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HISTOQUIMICA DE LOS HIDRATOS DE CARBONO

Histoqumica es la aplicacin de reacciones qumicas y


bioqumicas en la tcnica histolgica, con el fin de
localizar y determinar de manera cientfica ciertas
sustancias o su actividad.
En todas estas reacciones o bien se tie la sustancia que
buscamos o los colorantes reaccionan qumicamente con
ella, como es el caso del PAS.
Los hidratos de carbono o glcidos son polialcoholes
oxidados (polihidroxicetonas o polialdehidos). Los
polisacridos son glcidos formados por la unin de
muchas molculas de monosacridos (mas de 10).
GENERALIDADES
Son aldehdos o cetonas
polihidroxilados
Eritrosa Ribosa Xilusosa Fructosa

Aldehdo: aldosas
Cetona: cetosas
FUNCIONES
ENERGTICA
Estructural
Informativa

Plegamiento correcto
Marcador
Evitar degradacin
Aportar cargas neg.
solubilidad
Funciones:
Energtica
Estructural
Sealizacin
CLASIFICACIN
MONOSACARIDOS SIMPLES
MONOSACARIDOS DERIVADOS
OLIGOSACARIDOS
POLISACARIDOS SIMPLES
POLISACARIDOS DERIVADOS
Ejemplos: monosacridos
simples
Triosas: gliceraldehdo,
dihidroxiacetona
Tetrosa: eritrosa, eritrulosa
Pentosas: ribosa, desoxirribosa,
ribulosa, xilulosa
Hexosa: glucosa, fructosa, galactosa
MONOSACARIDOS
DERIVADOS

POR OXIDACIN
POR REDUCCIN
DESOXIDERIVADOS
AMINODERIVADOS
POR OXIDACIN
Los extremos de la cadena carbonada de
los monosacridos pueden oxidarse para
dar cidos carboxlicos:
Si la oxidacin tiene lugar en el carbono 1
se obtienen los cidos aldnicos
Si la oxidacin tiene lugar en el carbono 6
se obtienen los cidos urnicos
Si la oxidacin tiene lugar en los carbonos 1
y 6 se obtienen los cidos aldricos
COOH
Oxidacin del H C OH
grupo al dehdo HO CH
H C OH
cido aldnico H C OH
CH2OH
CHO D-gluconic acid
H C OH
HO CH
H C OH La oxidacin de un grupo
H C OH terminal CH2OH cido
COOH urnico
D-glucuronic acid
Oxidacin de Aldehdo + term CH2OH
cido aldrico
COOH
H C OH
HO CH
H C OH
H C OH
COOH
D-glucaric acid
POR REDUCCION
Las aldosas y cetosas, por reduccin
del grupo carbonilo del carbono
anomrico da lugar a polialcoholes
(alditoles):
Glicerol, manitol, sorbitol (glucitol),
inositol.
DESOXIDERIVADOS
La sustitucin de un
OH alcohlico por
un H da lugar a los
desoxiderivados.
AMINOAZCARES
La sustitucin de un grupo OH de los
monosacridos por un grupo amino
(NH2) da lugar a los aminoderivados.
La sustitucin suele producirse en el
carbono 2
glucosamina

galactosamina

N-acetilglucosamina
Disacridos
OLIGOSACARIDOS
Polmeros de hasta 20 unidades
Formados por enlaces glucosdicos
Disacridos: 2 monosacridos iguales o
distintos
Los 4 grupos sanguneos estn determinados por los
oligosacridos que se encuentran unidos a los lpidos o a
las protenas de la cara externa de las membranas de
los eritrocitos.
Grupo O Grupo A Grupo B

Glucosa
Galactosa

Fucosa

N-acetil-
glucosamina
N-acetil-
galactosamina
DISACARIDOS
Lactosa:
Maltosa:
Celobiosa:
Sacarosa:
POLISACARIDOS SIMPLES
Se utilizan para almacenamiento o
estructurales
Estructura lineal o ramificada
Formados por ms de 20 monosacridos
Formados por un solo tipo:
homopolisacridos
Formados por dos o ms:
heteropolisacaridos
Funcin de reserva: almidn, glucgeno
Funcin estructural: celulosa, quitina
Almidn: reserva
energtica de los
vegetales
Homopolisacrido
Glucosa
Mezcla de 2
polisacridos:
Amilosa y amolipectina
La proporcin vara.
MAIZ
Amilasas ( glndulas
ARROZ
salivales y pncreas)
Entre los polisacridos adems de los polisacridos
simples como el glucgeno destacan los polisacridos
complejos.

