e Fisiologa y B

n ad io

log
Sociedad Per ua

CANALES

a M
olecular
INICOS
-De Potasio ( K+)
-De sodio ( Na*)
-De calcio (Ca++)
-Cationes
Prof: P. nez H. inespecficos
-De Cloro (cl-)
Lima 2013
 Membrana, Canales e Iones

BCP-F3.7
 Unifying Themes in Ion Channel Structure

Polytopic Membrane Proteins

Oligomeric Arrangement
With Intrinsic Symmetry

Pore Size Correlates with the

Number of Subunits

Voltage-Dependent Ligand-Gated Connexins

(Na+, K+, Ca++) (Ach, Gly, GABA, (Gap Junctions)
Glutamate Receptors 5-HT)
Mechanosensitive
 Voltage-Dependent Channels

I II III IV

Ca Channels
n=1
Na Channels

K Channels
n=4 Ca-activated K Channels
Cyclic Nuc. Channels

Inward Rectifiers
n=4
G-prot-activated Channels
Ligand-Gated Channels

Acetylcholine Receptor
GABA Receptor
n=5 Glycine Receptor
Serotonin Receptor

Glutamate Receptor
(AMPA)
(Kainate)
n= (4) (NMDA)
Other Channel Families

Chloride Channels

n=2 ClC-0 Cl Channel

Gap Junctions

n=6 Connexin

ABC Superfamily

n=? CFTR Cl Channe

NBD1 R NBD2

NBD1
Structure-Function Relations in a Voltage-Dependent Channel

Voltage Selectivity &

Sensing Permeation Slow
Inactivation

P loop

Gating

Fast
Selective Inactivation
Oligomerization
 +
Diversity in K channels
Structural C lass

6TM 4TM 6TM

Family

Voltage Gated KQT Eag Slo CNG

Ca
++ cNTP
++
Ca

KVLQT nKQT2
Subfamily

eag erg elk vCNG oCNG

Shaker Shab Shaw Shal Slo nSlo Kir1 Kir2 Kir3 Kir4 Kir5 nIRK
(Kv1) (Kv2) (Kv3) (Kv4)
 Tipos de canales

1. Pueden ser selectivos al tipo de in: canales de K+, Na+, de Ca2+, ...

2. Pueden ser activos o pasivos

3. Los activos difieren en el mecanismo de activacin:
Un canal se abre o cierra siguiendo alteraciones
DA-Cap1
de diverso tipo que sufre su microentorno.
 Canal pasivo

KSJ
 despolarizacin

Canal de
Na+
activado
por voltaje

repolarizacin

KJS-F9.9
Ionotropico vs metabotropico
 Canales activados
por
neurotransmisores

Activacin directa
Activacin indirecta

KSJ-F13.1
 Canal activado por acetilcolina (Ach)

KSJ-F11.13
Crystal Structure of the Streptomyces K+ Channel
Doyle et al. 1998

P-loop

TM1

TM2

KcsA is a homotetramer
Each subunit contains two TM segments
The selectivity filter is formed by an extended
structure positioned by a short tilted helix
Understanding Permeation and Selectivity

+ 1 +
W

_ _

K+ Ions are stabilized by backbone Carbonyls

It is the matching of dehydration energies what determines selectivity
High throughput is achieved by electrostatic repulsion between sites 1 and 2
Los canales inicos son protenas de membrana de permeabilidad
selectiva por ciertos iones, multimricas, con varios dominios
transmembranales, regulados por voltaje, AMPc, neurotransmisores,
ligandos, etc. representa un tipo de transporte pasivo de membrana
 Los canales inicos realiza transporte pasivo, de acuerdo a la gradiente de
concentracin sin consumo de energa,
Pequeos poros altamente selectivos, permite el movimiento de agua e
iones.
La velocidad de transporte es de 10 millones de iones por seg.
Las funciones de los canales :
--transporte de agua e iones.
--regulacin de potencial a travs de la membrana.
--transduccin
Participa : en todas las clulas como la frecuencia cardiaca, contraccin
muscular, secrecin de hormonas, visin, olfacin, etc.
Son protenas integrales de membrana de 2 -24 dominios.
Producto de muchos genes, los catinicos pertenece a la familia de S5/S6,
canales de seis dominios transmembranales con compuerta de voltaje
como el Na+. Ca++, K+.
Hay canales con compuerta por ligandos intracelulares (GMPc de la
retina.).
Los canales de Na+,K+ potencial de accin
Los canales de Ca++secrecin, sealizacin, contraccin muscular y
expresin gentica.
Mecanismo de compuerta: presenta dos estados: cerrado<< abierto.
Algunos canales tienen tres estados: cerrado<< abierto y un estado de
inactividad.
CANALES DE SODIO

