UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS
E.A.P BIOTECNOLOGA

BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL

DOCENTE: Roberto Vega Paulino

CICLO: VIII
TEMA: Aislamiento de una levadura para la
produccin de vino
INTEGRANTES:
1. Abad Ruiz Berenice
2. Cachay Salinas Sayuri
3. Colan Romero kimberly
4.Dvila Escudero Yeik
5. Valencia Castillo Milagritos
 INTRODUCCIN
En la elaboracin de los vinos, una etapa fundamental es la
fermentacin alcohlica la cual es una conversin bioqumica
de los azcares en etanol por accin de las levaduras
(Pasteur, 1857).
El gnero Saccharomyces destaca por su mayor eficiencia en
la conversin de azcares y su tolerancia a concentraciones
elevadas de etanol y dixido de azufre (SO2), y es el gnero
fermentativo por excelencia (Rainieri y Pretorius, 2000).
Los criterios de inters general para seleccionar cepas de
levaduras enolgicas incluyen buena eficiencia fermentativa,
baja produccin de dixido de azufre (SO2) y cido sulfrico
(H2SO4).
MATERIALES Y MTODOS

Tubos de ensayos (5 x cada 2 das).

Cepa de levadura
Pipetas (5 x cada 2 das).
Placas Petri (10)
Agua destilada
Agar
Algodn
Agar dextrosa
Mechero
Aza bacteriolgica (1)
 MTODOS:

OPTENCION DE LA LEVADURA:
Las levaduras se obtendr a partir de mosto de uva que se indujeran a
fermentaciones espontneas a 25 C
La recuperacin de las levaduras se llevara a cabo utilizando la tcnica
de vertido en placa. Se tomaran alcuotas del mosto en fermentacin
cada 54 horas por 11 das, se realizaran diluciones decimales (1/9) de
las cuales se tomaran 1 mL de muestra que se sembraran en medio de
cultivo Agar Papa Dextrosa (APD), adicionado con ampicilina (100
ug/mL) se incubaran a 25 C entre tres y cinco das
MTODOS:
MEDIO DE CULTIVO AGAR PAPA DEXTROSA (APD)
Gramos Ingredientes
~1000 Agua destilada
4 Papas
(infusin de slidos)
20 Dextrosa
15 Agar polvo

La infusin de papa se puede preparar hirviendo 200 g de papas cortadas

en rodajas sin pelar en ~ 1 litro de agua destilada durante 30 minutos y
luego decantar o filtrar el caldo a travs de una gasa.
Se aade agua destilada de manera que el volumen total de la
suspensin es 1 litro.
Se aaden 20 g de dextrosa y agar en polvo (20 g), el medio se esteriliza
en una autoclave (121 C).
 Las levaduras que desarrollaran en las
placas se separaran con base en su
morfologa colonial y se purificaran
mediante transferencias a placas de
"Agar Malta , adicionado de solucin de
tetraciclina(500 ug/ mL de medio)
AGAR MALTA
0,5 gr de Agar
0,25 gr de Destroza
0,075 gr de extracto de levadura
0,075 gr de extracto de malta.
0,125 gr de Peptona
Todo esto se afor hasta los 25 ml deseados.
MTODOS:
AISLAMIENTO DE LEVADURAS
AEROBIAS EN PLACAS DE AGAR

a)Aislamiento por vertido en placa

b)Aislamiento por estras

SIEMBRA DE LEVADURAS EN
TUBOS
MOSTO DE UVA EN PROCESO DE
FERMENTACIN

1. Lavamos la uva
2. Lo depositamos en una fuente
3. Luego procedemos a sacar las pepas
de c/u de las uvas
4. Procedemos aplastarlas
5. Finalmente lo depositamos en un
matraz de 1000mL a temperatura
ambiente por 54h.
 PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO AGAR PAPA
DEXTROSA (APD)

Procedimiento:
1. Pesamos tanto la dextrosa como el agar
en polvo.
2. Luego cortamos en pequeos trozos la
papa con toda y cscara y pesamos solo
200gr.
3. Despus procedemos hacer la infusin
durante 30min y luego filtramos a travs de
una gasa. Medio Agar
papa dextrosa
Calentamos el agar.
 Pasadas las 54h procedemos a sacar las levaduras presentes del mosto
de la uva fermentado para proceder hacer las diluciones a las siguientes
concentraciones:
Se realizo las diluciones en solucin
salina estril y se sembr en dilucin de
, ,
Disolvemos 500ug de tetraciclina
en el agua destilada estril, y se le
agreg al medio 2 ml de esta
solucin
 Agregamos el medio agar papa
dextrosa a las placas Petri por el
mtodo de placa vertida.
Se agitaron las placas Petri con las muestras para
culminar el sembrado, y se las dej secar por 15
minutos antes de cerrarlas.
 Sembrado por Placa Vertida

Crecimiento de Crecimiento de Crecimiento de

las levaduras a las levaduras a las levaduras a las
las 30 horas, las 30 horas, 30 horas, dilucin
dilucin dilucin
Sembrado en placas
 Tambin se realiz el sembrado en placas petri que
contiene el medio agar papa dextrosa por estras con
las disoluciones de , ,
 Sembrado por Estras

Crecimiento de las Crecimiento de las

levaduras a las 24 horas, levaduras a las 24 horas,
dilucin dilucin
Placa petri con crecimiento de
levaduras

Levaduras vista en el
microscopio a 40X

Portaobjeto con muestra de

levadura
PREPARACIN DEL MEDIO
MALTA

Se prepar 25 mililitros de
agar malta con las siguientes
proporciones:
0,5 gr de Agar
0,25 gr de Destroza
0,075 gr de extracto de
levadura
0,075 gr de extracto de
malta.
0,125 gr de Peptona
Todo esto se afor hasta los
25 ml deseados.
Viales con agar para el sembrado de
levaduras, para posteriormente
identificar a Saccharomyces.
 Sembrado del
crecimiento de las
levaduras en las placas en
los frascos de penicilina
Frascos de penicilina conteniendo el
sembrado de las levaduras
MUESTRA 4
MUESTRA 3

MUESTRA 2
 SEMBRADO EN
ESTRIA A LOS 11 DIAS
DE INCUVACION DEL
MOSTO

VISTA AL
MICROSCOPIA 40X
Placas contaminadas
Evidencia
Evidencia de sembrado
Crecimiento en viales
Crecimiento en tubos
MUESTRA
Pasterizacin
ARMADO DEL EQUIPO DE DESTILACIN
INICIO DE LA
DESTILACIN
 Datos:
170mbar a
70C
Muestras finales
Resultado del
Alcohol:
11gL a 23C
PREPARACIN DEL VINO
 MATERIALES:
Matraz (3) de 1L
Pipetas
Probeta
Vaso de precipitacin
Levadura aislada
Embudo
Bao maria
Algodn
Gaza