MICROSCOPIA

Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen

Es la resolucin y no el aumento la que dicta los lmites que
pueden ser observados.
Para el M ptico los lmites de resolucin estn en 0.2um y
para el M electrnico los lmites aumentan hasta 1000 veces
La capacidad de aumento de un M compuesto se calcula
multiplicando el aumento del objetivo por la del ocular
El poder de resolucin est en funcin de la longitud de onda
de la luz y de la apertura numrica propiedad de la lente que
integra el objetivo
La mayora de los microscopios tienen oculares de 10 a 15X
y objetivos de 10 a 100X. Con los objetivos de 100X se usa el
aceite de inmersin.
TIPOS DE MICROSCOPIOS

Entre los microscopios pticos : campo claro, contraste de

fases, Normarski contraste de interferencia diferencial (DIC) ,
campos oscuro y fluorescencia
Microscopa electrnica:
electrnica de transmisin (TEM) y de barrido
(SEM)
 MICROSCOPIO OPTICO DE CAMPO CLARO Y OSCURO
En el M de campo claro la muestra
debe ser fina para que pueda ser
atravesada por la luz
Se deben usar mtodos de tincin
ya que el campo claro no produce
contraste
En el M de campo oscuro la nica
luz que entra en el objetivo es la
dispersada por la muestra
Los organismos se ven brillantes
sobre fondo oscuro y es til para
estudiar la motilidad de los
organismos
 El contraste de fases se basa en
que las clulas poseen diferentes
ndices de refraccin y producen un
desvo de los rayos de luz que da
lugar a una imagen oscura sobre
fondo brillante
El contraste de interferencia
diferencial (DIC) o Normarski usa
dos rayos de luz polarizada y las
imgenes aparecen como si la
clula estuviera proyectando DIC
sombras hacia un lado
El M de fluorescencia se usa para
muestras capaces de emitir
fluorescencia emitiendo luz dentro
FLUORESCENCIA
del espectro visible cuando es
expuesta a la luz UV
MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Clulas epiteliales triple
coloracin: ncleo (azul),
microtbulos (verdes),
actina (rojo)
200X

1000X
 MICROSCOPIO ELECTRONICO
Para estructuras internas se usa el TEM
que usa electrones en vez de rayos de luz
en cortes ultrafinos para ver cidos
nucleicos y protenas
Para mejorar el contraste se tratan con
acido smico, lantano, uranio o plomo
Para estructuras externas se usa el SEM
cubriendo la muestra con una capa de oro.
El haz de electrones del SEM barre la
superficie y los electrones desviados son
proyectados en una pantalla para producir
una imagen
Se pueden obtener rangos de
amplificacin de 15X a 100000X en la
superficie de los objetos


 FLUOROCROMOS

DAPI
Naranja de acridina
Rojo Texas
Ioduro de Propidio
FITC
Autofluorescencia
Rodamina
Para qu el microscopio?
Resolucin del ojo humano?
Resolucin del ojo humano?

Aproximadamente 1/10 milmetros

 Cul es el tamao de una
Escherichia Coli?

1x3 mm
1X3 m
1x3 nm
 Cul es el tamao de una
Escherichia Coli?

1x3 mm
1X3 m
1x3 nm
y de una clula animal tpica?

1 m
10m
100m
y de una clula animal tpica?

1 m
10m
100m
 Morfologa microscpica de
microorganismos.
Existen tres formas bsicas:

Esfricas (cocos)

Bastoncitos o cilndricas (bacilos)

Helicoidales (espirilos)
 La morfologa bacteriana se
puede observar de dos maneras

En estado vivo.

Muertas y coloreadas
 Tcnicas de tincin:
Los colorantes se clasifican en:

Bsicos o Catinicos. (azul de metileno,

safranina, cristal violeta )

cidos o aninicos. (eosina, fucsina

cida y rojo congo)
Clasificacin de las tinciones:
Negativas.
Tinta china, Nigrosina.
Positivas:
Simple (azul de metileno)
Diferenciales (Tincin de Gram)

Estructurales (capsulas, esporas ,flagelos)

 Tincin de Gram

1884 Cristian Gram

Es una tincin diferencial

Diferencia Gram+ de Gram -.

 PASOS DE UNA TINCIN TINCIN DE GRAM

Hacer el extendido y dejar secar

Fijar la muestra con metanol o calor
por flameado
Agregar cristal violeta y esperar 1 min,
todas las clulas se teirn de color
azul prpura
Enjuagar con agua
Agregar lugol (I2 / IK) y esperar entre
30 seg y 3 min
Enjuagar con agua
Agregar acetona/ alcohol y esperar
entre 15-20seg
Enjuagar con agua
Tincin de contraste con safranina o
fuscina bsica , esperar 1-2 min
 Tincin de Gram

Bacterias de
Bacterias de Escherichia coli
Clostridium (Gram negativas)
perfringens
(Gram positivas)
Gram + / Gram -
 Otras Tinciones:
Tincin de cido-resistencia: Detecta
bacterias acido resistentes saprfitas
(Mycobacterium tuberculosis)
(fucsina fenicada)

Tincin de esporas/ Schaeffer y

Fulton: Bacillus y Clostridium (verde de
malaquita)