Identificacin de micobacterias

Gnero Mycobacterium

Gnero Mycobacterium: >100 especies

Complejo tuberculosis

Complejo lepra

Otras micobacterias
 PARED CELULAR

LAM Superficie

Lpidos
superficiales

cido
miclico

Arabinogalactan

Peptidoglicano

Membrana
celular
Citoplasma

Fuente:. McMurray. 2000

 DIAGNSTICO
MICROBIOLGICO
Baciloscopa
Fenotipia
Cultivo
Bioqumica

DIAGNSTICO MOLECULAR
Tcnicas moleculares
 IDENTIFICACIN FENOTPICA
Tincin de cido alcohol resistencia
Temperatura de crecimiento

Rpido
Velocidad de crecimiento
Lento

Morfologa de las colonias

Fotocromgenas
Pigmentacin
Escotocromgenas
Fotorreactividad
No cromgenas
 LA MUESTRA
Se recomiendan la obtencin de dos o tres muestras
por SR, para que la probabilidad de deteccin de
bacilos sea la mxima posible.
 LA MUESTRA

Mucopurulenta Sanguinolenta Mucosa Salivosa

 LA MUESTRA
Todas las muestras extrapulmonares se deben
cultivar
 BACILOSCOPA
La cido resistencia es la propiedad que tienen
las micobacterias de captar en su pared fucsina
fenicada (de color fucsia) o auramina (amarillo
fluorescente) y retenerla aun con la accin de
decolorantes, como la mezcla de cido y alcohol
 BACILOSCOPA
Coloraciones de Ziehl Neelsen y Kinyoun

Fundamento:

Unin de fucsina y complejos

micolil - arabinogalactano
 BACILOSCOPA
La tcnica de eleccin para el diagnstico rpido y
el control del tratamiento de la TBC pulmonar del
adulto.
Es simple, econmica y eficiente para detectar los
casos infecciosos.
Herramienta fundamental de un programa de
control de la tuberculosis
 COLORACIN DE ZIEHL
NEELSEN
COLORACION: Fucsina fenicada
Calentar sin llegar a la ebullicin
DECOLORACIN: Alcohol cido
COLORACIN DE FONDO: Azul de metileno
COLORACIN DE ZIEHL
NEELSEN
 COLORACIN DE GRAM
Cristal Violeta: 1 minuto

Lavar

Lugol: 1 minuto

Lavar

Decolorar alcohol acetona

Safranina: 1 minuto
COLORACIN DE GRAM
 BACILOSCOPA
No es diagnstica de M. tuberculosis
Otros cido resistentes:
Otras micobacterias Tsukamurella
Nocardia Cryptosporidium
Legionella Isospora belli
Rhodococcus Cyclospora

Ausencia de BAR no descarta enfermedad

10.000 bacilos por ml de esputo
 BACILOSCOPA
La observacin microscpica debe cumplir principalmente
dos objetivos:
determinar si en el extendido hay BAR
si los hay, cuantificarlos
 BACILOSCOPA
Otra tcnica:
Uso de colorantes fluorescentes Auramina -
Rodamina
 BACILOSCOPA
Informe de los resultados
Resultado del examen Informe
microscpico
No se encuentran BAAR en los 100 No se observan BAR
campos observados
Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 campos N exacto de bacilos en
observados 100 campos
Se observa entre 10 y 99 BAAR en 100 Positivo (+)
campos observados
Se observan de 1 a 10 BAAR por campo en Positivo (++)
50 campos observados
Se observan ms de 10 BAAR por campo Positivo (+++)
en 20 campos observados
 CULTIVO
Requieren medios complejos

Crecimiento depende de velocidad de crecimiento.

M. tuberculosis: lento 3 a 6 semanas a 37C por tasa

de duplicacin de 18 horas

CO2 a 5-10% favorece crecimiento

Medios: slidos lquidos

selectivos no selectivos
 CULTIVO
El cultivo incrementa la posibilidad de detectar el bacilo
en las muestras de casos que estn afectados por un bajo
nmero de bacilos, como los nios (tuberculosis
primaria) o pacientes con tuberculosis extrapulmonar.

