ENZIMAS

CATALIZADORES BIOLÓGICOS QUE:

Velocidades de reacción 106-1012 > que las reacciones no

catalizadas y varios órdenes de magnitud más que la catálsis
química.

Requieren condiciones de reacción “suaves”:

<100°C, P atm, pH (+/-) neutro

ESPECIFICIDAD: no hay productos “secundarios”

Mecanismos de regulación:

Alosterismo, modificación covalente, cantidad de enzima

Enzimas : Catalizadores biológicos
Disminuyen energía de activación e incrementan la velocidad de
reacción
•Catalasa.
•2H2O2 -> 2H2O + O2
•Una molécula de catalasa rompe 40
millones moléculas de peróxido por
segundo.
Factores que influyen en la actividad enzimática

•Concentración de sustrato [S]

•Temperatura

•Inhibidores

•Competitivos: unen mismo sitio de l sustrato

•No competitivos: unen sitio diferente pero disminuyen
capacidad catalítica

•pH. Afecta conformación

 Estructura terciaria: fuerzas no covalentes

Actividad enzimática

pH Temperatura °C

Cambios en pH alteran el
estado de ionización de aa
cargados (e.g., Asp, Lys):
unión a sustrato o acción
catalítica
Puentes de hidrógeno se rompen por
incrementos de temperatura
: altera la conformación 3D
Estereoespecificidad: proteasas: L-aa
D-glucosa
Especificidad geométrica: pocos compuestos
relacionados
PRINCIPALES REACCIONES DE LAS ENZIMAS
 COFACTORES ENZIMÁTICOS
NO PROTÉICOS

Pueden ser:
•Iones metálicos : Zn2 +,Cu2 +, Mn2 +, K+, Na+ , Ca+2
•Moléculas orgánicas pequeñas:coenzimas.

•tiamina (B1 ) Tiaminpirofosfato (transf. Aldehído)

•riboflavina (B2 ) FAD (transf. H+)
Nicotinamida NAD (transf. H+)
•CoA Acarrea acilo

Coenzimas se unen covalentemente a la apoenzima:

Grupo prostético

Otras sólo transitoriamente durante la catálisis

 CINÉTICA ENZIMÁTICA
Estudio de las velocidades a las que ocurren las reacciones

Permite dilucidar Mecanismos de reacción

Se pueden conocer:

Afinidades de unión a sustratos e inhibidores

Máxima velocidad catalítica
Mecanismo catalítico
Papel de una enzima en la vía
Velocidad a cantidad de enzima: condiciones de
Medición de las enzimas para BQ y Análisis clínicos
 ECUACIONES DE VELOCIDAD

REACCIONES ELEMENTALES

A P

A I1 I2 P
INTERMEDIARIOS
A TEMPERATURA CONSTANTE:

LA VELOCIDAD DE REACCIÓN VARÍA CON LA

CONCENTRACIÓN DE LOS REACTIVOS

aA + bB + cC + ...+ nN P

La velocidad es proporcional a la frecuencia de

Choques simultáneos entre los reactivos

Velocidad = K[A]a [B]b [C]c... [N]n

Cte. Proporcionalidad
Cte. De velocidad
 ORDEN DE LA REACCIÓN

Σ EXPONENTES DE LA EC. DE VELOCIDAD

Velocidad = K[A]a [B]b [C]c... [N]n

(a+b+c...+n)

ara
A P
Orden = molecularidad=
#moléculas que deben chocar simultáneamente
Reacción de primer orden
Unimolecular
 ara
2A P o A+B P
Reacción de segundo orden
Bimolecular

er. Raro 4°??????!!!!!

ara determinar orden de la reacción se mide:

A] o [P] en f (tiempo)

velocidad= -d[A]/dt = dP/dt

ECUACIÓN DE MICHAELIS- MENTEN

1902: ADRIAN BROWN :

SACAROSA + H2O GLUCOSA+ FRUCTOSA

INVERTASA

CUANDO SACAROSA>>>ENZIMA

REACCIÓN INDEPENDIENTE DE SACAROSA:

ORDEN CERO

k1 k2
E + S k-1 ES P + E
COMPLEJO
ENZIMA-SUSTRATO
 k1 k2
E + S ES P + E
k-1

Cuando [S] es
suficientemente Se vuelve el paso
alta para que toda E limitante

Insensible a más adición de [S]

V= d[P]/ dt= k2[ES]

d[ES]/dt= k1[E][S]-k-1 [ES]-k2[ES]

No es integrable!!!!!!!!!!
Sustrato está en exceso

constante

Briggs y Haldane 1925

 V= d[P]/ dt= k2[ES]

d[ES]/dt= k1[E][S]-k-1 [ES]-k2[ES]

[ES]/dt=0 edo estacionario y [E]T= [E] +[ES]

No medibles

[ES]= [E]T[S] / KM + [S]

Donde KM = (k-1 + k2)/ k1= cte. de Michael

Entonces:
o= (d[P]/dt)t=0 = k2[ES]= k2 [E]T [S] / KM + [S]

medibles
¿Porqué considerar únicamente tiempos iniciales?

Vo: minimiza efectos de reversibilidad

inhibición por producto
inactivación enzimática

Vmax: ocurre a alta [S]: enzima está saturada: [ES]

0
[E]T=[E]+[ES] Vo=k2[ES]

Vmax= k2[E]T
Si Vo= k2 [E]T [S] / KM + [S] y Vmax= k2[E]T

Vo= Vmax [S] / KM + [S]

ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
 HIPERBOLA
RECTANGULAR

=CTE. MICHAELIS
 Cuando [S]=KM

Vo= Vmax / 2

KM = [S] a la que la velocidad de reacción

Es la mitad de la velocidad máxima
KM = [S] a la que la velocidad de reacción
Es la mitad de la velocidad máxima

Si KM es pequeña: requiero poco sustrato

para alcanzar la mitad de Vmax:

Se logra máxima eficiencia catalítica a baja [S]

KM depende de cada enzima

sustrato
temperatura y pH
 k1 k2
E + S ES P + E
k-1

KM = (k-1 + k2)/ k1

KM = (k-1 / k1)+ (k2 / k1)

Cte. de Disociación de [ES] = Ks

Ks= 1 / 0.1 = 10 Ks= 1 /10 = 0.1

[E] + [S] [ES] [E] + [S] [ES]

>disociación < afinidad X S <disociación >afinidad X S

KM = (k-1 + k2)/ k1

KM = Ks +(k2 / k1)

Si es pequeño
predomina Ks

KM es una medida de afinidad

 Cálculo de parámetros
Poco preciso

Lineweaver-Burk

Ec. Doble recíprocos

Vo= Vmax [S] / KM + [S] 1 KM 1 1

Vo= Vmax [S] + Vmax

ECUACIÓN DE ECUACIÓN DE
MICHAELIS-MENTEN Lineweaver-
Burk
 1 KM 1 1
Vo= Vmax [S] + Vmax
Y= m x + b

=m

=b