LIMPIEZA , DESINFECCIN

Y PREPARACIN DE LOS
MATERIALES PARA SU
ESTERILIZACIN

LIC. TM. RUIZ RAMOS JOHN

 FLUXOGRAMA DE
DESCONTAMINACIN Y
ESTERILIZACIN DE
MATERIALES DE
LABORATORIO
DEFINICIONES

a) Esterilizacin : Proceso que destruye toda forma de vida microbiana. Un

objeto estril (en sentido microbiolgico) est libre de microorganismos
vivos.
b) Desinfeccin : Es la destruccin, inactivacin o remocin de aquellos
microorganismos que pueden causar infeccin u ocasionar otros efectos
indeseables; la desinfeccin no implica necesariamente esterilizacin.
c) Desinfectante : Agente usualmente qumico, que mata las formas en
crecimiento de los microorganismos, pero no necesariamente las esporas.
El trmino se refiere a sustancias utilizadas sobre objetos inanimados.
d) Antisptico : Sustancia que impide el crecimiento o la accin de los
microorganismos, ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y
actividad. Se aplica sobre superficies corporales.
e) Sanitarizante : Agente que reduce la poblacin microbiana a niveles
seguros, segn los requerimientos de salud pblica. Se aplica en objetos
inanimados de uso diario, por ejemplo utensilios y equipos para
manipular alimentos, vasos, platos y otros objetos de uso similar.
f) Germicida : Agente que mata a los microorganismos, pero no
necesariamente a sus esporas.
g) Bactericida : Agente que mata a las bacterias.
h) Bacteriosttico : Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias,
mientras permanece en contacto con ellas.
i) Fungicida : Agente que mata los hongos.
j) Fungisttico : Agente que inhibe el crecimiento de los hongos,
mientras permanece en contacto con ellos.
k) Virucida : Agente que destruye los virus.
l)Asepsia. Conjunto de procedimientos para lograr la ausencia de
microorganismos.
m)Atmsfera. Antigua unidad de presin que equivale a 101 325 Pa
(pascales) o a 14,69 libras por pulgada cuadrada.
n)Limpieza. Remocin mecnica de toda materia extraa ubicada en las
superficies de objetos inanimados; por lo general, comprende la
utilizacin de agua limpia combinada con algn detergente.
FACTORES QUE INFLUYEN EN LA VELOCIDAD DE DESTRUCCIN DE LOS
MICROORGANISMOS

a) Temperatura:
Las temperaturas elevadas tienen efectos dainos sobre los
microorganismos y se debe tener en cuenta que cuando, adems de la
temperatura, tambin se utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos
en la temperatura aceleran la destruccin de los microorganismos. Por
ejemplo, la muerte de una suspensin bacteriana por fenol es mucho ms
rpida a 42C que a 30C.
b) Tipo de microorganismos:
Las especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los
agentes fsicos y qumicos. En las especies formadoras de esporas, las
clulas vegetativas son mucho ms susceptibles que las formas
esporuladas.
c) Estado fisiolgico de las clulas:
El estado fisiolgico de los microorganismos puede influenciar la
susceptibilidad a un agente antimicrobiano. Las clulas jvenes,
metablicamente activas, son ms fcilmente destruidas que las clulas
viejas cuando el agente acta interfiriendo con el metabolismo.
d) Ambiente.
Las propiedades fsicas y qumicas del medio o sustancia donde se
encuentran los microorganismos, tambin tienen una profunda influencia
sobre la eficacia de la destruccin microbiana, por ejemplo, el calor es
mucho ms eficaz en materiales cidos que en materiales alcalinos.
La consistencia del material influye notablemente en la penetracin del
agente. La presencia de material orgnico puede reducir significativamente
la eficacia de un agente qumico, ya sea inactivndolo o protegiendo de l a
los microorganismos si estn presentes.
MTODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

Mtodos Fsicos:
Calor Hmedo (Ej. Autoclave).
Calor Seco (Ej. Horno).
Radiaciones (Ej. Ultravioletas).
Filtracin (Ej. Filtros Millipore).