Los polisacridos complejos se dividen en 3 grandes


grupos:
1. Mucopolisacaridos que pueden dividirse en :
- Mucopolisacaridos neutros
- Mucopolisacaridos cidos

2. Mucoprotenas

3. Mucolpidos.
POLISACRIDOS:
Hidrolizados, dan ms de seis molculas de monosacridos.
Estn formados por la unin de muchos monosacridos, de 11 a
cientos de miles.
Sus enlaces son O-glucosdicos con prdida de una molcula de agua
por enlace.

Pueden ser:
-Homopolisacridos.
-Heteropolisacridos.
CARACTERSTICAS:
-Peso molecular elevado.
-No tienen sabor dulce.
-Pueden ser insolubles o formar dispersiones coloidales.
-No poseen poder reductor.
-Sus funciones biolgicas son estructurales (enlace beta-
glucosdico), o de reserva energtica (enlace alfa-gucosdico).
Homopolisacridos:
Son polisacridos que al ser hidrolizados, producen slo molculas
de monosacridos.
Ejemplos:
-Glucgeno.
-Almidn.
-Celulosa.

Heteropolisacridos:
Son polisacridos que al ser hidrolizados, producen molculas de
monosacridos y otros compuestos diferentes a estos.
Ejemplo:
-Glucosaminoglucanos.
GLUCOSAMINOGLUCANOS:
-cidos:
*No sulfatados.
*Sulfatados.
-Neutros.

MUCOPROTEINAS:
-cidas.
-Neutras.

GLUCOPROTEINAS:
REACCIN DEL CIDO PERYDICO DE SCHIFF (P.A.S.)
Fundamento:
El cido perydico y el cido crmico oxidan los grupos alfa-glicol,
con la consiguiente formacin de grupos aldehdos.
Estos son reconocidos por el reactivo de Schiff producindose un
color rojo magenta.

Mtodos diferenciales para el estudio de los carbohidratos:


-Hidrlisis enzimtica.
-Coloraciones histoqumicas.
-Reacciones Histoqumicas.
El acido perydico (I04H) reacciona con los enlaces 1-2 glicol
(-CHOH-OHHC-) transformndolos en aldehdos (-COH HOC-) donde se fija el
reactivo de Schiff (SO3H)2

El cido perydico no acta cuando los grupos glicol estn bloqueados por
radicales cidos.
Glucosaminoglucanos cidos:
Se caracterizan por su contenido de aminoazcares y un cido.
-No sulfatado:
*cido hialurnico.
*Condroitina.
*Sialomucinas.

CARACTERSTICAS HISTOQUMICAS DEL ACIDO


HIALURNICO:
-Reaccin de P.A.S. Negativa.
-Alcian Blue positivo a Ph= 2.5.
-Hierro coloidal positivo.
Metacromasia beta.
Glucosaminoglucano cido Sulfatado:
-Condroitina-4-sulfato.
-Sulfato de dermatana.
-Condroitina-6-sulfato.
-Heparina.
Caractersticas:
-Reaccin de P.A.S. Positiva.
-Alcian Blue positivo a pH=1.5.
-Hierro coloidal positivo.
-Metacromasia gamma.
Glucosaminoglucanos neutros:
-No tienen grupos cidos libres.
-Estn constituidos por N-acetil-hexosaminas (aminoazcares),
unidades simples de hexosas.
-Se unen firmemente a protenas.
-HQ. Es similar a las mucoprotenas.
-Fundus de la mucosa gstrica.
-Hongos.
-Glndulas pilricas.
-Glndulas de Brunner.
Caractersticas HQ. De los glucosaminoglucanos neutros,
mucoprotenas y glucoprotenas:
-Reaccin de P.A.S. Positiva.
-Reaccin de P.A.S. Positiva despus de digestin por la enzima
diastasa.
-Reaccin de P.A.S. Positiva despus de la extraccin de lpidos.
GLUCGENO
Tiene una estructura ramificada con unidades lineales de 11 a 18
alfa-D-glucopiranosa con unin glucosdica en alfa (1-4), con
ramificacin mediante uniones glucosdicas en alfa (1-6).

