Cromatografa por

Intercambio Inico

INTEGRANTES:
RAMOS BENITO, VANESSA
MONTALVO RAMIREZ ,YUDITH
La cromatografa de intercambio inico
La cromatografa de
intercambio inico o
cromatografa inica (IC)
es una cromatografia de
liquidos en la que como
fase estacionaria se
emplea una resina de
intercambio inico, de
elevada masa molecular y
esencialmente insoluble.
Principio de la Cromatografa Inica
Los procesos de intercambio inico se basan en
los equilibrios de intercambio inico entre los iones de una
disolucin y los iones del mismo signo que se encuentran en
la superficie de la resina.
Las resinas de intercambio catinico presentan grupos de
cido sulfnico (cido fuerte) o grupos de cido carboxlico
(cido dbil):

Las resinas de intercambio aninico contienen grupos

amino terciarios (muy bsicos) o grupos amino primarios
(bases dbiles):
Como un ejemplo de la aplicacin de la ley de accin de masas al equilibrio de
intercambio inico , se considera la reaccin entre los iones de una sola carga M con
una resina de acido sulfonico::

La constante representa la afinidad de la resina por los iones:

SELECCIN DE LA RESINA EN LA CROMATOGRAFA DE
INTERCAMBIO INICO
Las resinas de intercambio inico tienen positivo o negativo -
los grupos funcionales cargados covalente conectados a una
matriz slida.
Las Matrices se hacen generalmente de la celulosa, del
poliestireno, de la agarosa, y de la poliacrilamida.
Algunos de los factores que afectan a la opcin de la resina
son cambiador del anin o de catin, flujo, intercambiador de
iones dbil o fuerte, talla de partcula de la resina, y capacidad
de enlace.
La estabilidad de la protena del inters dicta la seleccin de
un anin o de un cambiador de catin - cualquier cambiador
puede ser utilizado si la estabilidad es de ningn inters.
 ELECCIN ENTRE INTERCAMBIADORES
La eleccin entre intercambiadores fuertes o dbiles est
basada en el efecto del pH sobre la carga y la estabilidad.
Por ejemplo, si se va a cromatografa una sustancia
dbilmente cida que necesita pH muy altos o muy bajos
para su ionizacin, se requiere un intercambiador fuerte
debido que este funciona a pH extremos. No obstante, si
la sustancia es lbil, es preferible la utilizacin de
intercambiadores dbiles. Los intercambiadores dbiles
son tambin excelentes para la separacin de molculas
con una carga elevada de aquellas con poca carga, debido
a que los iones dbilmente cargados no se unen, por lo
general, al intercambiador.
 PROPIEDADES DE LOS INTERCAMBIADORES INICOS

INTERCAMBIADOR INICO:
Polmero que tiene grupos cargados unidos.
INTERCAMBIADOR CATINICO:
Si un grupo est cargado negativamente, podr
intercambiar iones positivos. Un grupo tpico
que se utiliza en los intercambiadores de
cationes es el grupo sulfnico, SO3-.
El grupo cido sulfnico es un intercambiador
de cationes fuertemente acido. Otros grupos
de utilizacin corriente son el carbonilo e
hidroxilo fenlico, dos intercambiadores
catinicos dbilmente cidos.
INTERCAMBIADOR ANINICO:
Si el grupo cargado es positivo,
es un intercambiador de
aniones. Los intercambiadores
aninicos dbilmente bsicos
ms corrientes
Son grupos aminos alifticos o
aromticos.
 Los polianiones y policationes se unen a los
intercambiadores de aniones y de cationes. Sin embargo,
las protenas y los polielectrolitos (polmeros poliionicos)
que son portadores de cargas positivas y negativas
pueden unirse tanto a los cambiadores de cationes como
a los de aniones, dependiendo de su carga neta.
POLIELECTROLITOS:
Los polielectrolitos son polmeros cuyas unidades de
repeticin soportan un grupo electrolito.
Policationes y polianiones son polielectrolitos. Estos
grupos se disocian en disoluciones acuosas (agua), por lo
que quedan como polmeros cargados.
FASES MVILES EN CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO
INICO

Deben poder disolver la muestra y tener una fuerza

disolvente que proporcione tiempos de retencin
razonables (valores de k adecuados).
Deben interactuar con los solutos de tal forma
que favorezcan la selectividad(valores de adecuados).