Los canales de Na+ regulados por voltaje son protenas de

sealizacin crticas responsable de la fase de ascenso inicial del
potencial de accin (PA) de tejidos excitables msculos y nervios.
Determinan la conduccin de la excitacin.
Son objeto de frmacos como litio, antiarrtmicos tipo 1.
Los defectos genticos por aumento o perdida. (Brugada)
Estos canales fueron los primeros que se clonaron.(patch-clamp)
Es el canal ms reciente en la naturaleza ( se estima 5 mil millones
de aos ).
Se encuentra en todos los tejidos excitables. Ms concentrados en
los axones y msculos. El miocardio expresa 100,000 canales Na+
20,000canales de tipo L de Ca++ y menos canales de K+.
Los canales de sodio esta formado por cuatro subunidades .
La subunidad es una glucoprotena de 2.000 aminocidos.
Cada subunidad (I-IV) unidos por enlaces citoplasmticos.
80s - 90s La estructura de los canales se infiri por su secuencia

Modelo de canal de Na+

4 subunidades

6 segmentos transmembrana

CANALES: Activables por ligando (ej. Rec. de Acetil Colina)

Activables por voltaje (ej., canales de Na, K, etc)
1990s estructura cristalina
del AChR (N. Unwin)
Modelo 3D de un canal de K
basado en coordenadas de
cristalografa

(McKinnon, 1998)
Canales de Sodio
Cada subunidad tiene seis segmentos transmembrana (S1 a S6) que
se pliegan y dejan un poro central y hay semejanza con los canales
de calcio. Adems cuenta el segmento S4 tachonado por con una
hilera de residuos bsicos que esta en el interior del campo de la
membrana y se mueve hacia fuera en respuesta a la
despolarizacin para iniciar una serie de redistribuciones
conformacionales que culmina con la apertura del canal.
La permeacin es la capacidad del poro, lo cual es papel del bucle S5-
S6. (Bucle P), que da la selectividad y especificidad para el Na+.
y la asimetra es fundamental para la permeacin.
Hodgkin y Huxley planet que los canales de Na+ pasan por varios
estados conformacionales en el proceso de apertura (activacin) y
cierre (inactivacin) que se deberan a la compuerta externa m la
activacin y la compuerta b interna a la inactivacin teniendo una
dependencia del voltaje intrnseca y funcionan de manera
independiente
Los cuatro segmentos S4 cargados positivamente actan como
aparato detector de voltaje y constituye el poro regulador.
Canal de sodio (continuacin)

La contribucin de cada segmento S4 es asimtrica y hay cooperatividad.

Los poros pueden estar en: abiertos, cerrados inactivos.
Algunos bloqueantes de los canales de Na+,como la lidocana pueden
entrar en el canal desde el medio intracelular solo cuando el poro interno
esta abierto
La activacin esta asociada al dominio IV S4, Parece que la compuerta
esta en la cara interna de la va de permeacin. Es posible qu los
movimientos de S4 distorsionan los conectores S4-S5 lo que
posteriormente produce la apertura cierre del poro citoplasmtico que
forma los segmentos S6 que acta como compuerta fsica de activacin.
Es probable que el conector III-IV acte como tapa en bisagra que se
acopla a un receptor formado por los bucles citoplasmticos S4-S5 de los
dominios III-IV as como el residuo del extremo citoplasmtico del dominio
IV S6. La regulacin de la expresin del canal es a demanda.
Subunidades auxiliares (), son moduladores de la funcin del canal de
Na+ neuronal y muscular. A la fecha se ha descrito tres subunidades (1,
2 y 3 )asociadas a las subunidades del canal de Na+
Canales de Potasio
Es el canal ms antiguo de la biologa ( 15 millones de aos).
La principal fuente de corriente repolarizante se origina por el
movimiento de salida de los iones potasio (K+), a travs de los
canales de K+ (anque tamben lo hacen las corrientes
hiperpolarizantes de los intercambiadores Na+/Ca++ y la
Na/KATPasa)
Los canales de K+ se dividen en tres categoras principales:
a. modulados por voltaje: Kv (Ito, Ikur/IK lento, IKr , Iks ).
b. rectificadores de entrada (IK1, IKACh, IKATP )
c. corrientes de potasio de fondo ( TASK-1, TWIK-1/2).
. Los regulados por voltaje esta formado por cuatro subunidades y
subunidades accesorias en coordinacin con el citoesqueleto y
complejos de sealizacin. Esta va usa los antiarritmicos clase III
formado por 4 segmentos transmembranales y dos P loops canales
de reposo rectificadores de K+,siempre abierta y ayuda a
establecer el potencial de membrana.
K+ channel
Muestra un canal de potasio,
Operation of the ACh Receptor Channel
Conformational changes in the
TM segments of the AChR

