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TRANSAMINACION

BIOQUIMICA LABORATORIO

SEMANA 13
REACCIONES DE TRANSAMINACION

La reaccin de transaminacin es probablemente una de las ms


difundidas en el metabolismo de los aminocidos, su descubrimiento
se debe a los cientficos Braunstein y Kritzmann en el ao 1938.

En esta reaccin el grupo alfa-amino de un aminocido es transferido


al atomo de carbono alfa de un alfa cetocido, dando lugar al
correspondiente alfa cetocido anlogo al aminocido y el aminocido
anlogo al cetocido correspondiente.

En las clulas existen muchos tipos de transaminasas que utilizan el


-cetoglutarato como aceptor del grupo amino, pero se diferencian
entre ellas por la especificidad respecto al aminocido utilizado. Las
reacciones catalizadas por tales enzimas son fcilmente reversibles
Todas las transaminasas utilizan el mismo
grupo prosttico, el piridoxal fosfato (una forma
coenzimtica de la vitamina B6), que es
transportador temporal del grupo amino
Valor diagnstico y pronstico:
Aspartato aminotransferasa
(GOT glutmico oxalactico transaminasa) y
Glutamato aminotransferasa
(GPT glutmico pirvico transaminasa)

Son abundantes en hgado y corazn. En


insuficiencia heptica o cardaca: aumento
concentracin sangunea.
Son solubles (citoplasma) aunque pueden
encontarse particuladas (mitocondrias)
El cociente AST/ALT nos podr orientar sobre
una patologa determinada segn el siguiente
esquema:
- AST/ALT 1: Hepatitis vrica.
- AST/ALT > 2: Cirrosis (de cualquier etiologa).
- AST/ALT > 4: Sugiere fallo heptico agudo.

Ante un aumento de transaminasas sricas es


preciso una escalonada peticin de pruebas
complementarias para lograr el adecuado
enfoque diagnstico teraputico de la entidad
responsable.
La cromatografa en papel

es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar analisis


cualitativos ya que pese a no ser una tcnica muy potente no requiere de
ningn tipo de equipamiento.
La fase estacionaria esta constituida simplemente por una tira de papel de
filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas
de la solucin y evaporando el solvente. Luego el disolvente empleado
como fase mvil se hace ascender por capilaridad. Esto es, se coloca la
tira de papel verticalmente y con la muestra del lado de abajo dentro de
un recipiente que contiene fase mvil en el fondo.
Despus de unos minutos cuando el solvente deja de ascender o ha
llegado al extremo se retira el papel y seca. Si el solvente elegido fue
adecuado y las sustancias tienen color propio se vern las manchas de
distinto color separadas. Cuando los componentes no tienen color propio
el papel se somete a procesos de revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromatografa eficaz: la
eleccin del solvente y la del papel de filtro.
http://youtu.be/J8r8hN05xXk

http://youtu.be/w6XUf7RHJKM
https://www.youtube.com/watch?v=g71IWP2O5pg

https://www.dnalc.org/resources/animation
s/gelelectrophoresis.html
Papel Recorrido del
solvente

Muestra
solvente
PROCEDIMIENTO:
OBTENCIN DE LOS EXTRACTOS DE ENZIMAS:
1- Prepare un extracto de hgado en la proporcin 1:5 en
masa volumen con buffer fosfato pH 7,4. Utilice bao de
hielo para realizar la operacin.

2- Centrifugue a 2500 rpm durante tres minutos o filtre a


travs de una gasa doble o algodn.

3- Guarde el sobrenadante en un tubo sumergido en bao de


hielo y rotrelo como extracto de hgado (E.H-1).

4- Tome la mitad del extracto y pselo a un tubo y colquelo


en un bao de agua hirviendo durante 5 minutos. Rotrelo
como extracto de hgado calentado (E.H.C-2).
EXPERIMENTO: Demostracin de transaminacin por cromatografa
Preparar 4 tubos de acuerdo la esquema:
TUBO N 1 2 3 4
ml cetoglutarato 0,2 M 0,3 0,3 0 0
ml alanina 0,2M 0,3 0,3 0 0
ml piruvato 0,2M 0 0 0,3 0,3
ml glutamato 0,2M 0 0 0.,3 0,3
ml arsenito 0,1M 0,4 0,4 0,4 0,4
ml Enzima activa 0 1 0 1
ml Enzima inactiva 1 0 1 0

Incubar todos los tubos por 45 minutos a 37C. Retirar los tubos del bao de
Mara y agregar 6ml de alcohol etlico a cada tubo. Agitar y esperar por dos
minutos. Centrifugar a 2500 rpm por 3 minutos y usar los sobrenadantes
para la cromatografa.
Cromatografa
Marcar a 2 cm del borde del papel una lnea suave con un
lpiz. Marcar en esa lnea seis puntos separados por 2 cm
cada uno. Colocar en cada punto cinco gotas del respectivo
sobrenadante y en las dos ltimas 5 gotas de alanina y
cinco de glutamato respectivamente. Dejar secar Colocar el
papel en una cmara de cromatografa con una mezcla de
propanol: agua en la proporcin de 8: Dejar correr hasta que
el nivel lquido le falte 1 cm para llegar al extremo de la
placa. Marcar el nivel al que alcanz el lquido con un lpiz y
dejar secar.
Aplicar con un spray una solucin de ninhidrina al 0,1% e
butanol. Colocar a la estufa por 10 minutos. Marcar las
manchas obtenidas.
RESULTADOS
CUESTIONARIO

1.- Describir la importancia clnica de las transaminasas


2.- Que es el coeficiente de Ritis y cual es su utilidad? .