Las fases mviles empleadas suelen ser soluciones acuosas

con cierta cantidad de algn disolvente orgnico
miscible (como el metanol). En general, los iones de la fase
mvil compiten con los del analito por los puntos activos del
relleno del intercambiador inico. El tipo y proporcin de los
disolventes en la fase mvil determinarn su fuerza y su
selectividad.
CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO
 PROCEDIMIENTO
EQUILIBRIO:
Toda la fase estacionaria se encuentra asociada a iones
complementarios (que pueden ser cloro o sodio
APLICACIN Y LAVADO:
Aplicar la muestra la cual queremos filtrar a travs de la columna
mediante un lavado especfico. Se aplica un buffer con el mismo pH y
fuerza inica que el buffer inicial para que todas las protenas cargadas
se unan al intercambiador.
ELUSIN:
Las molculas captadas por el intercambiador son eludas debido a
cambios en la composicin del buffer.
REGENERACIN:
Remover las partculas que an estn asociadas al intercambiador. Se
debe generar un cambio ms drstico en el pH y la concentracin
salina. La fase estacionaria puede volver a ser utilizada.
 TIPOS DE REGENERANTES
El cloruro de sodio (NaCl) se emplea normalmente para regenerar las resinas fuertemente cidas usadas en ablandamiento, y las resinas
fuertemente bsicas en la eliminacin de nitratos.
En ablandamiento, el cloruro de potasio (KCl) puede tambin emplearse cuando la presencia de sodio en la solucin tratada es
indeseable.
En ciertos procesos de tratamiento de condensados muy calientes, el cloruro de amonio (NH4Cl) se puede utilizar tambin.
En la eliminacin de nitratos, la resina fuertemente bsica se puede regenerar con otros compuestos que producen iones de cloruro,
tales como el cido clorhdrico (HCl).
En el proceso de descationizacin la primera etapa de una desmineralizacin la resina fuertemente cida (SAC) se debe regenerar
con un cido fuerte. Los regenerantes ms comunes son el cido clorhdrico y el cido sulfrico. O
El cido clorhdrico (HCl) es muy eficaz y no produce precipitados en el lecho de resina.
El cido sulfrico (H2SO4) es ms fcil de transportar y almacenar y a veces ms barato, pero es menos eficaz que el clorhdrico: la
capacidad til de la resina SAC es menor. Adems, su concentracin se debe ajustar precisamente para impedir la precipitacin de
sulfato de calcio en la resina (detalles abajo). Una vez precipitado en la columna, CaSO4 es muy difcil disolver de nuevo.
El cido ntrico (HNO3) se puede tambin emplear, por lo menos en principio, pero no es recomendado, porque puede producir
reacciones muy exotrmicas, hasta explosiones. Por lo tanto, hay que considerar el cido ntrico como peligroso.
En descarbonatacin, lo mejor es regenerar la resina dbilmente cida (WAC) con cido clorhdrico (HCl). El sulfrico se debe aplicar a
concentraciones muy bajas (< 0,8%) para que no precipite sulfato de calcio. La cantidad de agua de dilucin es por lo tanto muy grande.
Otros cidos ms dbiles pueden tambin regenerar resinas WAC, por ejemplo el cido actico (CH3COOH) o el cido ctrico, una
molcula con tres grupos COOH: (CH2COOHC(OH)COOH-CH2COOH = C6H8O7).
En desmineralizacin las resinas fuertemente bsicas se regeneran siempre con sosa custica (NaOH) aunque la potasa custica
(hidrxido de potasio KOH) es otra opcin, pero en general ms cara.
Las resinas dbilmente bsicas (WBA) se regeneran en general tambin con sosa custica, pero otras bases ms dbiles se pueden
emplear: o Amonaco (NH4OH)
Carbonato de sodio (Na2CO3)
PROCEDIMIENTO
ADSORCIN Y DESORCIN
ADSORCIN
La fuerza de adsorcin aumenta con el aumento de carga neta
DESORCIN
Reducir la carga neta cambiando el pH .Agregar un in que compita
por las cargas del intercambiador
 VENTAJAS Y DESVENTAJAS
VENTAJAS:
Alta capacidad
Alta resolucin
Paso concentrador:
Se puede sembrar un gran volumen para luego eluirlo
en un menor volumen
Con una misma columna se puede utilizar a diferentes
pH y obtener diversos perfiles de elucin
DESVENTAJAS:
Las muestras deben estar desalinizadas antes de ser
aplicadas a este tipo de cromatografa
FACTORES QUE AFECTAN LA RETENCIN
1. Tiempo de retencin (Tr):
En la cromatografa de intercambio inico la retencin est
basada en la atraccin entre iones del soluto y la carga
complementaria de la fase estacionaria. Los
intercambiadores inicos favorecen la unin de iones de
mayor carga y radio inferior. Cuando la retencin de los
compuestos se ve afectada, se favorece la elusin de ellos
para ser recolectados en una serie de fracciones.
2. pH:
Las resinas cidas fuertes siguen ionizadas incluso en
disoluciones muy cidas, en cambio las resinas cidas
dbiles se protonan a un pH prximo a 4 y pierden su
capacidad de intercambio catinico, reducindose as, el
tiempo de retencin. Los grupos muy bsicos de amonio
cuaternario siguen siendo catinicos a cualquier valor de
pH. Los bsicos dbiles de amonio terciario se
desprotonan en disoluciones moderadamente bsicas y
pierden entonces su capacidad, reducindose tambin el
tiempo de retencin
3. Cargas:
La fuerza de enlace de la muestra depende de la
magnitud de la carga. La fuerza de retencin es
mayor y, por consiguiente la de elusin es menor,
mientras ms cargado se encuentre el compuesto,
ya sea negativa (aniones) o positivamente
(cationes).
4. Gradiente:
Aumentando la concentracin de la fase mvil,
los iones compiten cada vez ms favorablemente
con la muestra por los sitios activos cargados de
la fase estacionaria.
5. POROSIDAD
El tamao del poro de la resina al que se une el compuesto mvil por
intercambio inico influye directamente en la capacidad de unin. En
membranas cuyo tamao de poro es pequeo (menor de 600) no hay
espacio suficiente para unir el in dentro de dichos poros por lo que la
cantidad de intercambiador por unidad de superficie es menor. Sin
embargo, en membranas con tamao de poro mayor (mayor de 600)
se puede unir el compuesto mvil dentro de dichos poros, con lo que se
incrementa la cantidad de intercambiador por unidad de superficie. La
porosidad busca una mayor superficie de intercambio.
LAS APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

