LABORATORIO DE

CULTIVO DE TEJIDOS
VEGETALES
ESTRUCTURA, EQUIPO, MATERIALES E INSTRUMENTOS.
I. ESTRUCTURA
Lo ms caracterstico de un laboratorio de cultivo de tejidos es el
mantenimiento de la asepsia. El rea de trabajo para realizar cultivos debera
de estar en una habitacin aislada, aunque la aparicin de las cmaras de flujo
laminar ha reducido estas necesidades de aislamiento.

La estructura y condiciones ambientales de un laboratorio de cultivo celular

vara notablemente entre aquel que trabaja con agentes patgenos-bacterias,
virus, etc. y aquel que no los utiliza.
1. Area de preparacin. Se utiliza principalmente para prepara los medios de cultivo, pero debe
proveer tambin un espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plstico, y los reactivos
qumicos.

2. Area de lavado y esterilizado. Puede estar constituida por dos reas conectadas entre si y
puede estar localizada dentro del rea general de preparacin.

El rea de lavado debe incluir por lo menos un lavado grande, botellas para el agua destilada,
basureros para el material vegetal, inorgnico y de vidrio que se deseche.

El rea de esterilizado debe tener espacio para el autoclave vertical u horizontal. Esta rea
tambin puede incluir espacio para estufas, secadoras y un lavadero con agua caliente y fra.

3. Area de transferencia. En esta rea del laboratorio se realiza el trabajo de excisin, inoculacin
y transferencia de los explantes a los medios de cultivo. Dado que este trabajo demanda los ms
altos niveles de limpieza ambiental, se recomienda la instalacin de
4. Area de incubacin. Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o
cmaras de crecimiento. El rea de incubacin debe tener una temperatura de (20-28 C),
iluminacin variable 1000 a 5000 lux y humedad relativa (70-80 %). En el cuarto de
incubacin se instalan estanteras metlicas o de madera para colocar.

Estas estanteras tiene medidas variables y puede tener de ancho 0,30 m y 1 m, de largo
de acuerdo con el tamao del cuarto y la altura de 1.80 a 2.20 m. esta rea debe incluir
adems, un espacio para cultivos en agitacin y para cultivos estticos en oscuridad. Es
necesario propiciar una buena distribucin del aire en este cuarto para evitar zonas de
recalentamiento por efecto de las luces.

5. Area de observacin y examen. Generalmente los microscopios se localizan tanto en el

rea de incubacin como en la de transferencia, pero opcionalmente pueden estar en un rea
separada.
6. Area de crecimiento. Las plantas que se regeneran se pueden acondicionar o aclimatar y
luego trasplantar en macetas, bandejas o camas apropiadas.

Las reas arriba se pueden considerar como el ncleo del laboratorio del cultivo de tejidos,
pero adems se deben contar con las siguientes instalaciones:

7. Areas de cuarentena y control fitosanitario. El rea de cuarentena sirve para la recepcin de

las muestras o plantas destinadas a la limpieza clonal. El rea de control sanitario es donde se
realizan las pruebas para comprobar la sanidad del material vegetal, especialmente de
enfermedades causadas por virus, bacterias y hongos.

8. Area de oficina. En esta rea se debe ubicar el mobiliario de oficina como escritorios,
archivos y almacenamiento de datos, los libros de referencia y de control del laboratorio, los
catlogos y otros documentos. Tambin se coloca en ella el equipo de clculo o computacin.
Consta de:
una zona central donde se encuentran los aparatos de uso general (incubadores,
etc.) pequeas dependencias donde se encuentran las cabinas de flujo laminar
para trabajar en condiciones de esterilidad.
Tres salas acondicionadas para el cultivo in vitro de plantas con temperatura y
fotoperiodo controlados.
II. EQUIPO

Cabina de flujo laminar

La funcin de estas cabinas es
mantener el rea
de trabajo donde manipulamos
las clulas libres
de contaminantes.
 MICROSCOPIOS
El control microscpico del cultivo se realiza con un microscopio en el cual la
fuente de iluminacin y los objetivos se encuentran en posicin invertida
respecto de los microscopios pticos convencionales. Por ello se suelen llamar
microscopios invertidos.
 INCUBADORAS

Una incubadora sirve para mantener y hacer crecer

cultivos microbiolgicos o cultivos celulares,
regulando factores de crecimiento viables como
por ejemplo la temperatura, la humedad y la
ventilacin.
 CONGELADORES Y EQUIPO DE CRIOGENIA

Es recomendable disponer de distintos equipos que mantienen temperaturas bajas.

Existen sistemas automticos para la reduccin progresiva y controlada de la
temperatura.
 AUTOCLAVE

Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un

cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin
industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua.
 Otros instrumentos

Balanzas Bao termostatado

Centrfugas

Equipos de purificacin de agua pHmetro

 III. MATERIALES
El substrato y el medio de cultivo
Para poder realizar un cultivo de tejidos es preciso:
Un recipiente, donde se realiza el cultivo
o Placa de Petri de tamaos 3.5, 6.0 y 10 cm
o Multiplacas, con varios pocillos de 6 a 96 son las ms frecuentes
o Frascos de Roux de diferentes formas y tamaos
o Especiales, como las roller bottles o los que llevan incorporados un portaobjetos
 Un substrato, donde las clulas se adhieren y crecen

Una fase gaseosa donde es de gran importancia el oxgeno y el dixido de carbono. El

primero de ellos, imprescindible para la vida de las clulas. El segundo, fundamental para
la regulacin del pH del medio de cultivo.

Un medio lquido que recubre o en el que estn suspendidas las clulas y que las nutre.
Este es el medio de cultivo que presenta una serie de caractersticas como:

Propiedades fsicas

Composicin qumica

Antibiticos y anti fngicos, para evitar el crecimiento de bacterias y hongos. Los ms

utilizados son penicilina, estreptomicina, gentamicina, fungizona y anfotericina-B
IV. INSTRUMENTOS
GRACIAS POR SU ATENCION!!