Terapia gnica para

enfermedades hereditarias
oftalmolgicas: avances y
perspectivas
Integrantes:
- Cruz Qori
- Dvila Paula
- Germana Nicole
- Guisse Megan
Profesora:
- Hemeryth Martin
- Joyce Del Pino
- Villanueva Yaritza
 Introduccin:
Terapia gnica: liberacin de secuencias exgenas de DNA que
se introducen en clulas husped para produccin de protenas,
aprovechar estructuras transcripcionales y traduccionales
Mtodos: reemplazar el gen mutado con una copia sana,
silenciar un gen con funcin anormal para evitar su expresin,
entre otros.
El ojo como rgano nico y fundamental debido a:
Vas de liberacin intraocular
El tamao reducido y estructura aislada
Uso de diferentes vectores
Identificacin de genes causantes de enfermedades oculares
Vas de introduccin de
material gentico dentro del
ojo
La liberacin de genes se lleva a cabo por:
La inyeccin del vector en el espacio subretiniano: Permite
transducir la capa celular externa de la retina, EPR, y los conos.
Esto es til para tratar enfermedades degenerativas de la retina
(LCA, STGD) causadas por mutaciones en genes.
La introduccin del vector en el espacio vtreo: Permite la
transduccin de las capas mas internas. Esta ruta es til para el
tratamiento de la neo vascularizacin retiniana (DMRE), para
evitar la muerte de las clulas ganglionares retinianas, brindando
neuroproteccion.
 La inyeccin directa en la cmara: Permite la
transduccin de tejidos del segmento anterior (Cornea, iris,
cuerpo ciliar, canal de Schlemm). Por ejemplo LV utilizado
para liberar COX-2 en venas y aumentar el flujo
uveoescleral y disminuir la inflamacin a un trasplant
corneal.
La transduccin de estructuras es til para la liberacin de
protenas antiagiogenicas para enfermedades
neovasculares de la coroides.
 ESTRATEGIAS DE TERAPIA
GNICA
Basadas en la introduccin del material
gentico en clulas blanco del cuerpo*
Utilizada para reemplazar, aadir, eliminar ,
silenciar o corregir genes relacionados con
la fisiopatologa de enfermedades hereditarias
 REEMPLAZO GENTICO
Liberacin de gen cuya funcin es ausente en
consecuencia de mutaciones por prdida de funcin en
el gen activado
Realizados en enfermedades autosmicas recesivas
y dominantes con mutaciones
Haploinsuficiencia y dominancia negativa producida
Supresin del gen mutado -> Permite la correccin al
ser reemplazado
SILENCIAMIENTO GNICO
Liberacin de gen o cido ncleo para la inhibicin
de la expresin de un gen con funcin anormal
til en enfermedades autosmicas dominantes
en consecuencia de mutaciones con ganancias de
funcin
Silenciamiento de oncogenes activados, eliminan
respuestas indeseables de enfermedades
autoinmunes
Inhiben la expresin de genes proangiognicos
 ADICIN GENTICA

Liberacin de gen cuyo producto provea

efectos benficos
Empleada para tratamientos de
enfermedades resultantes de un gen no
funcional como el de las autosmicas
recesivas
CORECCIN GNICA
Liberacin de cidos nucleicos para la reparacin de
un gen mutado en su locus
Restauracin de funciones
Correccin -> Liberacin de secuencia correcta de
gen para la induccin de recombinacin homloga
y sustitucin de secuencia
Posibilidad de tratamiento -> Splicing alterado,
produce salto de exn que contiene la mutacin
Aplicada en autosmicas dominantes o recesivas
 VECTORES VIRALES
La liberacin gnica puede realizarse mediante vectores virales y no virales.

Los vectores no virales comprenden liposomas, polmeros sintticos, inyeccin directa

de DNA, RNA de interferencia y electroporacin, entre otros. Todos ellos tienen la
desventaja de presentar una baja eficiencia y un efecto a corto plazo.

Por estas desventajas, los mtodos de eleccin son los vectores virales, pero estos
vectores fueron modificados para que no sean patognicos ni replicativos, pero
preservan sitios para que transporten productos transgnicos.