El Intercambio de iones es el mtodo cromatogrfico ms ampliamente

utilizado para la separacin y la purificacin de biomolculas cargadas tales
como polipptidos, protenas, polinucletidos, y cidos nuclicos. Su
aplicabilidad dispersa, alta capacidad y simplicidad, y su alta resolucin son
las razones dominantes de su xito como mtodo de separacin. La
cromatografa De intercambio inico es ampliamente utilizada en varias
aplicaciones industriales que son algunos de los cuales como sigue:
Separacin y Purificacin de los componentes de la sangre tales como
albmina, factores de incremento recombinantes y enzimas.
Biotecnologa - aplicaciones Analticas tales como control de calidad y
control de procesos operativos
Comida e investigacin clnica - estudiar variedades del trigo y la correlacin
del proteinuria con diversas enfermedades renales.
Fermentacin - las resinas del intercambio catinico Se utilizan para vigilar
el proceso de fermentacin durante la produccin de la -galactosidasa.
CROMATOGRAMA

El cromatograma es el resultado grfico de la cromatografa. En el

caso de separacin ptima, los diferentes picos o manchas del
cromatograma se corresponden a los componentes de la mezcla
separada.
La posicin de los mximos nos indica el in presente (carcter
Cualitativo) y su rea nos indica la cantidad existente de dicho in
(carcter Cuantitativo).
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA INICA
La cromatografa de intercambio inico se emplea tanto en la separacin de especies inorgnicas como
en la separacin de compuestos orgnicos.
La aplicacin de la cromatografa inica al anlisis de especies inorgnicas tuvo problemas en sus inicios
debido a la falta de un buen sistema de deteccin de carcter universal. Obviamente, el detector ms
adecuado para la determinacin de especies inicas es el detector de conductividad, ya que son
sencillos, econmicos, fciles de manejar y responden de manera predecible a todas las especies con
carga. Sin embargo, la fase mvil presenta una elevada conductividad y tiende a enmascarar al analito,
reduciendo la sensibilidad del detector.
Para solucionar este problema se ide la cromatografa inica con inhibidores(o supresores) que aade
una columna inhibidora del eluyente a continuacin de la columna analtica. La columna inhibidora (o
supresora) se rellena con una segunda resina de intercambio inico que convierte los iones del
disolvente en especies moleculares poco ionizadas, sin alterar los iones del analito.
APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFA INICA
Por ejemplo, en la separacin de cationes con frecuencia se
emplea cido clorhdrico como eluyente, de modo que la
columna inhibidora es una resina de intercambio aninico en la
forma de hidrxido que lo neutraliza formando agua. Cuando
se efecta una separacin de aniones, el relleno inhibidor es la
forma cida de una resina de intercambio catinico y
bicarbonato de sodio o carbonato como agente eluyente. Las
columnas inhibidoras deben regenerarse para no perder su
efectividad.
La cromatografa inica se ha aplicado a una gran variedad de
sistemas orgnicos y bioqumicos, incluyendo frmacos,
conservantes alimentarios, azcares y vitaminas, entre otros.
SEPARACIN DE AMINOCIDOS MEDIANTE UNA
COLUMNA DE INTERCAMBIO INICO.
 OTRAS APLICACIONES
Extraccin y purificacin de cidos nucleicos
Purificacin de agua
Purificacin del fibringeno de la leche
37. Determinacin de anticonvulsantes en el suero despus
de la extraccin de la fase slida.
Anlisis de antibiticos de politer
Determinacin de pesticidas.
Identificacin de cidos orgnicos en la fruta y en el jugo.
Deteccin de derivacin-fluorescencia post-columna para
anlisis para varios tipos de pesticidas agrcolas .
Determinacin de metabolitos de Triptofan en el suero
umbilical.