Un plsmido es una

molcula de ADN circular,

extracromosmico,
bicatenario,
superenrrollado, que se
replica de forma
independiente del genoma
y que puede ser
propagado en una
poblacin.
 Son pequeos 5,000 -40,000 pb.
Replicacin independiente y rastreabilidad.
Tienen un nico origen de replicacin.
Suelen llevar slo uno o pocos genes.
Molcula de DNA circular.
Pueden conferir ventajas selectivas al organismo
que lo posee.
Son transmisibles. Resistencia a antibiticos.
 Permiten obtener preparaciones de cantidad y
calidad adecuadas que son la base de la mayora
de los protocolos en biologa molecular.

La mayora toma en cuenta las diferencias

topolgicas entre los plsmidos circulares y los
fragmentos cromosomales lineales, y el tamao
de ambos.
 Uno de los mtodos ms utilizados es el de
desnaturalizacin alcalina en presencia del detergente
dodecil sulfato de sodio (SDS).

o Puentes de hidrgeno de cadenas complementarias de DNA

se rompen y las cadenas permanecen cercanas entre s.

o Cadenas lineales o rotas de DNA se liberan o separan

completamente.

o Si una mezcla de plsmido desnaturalizado y de DNA

cromosomal se renaturalizan rpidamente, la fidelidad de la
reasociacin es diferente para ambas macromolculas.
o La renaturalizacin de los
plsmidos circulares es rpida
debido a que las cadenas estn
prximas.

o Las molculas lineales de DNA

se renaturalizan menos
precisamente, formando redes
de DNA o agregados que
pueden ser removidos de la
suspensin por centrifugacin.

o El plsmido permanece en la
solucin y puede ser
precipitado con alcohol
despus de que el DNA
cromosomal ha sido removido.
 Se han desarrollado un gran nmero de mtodos
para la purificacin de DNA plasmdico de
bacterias y todos ellos implican invariablemente
tres pasos:

1. Crecimiento de la estirpe bacteriana portadora

en medio de cultivo
2. Recogida y lisis de las bacterias
3. Purificacin del DNA plasmdico
o Realizar el aislamiento de DNA plasmdico.
o Conocer los fundamentos para la purificacin del
DNA plasmdico y su separacin de DNA genmico.
 5mL de medio Luria-Kanamicina (30g/mL)
Solucin GTE: 50mM glucosa, 25mM Tris/HCl
pH=8.0 y EDTA 10mM pH=8.0
Solucin de lisis: 0.2N NaOH y 1% SDS p/v
3M Acetato de potasio pH=4.8
70% Etanol, Isopropanol
10 N NaOH
10% SDS
 1.- Dodecil Sulfato de Sodio (SDS)
Disuelve la membrana

Se une a las protenas y las desnaturaliza

2.- NaOH Desnaturaliza DNA (rompe los

puentes de hidrgeno entre ambas
cadenas)
2.- Acetato de potasio/ cido actico
A) Neutraliza el NaOH (renaturalizacin de DNA
plasmdico, se restablecen los puentes de
hidrgeno).

B) Convierte al SDS soluble a la forma insoluble PSD

Dodecil Sulfato de Sodio (SDS) Dodecil Sulfato de Potasio (PDS)

(H2O sol. = 10%) (H2O sol. < 0.02%)
DNA plsmidico separado de los
contaminantes por centrifugacin
El sobrenadante contiene:
- El DNA del plsmido
- Los componentes celulares solubles

Pellet contiene:
- PDS
- Lpidos
- protenas
- El DNA cromosmico
 Snchez Nieto, Sobeida. Manual de Prcticas de
Bioqumica Experimental. Facultad de Qumica,
Departamento de Bioqumica Bsica. Semestre
2012-2
Mendoza DF Prcticas de Laboratorio de Biologa
Molecular: Su Aplicacin en Gentica Bsica.
Editorial de Universidad del Rosario, Colombia,
2010. p 58-62
Alberts, B; A, Johnson; J, Lewis; M, Raff; K, Roberts
& P, Walter. 2007. Molecular Biology of the Cell. 5th.
ed. Garland Science. N.Y., EE.UU