La funcin de estos virus es hacer la transduccin celular. Los vectores ms

comnmente que son utilizados son los virus asociados a los adenovirus (AAV), los AV
y los LV.
https://www.google.com.pe/search?
rlz=1C1NHXL_esCO712CO730&biw=1346
 VIRUS TIPO AAV
Los virus AAV son virus de cadena simple de DNA y los vectores ideales por su
habilidad y eficiencia para transducir varios tipos celulares durante largos periodos y
con baja inmunogenicidad.

Su empaquetamiento es de 4.7 Kb, pero se logr ampliar sus capacidad de

empaquetamiento a 8.4 Kb para tratar enfermedades de genes grandes como el SGTD.

Actualmente estos virus se usan para ensayos clnicos para tratar enfermedades como
la fibrosis qustica, enfermedad de batten, enfermedad de Parkinson, etc.

Estos tipos de virus son considerados los ideales para la liberacin gnica en la retina .
 VIRUS TIPO LV
Son virus con envoltura lipdica y doble cadena de RNA.

Resultan eficientes en la transduccin de clulas no divisorias y expresin

transgnica a largo plazo en el endotelio corneal, la red trabecular y los tejidos de
la retina.

Se ha observado una mayor eficiencia en la transduccin de FR con EIAV que con

los vectores de

HIV 1.

Estos vectores tienen la capacidad de empaquetar hasta 8 kb de genoma, el cual

es inmediatamente integrado a los cromosomas de la clula husped.
 VIRUS TIPO AV
Son virus con doble cadena de DNA utilizados para la liberacin gnica en tejidos
perioculares, estructuras anteriores del ojo y en la retina.

La gran ventaja de estos productos transgnicos de corta vida es que podran utilizarse para
destruir clulas malignas como en el caso del retinoblastoma, en el que los vectores de AV
expresan cinasa de timidina del herpes virus, la cual convierte la prodroga de ganciclovir en
una forma trifosfatada que inhibe la replicacin de DNA y elimina las clulas transducidas.

Sus desventajas incluyen una capacidad limitada de transporte y de transducir algunos tipos
de clulas de la retina y el vtreo, inicio lento de la expresin, adems de no ser tiles para
terapias que requieren transcripcin gnica a largo plazo debido a la respuesta inmunolgica
que desencadenan.
TERAPIA GNICA OCULAR EN HUMANOS
Degeneraciones retinianas hereditarias
Las distrofias retinianas hereditarias forman un numeroso grupo de
enfermedades genticas y fenotpicamente heterogneas que estn
caracterizadas por la prdida progresiva de los FR (conos y/o bastones) y
consecuentemente de la visin.

La mayora de estas enfermedades son causadas por mutaciones con prdida

de la funcin y siguen patrones hereditarios autosmicos recesivos, autosmicos
dominantes o ligados al cromosoma X.

Otra ventaja de la terapia retiniana es que la poblacin celular blanco es muy

estable y puede permitir la expresin transgnica sostenida.
 Primeros estudios de la terapia gnica para las
distrofias retinianas
Primer estudio
para defecto Ratones
de FR en el Mutaciones nulas
Rds en el gen Prph2
2001

CIAS
Inyeccion GR A
subretiniana RESTAURACIN
de AAV2 DEL
ELECTRORRETINO
RESULT GRAMA A 25% DE
EN LA EXPRESION provoc
DE LA PROTEINA LOS NIVELES DE

PERIFINA 2 EN EL LAS CLULAS
GEN MURINO SILVESTRES
SEGMENTO
DE Prph2 Y
EXTERNO DEL FR
UN
PROMOTOR
BOVINO DE
NO OBSTANTE,
RODOSPINA
LA DURACIN FUE LIMITADA.
 INTERVENCION
EFECTIVA CAUSADAS MODELO CLEBRE: PERRO
POR DEFECTOS DE BRIARD
RPE65

PORTA 4
INYECCIONES SUBRETINIANAS DE AAV2 EN PARES DE
ANIMALES POTENCIARON SU MEJORIA DE SUS ERG, BASE DEL GEN
VISIN. RPE65

https://www.google.com.pe/search?
q=TERAPIA+GENICAS+SITROFIAS
 Terapia gnica en humanos con LCA por
mutacin en RPE65
PERDIDA DE LA
VISION EN EDADES
DISTROFIA RETINIANA
LC CONGTA
TEMPRANAS

A 22 GENES RETINARIOS
ASOCIADOS OTROS SIGNOS COMO:
CATARATAS
CEGERA PRESENTADO UN
ESTRABISMO
NOCTURNA EN PATRN AUTOSMICO
ATROFIA MACULAR
PACIENTES CON RECESIVO.
PALIDEZ DEL NERVIO
LCA CON PTICO
MUTACIONES EN
RPE65

