INTRODUCCIN A LAS

SEPARACIONES
CROMATOGRAFICAS

Quimica Analitica III. 1

 Definicin:

La cromatografa es una tcnica que agrupa un conjunto

importante y diverso de mtodos, que permite separar
componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas,
lo que en muchas ocasiones resulta imposible por otros mtodos
Algo de Historia
-Mikhail Tswett invent esta tcnica a principios del siglo pasado
(cromatografa de pigmentos en columna de CO3Ca) y por lo tanto
el origen del nombre (chroma = color y graphein = escritura).

-Esta tcnica se desarrollo rpidamente y tubo un gran auge en la

ciencia. Esto se confirmo por la obtencin de premios Nobel. El
1se les otorg en 1952 a Martin y Synge y luego se otorgaron
12 premios ms relacionados con la cromatografa.

Quimica Analitica III. 2

 1-a) DESCRIPCION GENERAL DE LA CROMATOGRAFIA

En todas las separaciones cromatogrficas, la muestra se

disuelve en una fase mvil que se hace pasar a travs de una fase
estacionaria inmiscible la cual se mantiene fija sobre una columna o
sobre una superficie slida

Quimica Analitica III. 3

 Clasificacin General Mtodo especfico Fase estacionaria Tipo de equilibrio
Lquido-lquido, o reparto Liquido adsorbido por Distribucin entre
un slido lquidos inmiscibles

Lquido-fase enlazada Especie orgnica Distribucin entre un

enlazada a una sup. lquido y una superficie
slida enlazada
Cromatografa de
Lquidos (CL) Lquido-slido, o adsorcin Slido Adsorcin
(fase mvil: lquida)

Intercambio inico Resinas de intercambio Intercambio inico

inico

Exclusin por tamao Lquido en los Distribucin / exclusin

intersticios de un slido
polimrico

Gas - lquido Lquido adsorbido sobre Distribucin entre un gas

un slido y un lquido

Cromatografa de Gases Gas - fase enlazada Especies orgnicas Distribucin entre un

(CG) (fase mvil: gas) enlazadas a una slida lquido y una superficie
enlazada

Gas slido Slido Adsorcin

Quimica Analitica III. 4

1-b) Cromatografa de elucin en columna

Quimica Analitica III. 5

2- a) EFECTOS DE LAS VELOCIDADES DE MIGRACION
Y DEL ENSANCHAMIENTO DE BANDA EN LA
RESOLUCION

Perfiles de concentracin de las bandas de los analitos A y B a dos

tiempos distintos en su migracin a lo largo de la columna

Quimica Analitica III. 6

 Cromatograma de dos componentes ilustrando dos mtodos
para mejorar la separacin:
(a) cromatograma original con los picos solapados
(b) mejora producida por un aumento de separacin de bandas
(c) disminucin en la dispersin de las bandas

Quimica Analitica III. 7

 2- Velocidades de migracin de las especies

2-1. Constante de distribucin

A f. mvil A f. estacionaria

K =c E /c M (1)

Quimica Analitica III. 8

 2-2. Tiempo de retencin

v = L / tR (2)

u = L / tM (3)

Quimica Analitica III. 9

 2-3. Relacin entre el tiempo de retencin y las
constantes de distribucin
v = u . moles de analito en la f. mvil / moles totales de analito (4)

v = u . cM VM / cM VM + cE VE = u . 1/ 1 + cE VE / cM VM (5)

v = u . 1 / 1 + K VE / VM (6)

Quimica Analitica III. 10

 2-4. La velocidad de migracin del soluto:
el factor de capacidad
El factor de capacidad es un parmetro importante que con
frecuencia se utiliza para describir las velocidades de los analitos
en las columnas

kA = KA VE / VM (7)

Sustituyendo la ec. 7 en la ec. 6, se obtiene

v = u . 1 / 1 + kA (8)

L/tR = L/tM . 1 / 1 + kA (9)

Reordenando la ec.9 se obtiene

kA = tR - tM / tM (10)
Quimica Analitica III. 11
2-5. Velocidad de migracin diferencial:
el factor de selectividad

= KB / KA (11)

= kB / kA (12)

= (tR)B - tM / (tR)A - tM (13)

Quimica Analitica III. 12

 2-b. ENSANCHAMIENTO DE BANDA
La teora cintica, o de la velocidad de partculas,
de la cromatografa explica acertadamente en trminos
cuantitativos las formas de los picos y los efectos de las
distintas variables en el ensanchamiento de banda.