Fijadores:
-No recomendable los fijadores acuosos.
-No debe contener sustancias que destruya los gruposa qumicos que
entran en juego en los mtodos de preparacin.
-Se prefiere fijadores alcohlicos a temperatura de refrigeracin.
-El alcohol no fija el glucgeno, l.o preserva ya que ste es insoluble
en l.
-Coagula las protenas que se hallan alrededor del glucgeno.
-El alcohol penetra lentamente produciendo la polarizacin del
glucgeno.
CARACTERSTICAS HQ. DEL GLUCGENO:
-Es P.A.S. Positivo.
-Es Carmn de Best positivo.
-Es Alcian Blue negativo.
-Es Hierro coloidal negativo.
-Digerido por la diastasa:
*P.A.S. Negativo.
*Carmn de Best negativo.
TCNICA DEL PAS (cido Peridico Schiff)

Consiste en oxidar los tejidos mediante el cido peridico


(HIO4) para incrementar el nmero de grupos carbonilo
(aldehdo o cetona) presentes en ellos, de forma que
puedan ser demostrados posteriormente mediante
reactivo de Schiff.
Los hidratos de carbono contienen grupos carbonilos
relativamente aislados, en una proporcin aproximada de
uno por molcula de monosacrido. Precisamente por ello
es necesario oxidarlos con el fin de incrementar dichos
grupos, que solo pueden ser detectados por el reactivo
de Schiff si se encuentran situados en carbonos
contiguos y delimitados por grupos alcohlicos o amino.
Para los grupos aldehidos que aparecen en posicin 1,2 glicol
estas condiciones se cumplen exclusivamente tras la
oxidacin de los correspondientes radicales hidroxilo.
A. Procedimiento Tcnico:
Fijacin:
- Formol al 4 % o Lquido de Carnoy o Bouin.
cido Peridico0.5 % p/v.

- Reactivo de Schiff:
Fucsina bsica (CI: 42510) 1g.
Agua destilada... 200 ml.

Disolver la fucsina en 200 ml de agua (d) hirviendo.


Dejar enfriar hasta aproximadamente 50 C. y filtrar
Posteriormente agregar 20 ml de HCl 1N. Despus enfriar
hasta 25 C y aadir 1g de Bisulfito sdico o
Metabisulfito potsico (sdico).
Mantener en la oscuridad. El liquido tarda unos 2 das o a
veces 24h en tornarse de color amarillo que indica que
est listo para su uso.
Aadir 2g de carbn activado, mezclar y filtrar hasta que
desaparezca el color.
La solucin debe conservarse en el refrigerado protegido
de la luz.

Bao de cido Sulfuroso o Agua sulfurosa:
- cido Clorhdrico (HCl) 1N 5 ml.
- Metabisulfito sdico 10 %... 6 ml.
- Agua (d)... 100 ml.

Colorante de contraste: Hematoxilina, Orange G o


Van Gieson.
Tcnica de Tincin:

1. Desparafinar e hidratar (xilol y decrecientes alcoholes)


2. cido peridico 0.5 % 5 min.
3. Lavar en agua (d).
4. Reactivo de Schiff.. 15- 30 min.
5. Aclarar en 3 baos de agua sulfurosa 2 min.
Cada uno.
6. Lavar en agua corriente
7. Colorante de contraste
8. Lavar con agua corriente.
9. Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
A.Material PAS +: rojo oscuro a magenta.
B. Compuestos PAS +
1. polisacridos simples: como el glucgeno y la celulosa.
2. Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio
gstrico, en glndulas del duodeno y en cpsulas
bacterianas, tambin en intestino y estmago.
3. mucoprotenas como son algunas mucinas del tubo
digestivo y del rbol respiratorio o bronquial, tambin
la tiroglobulina que est en el tiroides y la hormona
estimulante.
4. Glucoprotenas del suero
5. Glucolpidos: como los ganglisidos y cerebros idos.
C. Compuestos PAS
Los mucopolisacaridos cidos no pueden ser oxidados por
el cido peridico y por eso son PAS (ya que no
aparecen los grupos carbonilos).

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