FASES INICIALES: FUNCIN RESIDUAL EN

LOS CONOS COORELACIONADO CON LA
PRESERVACIN DE LA ARQUITECTURA
RETINIANA Y DE LOS FR.
ESTUDIOS PACIENTES CON SOMETIDOS A
DESCRIBIERON LA LCA2 UNA CIRUJIA PARA
EFICACIA LA LIBERACION DE
DNA
RECOMBINANTE

HA DEMOSTRADO UNA MEJORIA

DE LA FUNCIN VISUAL Y
RETINIANA LOGRADA EN POCOS
MESES DESPUS DE
TRATAMIENTO

PUDIERON VER A POCA LUZ, SUPERAR

ALGUNOS OBSTCULOS, MEJORARON
SU AGUDEZA VISUAL,ETC
Terapia gnica para la stgd: stargen
Degeneracin
retiniana
juvenil
STGD
Frecuencia de
Se 1 en 10000
caracteriza individuos
Dao rpido
de la visin
central

Atrofia
bilateral del
EPR foveal
Aparicin
frecuente de
flecks
amarillentos en
la mcula y
regin
perimacular de la
retina Stargardt
 Mutaciones en:
RP Retinosis
pigmentaria
Responsable
Gen de Distrofias Distrofia de
ABCA4 retinianas cono-bastn

Degeneracin macular
DMRE
relacionada con la edad

STGD Stargardt disease

 Demora en
la
adaptacin
a la
oscuridad

Ratones
Depsito
carentes
excesivo de de copias Incremento
de all-
lipofuscina
en el EPR
funcionale transretinal
s de
ABCA4

PE en
segmento
externo de
los FR
TERAPIA GNICA:
Liberacin de un gen normalmente funcional a los FR que tienen mutacin en el gen
ABCA4.

Posible
cura

a
Variable insuficiencia
Enfermedades son Enfermeda causadas por que excede el 50%
asociadas a des
de la funcionalidad
ABCA4 recesivas
del gen
y

Degeneracin de las
clulas retinianas en
las enfermedades
por ABCA4 es tarda

El agregar un gen funcional podra restaurar la funcionalidad totalmente.

STARGEN:
Tratamiento basado en LV que portan el gen ABCA4.
Actualmente se estn realizando dos ensayos clnicos que aceptaron a 28 pacientes y
estn evaluando los niveles de seguridad de 3 distintas dosis (fase I/IIa).
El nico reporte hasta la fecha menciona que 8 pacientes han sido tratados en el primer
nivel de dosis sin ningn efecto adverso serio y que se va a proceder al siguiente nivel de
dosis.

https://www.google.com.pe/search?rlz=1C1NHXL_esCO7stargen
 Terapia gnica en
pacientes con CHM
Distrofia
CHM CAUSA:
retiniana
(coroiderem Mutaciones en el gen REP-1
ligada a X
ia) que codifica una protena
implicada en el trfico
Prevalencia de vesicular.
1 en 50,000-
100,000
individuos

Se caracteriza
por una
degeneracin
progresiva de
la
coriocapilaris,
el EPR y los FR
SNTOMAS:
En la primera o segunda dcadas de la vida los afectados (masculinos) comienzan
a presentar:
Nictalopa (condicin que hace difcil o imposible ver con relativa poca luz)

https://www.google.com.pe/search?q=Nictalopa&rl

Restricciones del campo visual perifrico

Visin en tnel

https://www.google.com.pe/search? https://www.google.com.pe/search?q=Visin+en+tnel
q=Restricciones+del+campo+visual+perifrico
 En la mayora de los casos, la visin central est preservada hasta la edad de 40-50 aos.

Aparecen cambios pigmentarios finos con atrofia coroidal focal y moteado pigmentario que
frecuentemente es descrito como en sal y pimienta.

https://www.google.com.pe/search?
rlz=1C1NHXL_esCO712CO730&biw

La degeneracin progresa ms centralmente para incluir reas de atrofia en la periferia de la

coroides y el EPR.

Hasta las ltimas etapas de la enfermedad se reporta atrofia en la mcula.