Permite diferenciar el bacilo de la tuberculosis de otras

micobacterias en muestras donde se pueden encontrar
ambos, como en orina, contenido gstrico, o las de
pacientes que viven con VIH.
 CULTIVO
Permite conocer la sensibilidad de bacilos a drogas

antituberculosas e identificar los casos que pueden no

responder al esquema de tratamiento de primer lnea.

 CULTIVO

Descontaminacin
Homogeneizacin (fluidificacin o digestin)

Concentracin
 MEDIOS DE CULTIVO

Lowenstein Jensen
Middlebrook 7H10 - 7H11
American Thoracic Society
Petragnani
Ogawa-Kudoh Colonias de M. tuberculosis
en medio Lowenstein Jensen
 MTODOS BIOQUMICOS
Acumulacin de niacina
Reduccin de nitratos
Hidrlisis del Tween 80
Arilsulfatasa
Catalasa
Ureasa
Pirazinamidasa
Resistencia al T2H
Crecimiento en MacConkey sin cristal violeta
Crecimiento en NaCl al 5%
Reduccin de telurito
 PRUEBAS MOLECULARES

Sondas de cidos nucleicos

Secuenciacin de cidos nucleicos
Polimorfismo de fragmentos de restriccin (PRA)
Polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin
(RFLP)
Tipiaje de oligonucletidos espaciadores
(Spoligotyping)
Micobacterias ambientales
Micobacterias ambientales o no
tuberculosas
Ampliamente distribuidas en la naturaleza: agua, suelos,
plantas, etc.

Usualmente no infectan al hombre

Las enfermedades causadas son llamadas micobacteriosis

Factor predisponente: inmunocompromiso local o sistmico

MICOBACTERIAS NO TUBERCULOSAS SEGN VELOCIDAD
DE CRECIMIENTO Y PRODUCCIN DE PIGMENTO
GRUPOS DE CRECIMIENTO LENTO
Grupo I
Grupo II Escotocromgenas Grupo III No cromgenas
Fotocromgenas
M. Kansaii a)Pigmento rosa-rojo: M. avium
M. asiaticum M. lactis M. intracellulare
M. intermedium b) Pigmento amarillo-naranja: M. gastri
M. gordonae M. terrae
M. scrofulaceum M. triviale
M. flavescens M. nonchromogenicum
M. szulgai M. malmoense
c) Pigmento irregular M. haemophilum
M. xenopi M. shimoide
M. simiae M. celatum
M. ulcerans M. interjectum
M. branderi
M. genavense
Continuacin
GRUPOS DE CRECIMIENTO RAPIDO
Grupo IV
Grupo V Escotocrmogenas Grupo VI No cromgenas
Fotocromogena
M. marinum a)Pigmento rosa-rojo: M. fallax
M. engbaecki M. fortultum
b)Pigmento amarillo-naranja: M. chelonae
M. acapulcense M. abscessus
M. aurum M. agri
M. duvalii M. chitae
M. gadium M. moriokaiense
M. neoaurum M. confluentis
M. gilvum M. mucogenicum
M. obuense
M. rhodesiae
M. aichiense
M. chubuense
M. tokaiense
c) Pigmento irregular
M. phle
M. vaccae
M. thermoresistibile
M. parafortuitum
M. diernhoferi
M. smegmatis
M. austroafricanum

Fuente: Casal et al, 1999

 ELIMINA TODOS
MICROORGANISMO
OBJETO SUSTANCIA
Acondicionados
no contaminarse
nuevamente

ELIMINACION
CARGA
MICROBIANA
TOTAL
SUPERFICIES
INANIMADAS
 CONTROLAR Y
REDUCIR presencia
microorganismos
potencialmente
patgenos sobre piel
y/o mucosas
Ausencia TODOS
microorganismos
patgenos y de
materia sptica
 Fsico

Calor Radiaciones

Hmedo Seco Luz

ultravioleta

Ebullicin Flameado
Vapor de Estufas
agua saturada
y a presin.
coagula el protoplasma celular del germen, fenmeno
irreversible, su eficacia depende de dos factores: el
tiempo de exposicin y la temperatura
 Calor Hmedo:
produce
desnaturalizacin
y coagulacin de
protenas
Calor hmedo: Autoclave