Mtodos Qumicos:
Antispticos (Ej. Alcohol).
Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro).
CALOR HMEDO: AUTOCLAVE
El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios
para esterilizar cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a
temperaturas mayores a 100C. Una temperatura de 121 C ( 15 Lbs de
presin) con un tiempo de exposicin de 15 minutos sirve para destruir
microorganismos, incluso los formadores de esporas.

Ventajas del calor hmedo:

Rpido calentamiento y penetracin.
Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo.
No deja residuos txicos.
Hay un bajo deterioro del material expuesto.
Econmico.
Desventajas del Calor Hmedo:
No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el
agua.
Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.
Materiales que se pueden esterilizar con vapor:
- Material textil - Material de vidrio- Material de goma-
Instrumental quirrgico de acero inoxidable- Soluciones acuosas -
Todo aquel material cuyo fabricante certifique pueda ser
esterilizado por vapor.
Materiales que no se pueden esterilizar con vapor:
- Sustancias oleosas- Sustancias grasas- Polvos- Instrumental
quirrgico cromado o niquelado- Artculos elctricos sin cobertura
especial- Todo material que no tolera la exposicin al calor y a la
humedad.
CALOR SECO: HORNO
Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la
accin del calor. El calor provoca en ellos coagulacin y
desnaturalizacin de sus protenas.
La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de :
-- Temperatura
-- Tiempo de exposicin
La estufa de esterilizacin ( Horno ), es el artefacto utilizado en los
laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor
temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura
vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de
exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin,
mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.
HORNO

Ventajas del Calor Seco:

No es corrosivo para metales e instrumentos.
Permite la esterilizacin de sustancias en polvo , no acuosas, y de sustancias
viscosas no voltiles.
Desventajas del Calor Seco:
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la
baja penetracin del calor.
Materiales que pueden esterilizarse por calor seco.
Instrumental quirrgico cromado- Materiales de vidrio, aluminio o porcelana-
Aceites, parafina, sustancias grasas, vaselina- Polvos (talco).
Materiales que NO se pueden esterilizar por calor seco
- Material textil (algodn, sedas, lino, etc.)
- Gomas - Materiales sintticos - Todo material que se altere a la temperatura
trabajo.
Temperatura
La temperatura de esterilizacin por Calor Seco
deber estar entre 160 C 170 C.
MTODOS QUMICOS:
La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las
que actan:
Concentracin: vara con el tipo de agente y de microorganismo, pues
una misma concentracin del agente puede producir un efecto
diferente en distintos microorganismos.
Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la
misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al
mismo tiempo.
pH: el pH determina el grado de disociacin y la efectividad del agente
qumico, pues a menor disociacin, mayor permeabilidad y mayor
efectividad.
Listado de Desinfectantes

Compuestos Fenlicos: Metales Pesados:

Fenoles Bicloruro de mercurio
Cresoles Nitrato de plata
Alcoholes: Vapores y Gases:
Etlico Formaldehdo (2 5 %)
Isoproplico Ozono (O3)
Halgenos: Oxido de etileno
Yodo Glicol.
Cloro cidos:
Oxidantes: cido actico (1%)
Perxido de hidrgeno cido brico
Permanganato de potasio
Colorantes:
Azul de metileno
Giemsa
Acridina
GERMICIDAS Y SUS MECANISMOS DE ACCIN

Inorgnicos :

1.- Metales: Los ms efectivos son el mercurio, plata ,cobre y zinc.

Actan inactivando las protenas celulares al combinarse con ellas. Entre
los compuestos de mercurio que se emplean como antispticos en
heridas superficiales de la piel y mucosas estn el mercurocromo
(mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos de plata utilizados
como antispticos est el nitrato de plata (AgNO3) . Entre los
compuestos de cobre se encuentra el sulfato de cobre (CuSO4) que se
utiliza como algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. Los
compuestos de zinc tambin son fungicidas por lo que se utilizan para
tratar el pie de atleta

2.- Acidos y lcalis: Actan alterando la permeabilidad y coagulando las

protenas. En general los cidos son ms eficaces que los lcalis. Dentro
de estos compuestos se encuentran el sulfrico (H2SO4), ntrico (HNO3),
hidrxido sdico (NaOH) e hidrxido potsico (KOH).
3.- Compuestos inorgnicos oxidantes: actan oxidando los componentes de
la membrana y enzimas. El agua oxigenada (H2O2) al 6% (20 volmenes) se
utiliza como antisptico en pequeas heridas de la piel.