TRATAMIENTO:
Seis pacientes masculinos (35-63 aos) fueron aceptados en un ensayo clnico para
valoracin de fase I y fueron tratados con la liberacin subretiniana del vector AAV con el
gen CHM.

A pesar de tener un desprendimiento de retina secundario a la intervencin quirrgica, lo cual

normalmente reduce la agudeza visual:

Dos pacientes con CHM ms avanzada tuvieron una agudeza visual corregida basal ms
baja, ganaron 21 letras y 11 letras respectivamente (ms de 2 y 4 lneas de visin).

Los otros cuatro pacientes con agudeza visual basal normal, a los 6 meses tuvieron una
prdida mnima visual de 1 a 3 letras.

La mxima sensibilidad medida con la microperimetra con adaptacin a la oscuridad

increment en los ojos tratados desde 23-0 db basal a 25-3 db despus del tratamiento.
Otros ensayos clnicos y
estudios preclnicos con
terapia gnica ocular
Terapia gnica en pacientes con RP con
mutaciones en el gen MERTK (receptor
humano de tirosina-cinasa MER)
Requerido para la
Mutaciones en el Producto fagocitosis de los
gen MERTK segmentos externos
del FR por el EPR
Dirige una
Ausencia degeneracion
autosmica recesiva
profunda de la retina
Se han realizado Fue el ms exitoso, ya
estudios de que fue capaz de
reemplazamiento preservar la funcin
gnico utilizando AV, retiniana
AAV y LV La coadministracin de
lenti-Merk y AAV fue
ms efectiva que lenti-
Merk solo
 Terapia gnica en pacientes con
sndrome de Usher (USH)
USH grupo heterogneo de
enfermedades autosmicas
(sordera y ceguera)

Existen 3 formas para USH1 forma ms

distinguir por la frecuente 5 genes:
severidad y progresin asociados a esta
de la sordera enfermedad

Gen MYO7A
responsable del
60% de mutaciones
en este subtipo
 Terapia gnica en pacientes con DMRE
El factor de
crecimiento vascular
endotelial (VEGF)
Recientemente, un vector
AAV2 con una protena
quimrica soluble nueva,
control la neovascularizacin
despus de una simple
inyeccin
La inyeccin vtrea de AAV-
endostatina, AAV-angiostatina o
vector lentiviral de angiostatina
tambin han demostrado
disminuir significativamente la
neovascularizacin coroidea.
mayor factor
proangiognico promotor de
la neovascularizacin de la
vasculatura coroidea en la
DMRE
Principal causa de
ceguera en personas
mayores de 65 aos
Esos datos han dirigido a la
fase I de un ensayo clnico
empleando un vector EIAV
lentiviral que expresa
endostatina y angiostatina,
ambos inhibidores de la
angiognesis.
 Terapia gnica en pacientes con enfermedades
hereditarias oftalmolgicas

A la fecha hay muchos

modelos preclnicos en
estudio, incluyendo
GUCY2D, MFRP, etc

Dicho sndrome se inicia en la

En Mxico describieron un
segunda o tercera dcadas de
nuevo sndrome
la vida y los autores buscaron
autosmico recesivo
mutaciones en el gen MFRP

En un estudio realizado en un
modelo rat+on, la liberacin
Indicando que el modelo
subretiniana en el da 14 de un
puede ser til para la
vector AAV8 conteniendo el cDNA
terapia gnica en algn
MFRP pudo prevenir la
ensayo clnico.
degeneracin de FR y restaurar la
funcin en el ratn
 CONCLUSIONES:
Los dos pacientes con ms severa CHM mejoraron su agudeza visual
comparando una exploracin oftalmolgica basal y otra 6 meses despus
de la terapia.
Necesitamos ms estudios experimentales en ojos de modelos animales
para otras enfermedades y as traducirlos en ensayos clnicos para dar
esperanzas a muchos pacientes, con el propsito de ofrecerles potenciales
terapias oculares en un futuro cercano.
Los otros 4 pacientes preservaron su funcin visual a pesar de la
intervencin quirrgica, lo que permiti la preservacin de la agudeza
central y evitar o prevenir la degeneracin macular, que es caracterstica de
las etapas finales de la enfermedad.
 REFERENCIAS:
CAMPILLO, S. transduccin celular, hipertextual, 2015

Gambetti, P. Vias de introduccin de material genetico,

MANUAL MSD, 2016.

Hernndez, F. Terapia Genica, slideShare, 2012.