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Universidad Autnoma de Sinaloa

Facultad de Biologa
Lic. Biomedicina

MC. Elisa Anali Camacho Ureta


Materia: Citogentica

Microscopia Fluorescente
Alumna: Valeria Len Medina y
Rochn Martnez Mara del Carmen
Grupo: 3-3
Fecha: 27/Oct/17
Microscopia Fluorescente

Qu es fluorescencia?
Es la propiedad que tienen ciertos elementos qumicos denominados
fluorforos o fluorocromos de emitir luz visible cuando sobre ellos incide una
radiacin intensa; en otras palabras, absorben una luz de una longitud de
onda determinada y luego emiten otra luz de una mayor longitud de onda.
Microscopia Fluorescente
Los colorantes fluorescentes son detectados con el microscopio de
fluorescencia.
Flurocromos:
Marcador colorante fluorescente empleado en investigacin para crear contraste
en zonas determinadas de los especmenes.
Microscopia Fluorescente
Caractersticas:
Es similar a uno convencional salvo en que la luz incidente, procedente de una potente
fuente atraviesa dos series de filtros.
Uno para interceptar la luz antes de que llegue a la muestra y otro para filtrar la luz
obtenida a partir de la muestra.

La luz blanca emitida por la fuente de


luz es filtrada dejando pasar por
ejemplo, solo la luz azul. El espejo
dicroico refleja la luz de cierta
longitud de onda (en este caso azul)
pero deja pasar otras. Filtra la luz azul
que excita al fluorocromo
(fluorescena) pero por el contrario,
deja pasar la luz verde emitida.
Microscopia Fluorescente

Micrografas de clulas en divisin, tomadas con un microscopio de fluorescencia. Se


emplearon tres fluorocromos: DAPI (emite luz azul) para marcar cromosomas, GFP
(protena verde fluorescente intracelular que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para
marcar microtbulos. Cada fluorocromo amerita el uso de filtros especficos,
dependiendo de la longitud de onda necesaria para su excitacin.
Microscopia Fluorescente
Tcnicas de tincin fluorescente:
DAPI
Es un marcador fluorescente que se une
fuertemente a regiones enriquecidas en adenina
y timina en secuencias de ADN.

Autoflorescencia
Absorbe luz verde y emite luz roja, por
ejemplo vitamina A, Clorofila de
cianobacterias.
Microscopia Fluorescente
Tincin de viabilidad
Permite diferenciar entr clulas vivas y
clulas muertas.

Protena verde fluorescente


Es una protena producida por la medusa
Aequorea victoria, que emite fluorescencia
en la zona verde del espectro visible. El gen
que codifica esta protena esta aislado y se
utiliza habitualmente en biologa molecular
como marcador.
Microscopia Fluorescente
Fluorescencia Mltiple
Es posible combinar sobre una sola muestra, dos o mas colorantes
siempre que emitan en diferente longitud de onda y nuestro sistema sea
capaz de excitar a todos a la vez y discriminar los fotones emitidos por
ellos.
Microscopia Fluorescente
Microscopia Fluorescente

Aplicaciones
Son numerosas las aplicaciones de la microscopa de fluorescencia,
notablemente en biologa y medicina:
Marcaje de molculas en clulas y tejidos para su caracterizacin e
identificacin.
Estudio de clulas normales y patolgicas.
Estudios inmunolgicos.
Mineraloga.

Fluorescencia Rodamina
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