A concerted localized disturbance thereby takes place, which

initiates small rotations of the subunits along the shaft to the
membrane. The rotations disrupt the gate by destabilizing the
ring mode of association of a-helices around the pore
 Only 2 of the identical subunits are
shown
From cytosolic side, the pore opens up into a vestibule; the vestibule
facilitates transport by allowing the K ions to remain hydrated even
though they are in the middle of the membrane
Canales de potasio

Los canales de K+ modulados por voltaje (KV), es tetramrico de

Cada contiene 6 dominios transmembranales de S1 a S6 cuyo
terminal amino y carboxi esta al lado interno de la membrana.
Los segmentos S1 y S4 detectores de voltaje.
Los segmentos S5 y S6 son crticos para formar el canal.
Normalmente durante el transcurso del PA los canales de KV
cerrados se activan abren en respuesta a la despolarizacin.
La reentrada en el estado de cerrado precisa la repolarizacin de la
membrana.
La activacin del canal KV es el acoplamiento temporal de un sensor
de voltaje con la apertura de la compuerta de activacin.
El sensor esta asociado al cuarto dominio S4 que contiene un
residuo de arginina lisina con carga positiva.
Los canales de K+ catalizan el transporte selectivo de K+.
El poro es impermeable a otros iones.
CANALES DE POTASIO

La longitud del poro es de 45A, dimetro de 10A lleno de agua.

Se describe tres formas de inactivacin:
Tipo N: El principio de bola y cadena que bloquea el poro.
Tipo C: Cambios conformacionales de la boca externa del poro.
Tipo U: Esta muestra una dependencia del voltaje en forma de U.
Subunidades formadoras del poro:
Canales de Calcio
El Ca++ es elemento esencial para el acoplamiento excitacin-
contraccin como para excitacin- secrecin
Se reconoce cinco tipos de los canales de Ca++.(L y T en el
corazn, R, N y P/Q en las neuronas.
Los cales tipo L es de elevada conduccin, sensible a 1,4
dihidropiridinas (DHP), que se activan a PA ms positivo
Canal Tipo T es menos conductancia, de apertura transitoria y
activacin a potenciales mas bajos que los canales tipo L.
El canal de Ca++ esta formado de cinco subunidades proteicas (1,
2, , , y ) donde cada uno tiene cuatro dominios homlogos (I-IV)
y cada uno esta formado de seis segmentos transmembranales (S1-
S6), donde el segmento S4 es el sensor de voltaje y el bucle del
poro est entre S5-S6
El poro es de 6 A de dimetro donde la corriente de Ca++ (Ica) hace
del poro selectivo y dure 2 a 7 ms.
El Ica inico sirve como un segundo mensajero controlando
procesos rpidos como la contraccin muscular
S5/S6 : forma el loops
S4 forma el sensor de voltaje: La carga positiva se debe a los AA lysina y
arginina, esta parte del canal es alterado al voltaje negativo
-potencial de reposo, el voltaje negativo dentro del sensor de la membrana
-potencial de accin, la carga se revierte y el sensor se mueve afuera

Especfico de msculo esqueltico (Cav 1.1)
Media la entrada de Ca2+ inducida por la
despolarizacin de la membrana
Sensor de voltaje en el acoplamiento E-C
-Estructura: 5 subunidades (1, 2,,, )
Canal Ca2+ de tipo L
Parlisis peridica [K+]
Despolarizacin del SL
Aumento de conductancia para el Na+
No se evita por tetradotoxna
Mutaciones en el canal, pero no se conoce
el mecanismo
ICa
El Ca++ e el mayor mensajero intracelular que puede producir:
a.- mediante receptor acolado a la protena G
b.- mecanismos de actividad enzimtica (receptor de tirosinkinasa
receptor ser/tre kinasa)
 4. The Protein Encoded by the Cystic Fibrosis Gene:
Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR)

A Cl- channel
2 sets of 6 transmembrane domains
2 ATP-binding cassettes (thus ABC transport protein)

Cl-
out

in

N
ATP ATP

R-domain
C
unique among channels
and ABC transporters
Until 2002, we had only guesses about the atomic-scale structures
of ABC transport proteins

Big Alberts 11-16

Garland Publishing