4.- Halgenos: Los halgenos especialmente el cloro y el iodo son

componentes de muchos antimicrobianos. Los halgenos son agentes
fuertemente oxidantes por lo que son altamente reactivos y destructivos para
los componentes vitales de las clulas microbianas. El iodo es un antisptico y
el cloro un desinfectante.

Cloro: La muerte de los microorganismos por accin del cloro se debe en

parte a la combinacin directa del cloro con las protenas de las membranas
celulares y los enzimas. El cloro es un desinfectantes que actan sobre
protenas y cidos nucleicos de los microorganismos. El producto clorado
ms utilizado en desinfeccin es el Hipoclorito de sodio ( NaOCl ), que es
activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas. El hipoclorito de sodio
al 1% se puede utilizar como desinfectante domstico y hospitalario, y de
hecho es el ms barato, pero tambin el ms efectivo. La nica desventaja
reconocida es su relativa toxicidad provocando reacciones alrgicas en
algunas personas

Iodo: El mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su accin antimicrobiana

es debido a su accin oxidante. El iodo se puede utilizar como antisptico
Orgnicos :

a) Alcoholes: Los alcoholes actan desnaturalizando las protenas,

disolviendo las capas lipdicas y como agentes deshidratantes. Se recomienda
la utilizacin del Alcohol Etlico, no desnaturalizado, o Alcohol Isoproplico al
70%. El etanol al 70% se usa como antisptico de la piel y como desinfectante
en los termmetros clnicos orales y algunos instrumentos quirrgicos. El
etanol y el isopropanol son utilizados como desinfectantes y antispticos
clnicos. Tomar en cuenta que el alcohol etlico al 70% tiene un efecto
bacteriosttico y que al 95% su efecto es bactericida.
Su actividad cae bruscamente en concentraciones menores al 50%. Las
bacterias sometidas a la accin de alcohol concentrado sufren destruccin de
la pared celular, permitiendo el paso de contenido intracelular y
componentes de la pared celular al medio externo (endotoxinas). El alcohol
tiene la ventaja de no ser corrosivo.

b) Fenol y compuestos fenlicos: Una solucin acuosa al 5% de fenol mata

rpidamente a las clulas vegetativas de los microorganismos. Sin embargo,
las esporas son mucho ms resistentes al fenol. Debido a que el fenol es
txico y tiene un olor desagradable ya casi no se usa como desinfectante o
antisptico, siendo reemplazado por compuestos fenlicos que son
sustancias derivadas del fenol menos txicas y ms activas frente a los
microorganismos.
FILTRACION

los microorganismos pueden ser

eliminados de los liquidos
haciendolos pasar atraves de filtros
especiales los cuales poseen poros
u orificios los cuales no permiten el
paso de bacterias de mayor tamao,
mas sin embargo no es muy
efectivos pues haty organis,mos
mucho mas pequeos que pueden
atravesar los poros como los virus
y las esporas etc.
Material sucio y empaquetado en
papel kraft
Envoltorio de materiales y presentacion final
Acomodo de los materiales en el autoclave y presentacin final
USO DEL AUTOCLAVE

poner el material en el autoclave por 15 min. a 120centigrados.

luego se retira el material ya enfriado y ponerlo en el lavadero.
remojar en agua y detergente por 2 horas.
luego de ello enjuagar con agua corriente y dejarlo en remojo 15 min.
enjuagar y finalmente pasarlos por agua destilada.
al final secar los materiales en el horno a 60 grados
Descontaminacin , desinfeccin y esterilizacin de materiales
de laboratorio :

Como pueden ser materiales de vidrio(matraces , tubos,

placas, frascos etc.)
Recipientes con heces fecales
Recipientes con orina
Tubos con muestra de sangre
Pipetas
Laminas portaobjetos sucios.