2-b-1. Las formas de los picos cromatogrficos

El exmen de los picos de un cromatograma o de las
bandas en las columnas revela una semejanza con las curvas
de error normal o gaussiana

Quimica Analitica III. 13

2-b-2. Mtodos para describir la eficacia de la columna

Dos trminos afines se utilizan con frecuencia como medidas

cuantitativas de la eficacia de una columna cromatogrfica:

- El nmero de platos tericos (N)

N = L/H (14)

- La altura de plato (H)

H = 2 / L (15)

Quimica Analitica III. 14

Definicin de la altura de plato H = 2 / L
Quimica Analitica III. 15
La evaluacin experimental de H y N

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 = / (L/tR) (16)

= L W / 4 tR (17)

Sustituyendo la ec. 16 en la ec. 14, se obtiene:

H = L W2 / 16 t2R (18)

Para obtener N, se sustituye en la ec. 13 y se reordena

para tener:

N = 16 (tR/W)2 (19)

Quimica Analitica III. 17

2-b-3. Variable cinticas que influyen en el ensanchamiento
de banda.

El ensanchamiento de banda se produce como

consecuencia de la velocidad finita con la que ocurren los distintos
procesos de transferencia de masa durante la migracin de una
especie a lo largo de la columna.

Variables que influyen en la eficacia de la columna

Variable Smbolo Unidades
Velocidad lineal de la f. mvil m cm s -1
Coeficiente de difusin en la f. mvil DM cm2 s-1
Coeficiente de difusin en la f. DE cm2 s-1
estacionaria
Factor de capacidad k s/ unidades
Dimetro de la partcula de relleno dp cm
Grosor del recubrimiento lquido en la df cm
f. estacionaria
Quimica Analitica III. 18
 Influencia del caudal de la fase mvil

La magnitud de los efectos cinticos sobre la eficacia de la

columna depende claramente del tiempo de contacto entre la f.
mvil y la f. estacionaria, el cual a su vez depende del caudal de la
f. mvil.

Quimica Analitica III. 19

 La eficacia de las columnas cromatogrficas puede
evaluarse por la expresin:

H = B/m + CE m + CM m (20) (ec. de van Deemter)

El trmino de la difusin longitudinal (B/m)

La difusin longitudinal es causal del ensanchamiento de

banda ya que los analitos difunden desde la zona ms concentrada
(centro de la banda) hacia regiones ms diluidas (por delante y por
detrs del centro de la banda)

B/m = 2kDDM / m

Quimica Analitica III. 20

 Coeficiente de transferencia de masa (CE y CM)

Transferencia de masa hacia y desde la f. estacionaria lquida

CEm = q kd2f m / (1 + k)2 DE

Transferencia de masa hacia y desde la f. estacionaria slida

CEm = 2 td k m / (1 + k)2

Transferencia de masa en la f. mvil

CM m = [ f(d2p, d2c,m ) / DM ] m

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Resumen de los mtodos para reducir el ensanchamiento de
banda

* Dos importante variables a controlar son: el dimetro de

partcula y el dimetro de la columna

Quimica Analitica III. 22

 En CG, la incidencia de la difusin longitudinal puede
reducirse de forma apreciable disminuyendo la temperatura y
as el trmino DM.

Con fases estacionarias lquidas, el grosor de la capa

de lquido adsorbido ha de ser el menor posible

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 3- OPTIMIZACION DE LA EFICIENCIA DE LA
COLUMNA

Una separacin cromatogrfica se optimiza variando las

condiciones experimentales hasta que los componentes de una
mezcla se separan totalmente en el menor tiempo posible.

Los experimentos de optimizacin tienen por objeto:

- Reducir el ensanchamiento de banda

- Modificar las velocidades relativas de migracin de los componentes

Quimica Analitica III. 24

 3-1. Resolucin de la columna

La resolucin (RS ) constituye una medida cuantitativa de

la capacidad de la columna para separar dos analitos.

RS = Z / (WA/2 + WB/2) =

2 Z / WA + WB =

2 [ (tR)B (tR)A] / WA + WB

Quimica Analitica III. 25

Separaciones correspondientes a tres resoluciones distintas
Quimica Analitica III. 26
3-2. Optimizacin de la eficiencia de la columna

Una forma obvia de mejorar la resolucin es aumentar el

N, disminuir la AEPT (H) o manipular el kB

Quimica Analitica III. 27

 Por lo general la forma ms fcil de mejorar la resolucin es
optimizando el k.

-Con fases mviles gaseosas k puede mejorarse a menudo

aumentando la temperatura (programa de temperatura)

-Con fases mviles lquidas, k puede mejorarse cambiando por

ejemplo la composicin de la f. mvil. (elucin con gradiente)

Quimica Analitica III. 28

3-3. El problema general de la elucin

Quimica Analitica III. 29