son
coloreadas.
Colorantes bsicos
ANILINA+ Cl-

Los colorantes bsicos reaccionan con los

GRUPOS ANINICOS de los componentes
texturales, que son los grupos fosfato de los
cidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos
SULFATO de los glucosaminoglucanos y los
GRUPOS CARBOXILO de las protenas. La
reaccin de estos grupos vara segn el pH.
Colorantes cidos
Na+ ANILINA-

Los colorantes cidos se unen primariamente a

los componentes texturales por medio de
enlaces electrostticos de manera similar pero
opuesta a la de los colorantes bsicos. Las
anilinas cidas reaccionan con grupos
catinicos, como los grupos amino ionizados
de las protenas.
Entonces:
Elementos que se tian Elementos que se tian
con colorantes bsicos
(ej. Hematoxilina) son
basfilos:
La Heterocromatina y los
Nucleolos por los grupos
Fosfato ionizados.
Ergatoplasma por grupos
Fosfato ionizados.
Matriz del Cartlago por
grupos Sulfato ionizados
con colorantes cidos (ej.
Eosina) son acidfilos:
La mayor parte del
citoplasma no especializado.
Filamentos Citoplasmticos.
Fibras extracelulares. Todos
estos debidos a grupos
Amino ionizados.
Metacromasia
Fenmeno por el cual un colorante cambia de color
tras reaccionar con un componente textural.
Se debe a que en tejidos con altas concentraciones
de POLIANIONES, la molcula del colorante se
polimeriza entre si y sus propiedades de absorcin
son diferentes de las propiedades de las molculas
individuales.

Cromtropos: Glucosaminoglucanos
sulfatados, nucleoprotenas, cartlago,
grnulos de los mastocitos. El cristal
violeta tambin genera metacromasia
al teir amiloide
Azul de Toluidina tie grnulos mastocito prpura
Tincin (coloracin) de cortes

Diferentes
componentes
celulares y tisulares
poseen diferentes
afinidades tintoriales.
Tincin (coloracin) de cortes
 Hematoxilina-Eosina
Tcnica de tincin ms usada.
Hematoxilina:
Colorante natural.
Propiedades similares a las anilinas
bsicas.
Tie todas las estructuras celulares,
pero principalmente el ncleo
(Histonas).

Eosina:
Colorante cido.
Accin es la de una anilina cida.
Tie ppalmente citoplasma celular.
Cortes de piel
Tincin
Hematoxilina-Eosina
Tcnica de Tincin H/E
Tincin con hematoxilina.

Lavado con abundante agua.

Aplicar Borato de Potasio.

Cambia el color generado por la hematoxilina del

morado al azul.

Aumenta el contraste de color.

Tcnica Tincin H/E II
Diferenciacin:
Eliminacin selectiva del exceso de colorante.

Se obtiene pasando el corte por un bao de alcohol cido.

Resalta ncleos.

Azuleamiento:
La tincin queda de color rojizo se vira a azul intenso

Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de

litio al 1% en agua.

Eosina
Obtenemos ncleos azules, citoplasma rosado y
colgeno y fibras musculares rosado plido.
Cubre-objeto
Una vez teido el
tejido debe ser
protegido con un
cubre-objeto.
Deshidratar
Medio de montaje
Limpieza de lminas
Anlisis de placas

TCNICAS ESPECIALES DIAGNSTICO

10% biopsias 80-90% bp
Tinciones
Especiales
Tinciones para Amiloide

H/E Rojo Congo

(cortes 30 mm)
Tinciones para Amiloide

Birrefringencia
 c

Bacterias

c Gram negativo: colonias bacterianas se tien

rojas
a
d

a y b Gram positivos:
tincin azul d FITE: bacilos cido resistentes
se tien rojo
Bacterias II

Ambas placas con tincin Ziehl Neelsen

Bacilos cido resistentes se tien rojo brillante
Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina

Von Kossa: depsitos de calcio

Se tien caf oscuro-negro
 Colgeno I: protena extracelular,
predominante en dermis, funcin estructural

bb
a e
a y b Picrosirius: Colgeno I
color amarillo-rojizo
e Van Gieson: colgeno I rojo

c d

c y d Tricromico Masson: colgeno I verde

Colgeno III: o fibras de Reticulina, en
dermis perineural, perivascular

Impregnacin con Nitrato de Plata:

fibras de reticulina se tien negras
Eosinfilos

Tincin Giemsa, eosinfilos se ven rojos

Fibras elsticas

HE Orcena cida de Pinkus/Giemsa:

fibras de coloracin pardo oscura
Fibrina

ambas, Tincin de Picro-Mallory: Fibrina se tie rojo claro

Tambin PAS
Hemosiderina

a Grnulos de Hemosiderina sin teir, de colora

a cin amarillo-caf birrefringentes

b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

b
 b

Hongos

b
b PAS para Criptococo (rojo)

a Mucicarmin para teir Criptococo:

hongos de coloracin azul-violcea

c Tincin de PAS evidenciando

Blastomicosis cc
 Hongos II c Tincin de Gomori para Criptococo

c
a

a PAS esporas fungicas

b PAS Coccidiomicosis
en ambas, hongos se tien
rojos

b
Lpidos slo en tj fijado
en formalina + cortes
por congelacin

bb Sudan III: adipocitos rojos

a Sudan IV: adipocitos anaranjados

c
c Sudan black b: Lpidos azul-negruzcos
Mastocitos

ambas, Tincin con Azul de Toluidina:

grnulos de Mastocitos azul-prpura
(metacromasia)
Mastocitos

ambas, Tincin de Giemsa, donde los grnulos de los

Mastocitos son teidos prpura
 Melanina

ambas, Tincin de Fontana Masson

pigmento melnico se tie negro
Principales
colorantes
 Tricrmico de Masson

Principal Uso: Colgeno.

Tie:
Colgeno Verde.
Ncleo, msculo y nervios
Rojo oscuro.
Citoplasma amarillo
 Van Gieson

Principal Uso: Tejido

Fibroso

Tie:
Colgeno rojo.
Ncleo azul negro
Msculos, nervios
amarillos
(+Verhoeff) fibras
elsticas negro
 Fontana Masson

Principal Uso: Melanina

Tie:
Melanina Negro.
 Plata Metenamina

Principales Usos: Hongos y

Cuerpos de Donovan

Tie:
Paredes micticas
Negros.
Cuerpos de Donovan negro
 PAS

Principales Usos:
Glucgeno, MPS neutros y
Hongos, Membrana basal.

Tie:
Glucgeno Diastasa lbil.
MPS neutros y Paredes
micticas Diastasa
resistentes.
 Reaccin positiva para
glucgeno y polisacridos
neutros.

+ DIASTASA

Reaccin positiva slo para

polisacridos neutros.
Azul alcin

Principal Uso:
Mucopolisacridos
cidos

Tie
Mucopolisacridos
cidos (mucina)
Azul.
Azul de toluidina

Principal Uso:
Mucopolisacridos
cidos

Tie
Mucopolisacridos
cidos Purpura
metacrmico.
Giemsa

Principales usos: Grnulos

mastocitarios, MPS cidos,
eosinfilos, leishmanias,
mdula sea

Tie:
Grnulos mastocitarios,
Mucopolisacaridos cidos
Prpura.

Eosinfilos, leishmanias
Rojo.
Eosinfilos en mucosa gstrica
Ferrocianuro de Potasio de Perls.

Principal Uso:
Hemosiderina

Tie:
Hemosiderina Azul
Rojo Congo
Principal Uso:
Amiloide.

Tie
Sustancia amiloide
Roja con luz, Verde
con luz polarizada
Von Kossa

Principal Uso: Calcio

Tie:
Calcio Negro.
Naftol AS-D cloroacetato esterasa

Principal Uso:
Mastocitos y
Neutrfilos

Tie:
Grnulos de
mastocitos y
neutrfilos Rojo
Orcena cida de
Pinkus/Giemsa

Principal Uso: Fibras

elsticas.

Tie:
Fibraselsticas
Pardo oscuro.
Histopatologa es como la espada del augurio
hacen ver ms all de lo evidente