Vapor de agua a presin

Temperatura :121C
Tiempo:15 minutos
Mtodo eficaz: tasa de
muerte-rpida
Mecanismo de accin:
Desnaturalizacin de
protenas.
Esterilizacin por accin
discontinua del vapor de
agua, se basa en el principio
de Tyndal
Proceso que se utiliza para la
destruccin de algunos de los
microorganismos posiblemente
presentes en materiales
sensibles al calor.
La temperatura de ebullicin, generalmente es
100C no es esterilizacin sino desinfeccin, ya que
no destruye las esporas.
 -No permite esterilizar -Rpido calentamiento y
soluciones que formen penetracin
emulsiones con el agua -Destruccin de bacterias y
-Es corrosivo sobre ciertos esporas en corto tiempo
instrumentos metlicos -No deja residuos txicos
-Hay un bajo deterioro del
material expuesto
-Econmico
El calor seco produce desecacin de la clula, es txico
por niveles elevados de electrolitos, fusin de
membranas. Estos efectos se deben a la

Transferencia de calor :
Materiales a los microorganismos que
estn en contacto con stos.
El aire caliente generado por una resistencia,
circula por la cavidad principal y por el espacio
entre ambas cmaras, a temperatura de 140 C
a 170 C.

Usos: material de vidrio,

objetos metlicos,
especialmente quirrgico
(bistur, tijeras), aceites
Se emplea la combustin directa de material
descartable.
 Requiere mayor
tiempo de
-No es corrosivo para
esterilizacin,
metales e
respecto al calor
instrumentos.
hmedo, debido a la
-Permite la
baja penetracin del
esterilizacin de
calor.
sustancias en polvo y
no acuosas, y de
sustancias viscosas no
voltiles.
 Radiaciones

Tipo de radiacin
Tiempo de exposicin
Dosis
 Ionizantes

Producen iones y radicales libres que alteran las bases

de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y
lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad
de los microorganismos.

Se les utiliza para esterilizar

materiales termolbiles
(termosensibles) como
jeringas descartables,
sondas, etc. Se utilizan a
escala industrial por sus
costos.
Su empleo esta basado en los conocimientos sobre
la energa atmica

. Puede esterilizar antibiticos, vacunas,

alimentos, etc.
1. Pared Bacteriana

2. Membrana Citoplasmtica

3. Protoplasma

4. Enzimas

5. Procesos de Biosntesis
 Gases Lquidos

-Formol -Glutaraldehdo
-Oxido de -Xilenol ?
etileno -Iodo Povidona?
 Actan sobre las esporas. Producen esterilizacin si el tiempo
de exposicin es adecuado.

Modifican de forma irreversible protenas y cidos nuclicos.

No pueden emplearse como antispticos.

Algunos agentes son:

Oxido de etileno.
Formaldehdo al 8%, en alcohol al 70%
Glutaraldehdo 2%
Perxido de hidrgeno.
 No actan sobre las esporas.

Actan a nivel de protenas, cidos nucleicos y membrana celular.

Pueden ser utilizados como desinfectantes y antispticos.

Algunos agentes son:

Compuestos clorados (hipoclorito de sodio)

Compuestos iodados (iodforos y alcohol yodado)

Compuestos fenlicos

Alcoholes

Clorhexidina
Son aquellos que actuando en un tiempo razonable no
destruyen esporas, ni M. tuberculosis, ni virus no lipdicos.

Producen alteraciones a nivel de la membrana celular.

Algunos agentes son:

Compuestos de amonio cuaternario.
Compuestos mercuriales.
Concentracin

Tiempo

Temperatura

N de microorganismos

Estado de vida y clase de microorganismo.

Tipo de soporte material del germen: acuoso,

viscoso, slido.
Lesionan la membrana celular de los
microorganismos, desnaturalizan
protenas celulares y desorganizan la
estructura fosfolipdica.

Es un agente oxidante que modifica grupos

funcionales de protenas y cidos nucleicos.
Es un antisptico dbil, con capacidad oxidante y
formadora de radicales libres.

El cloro, los hipocloritos y las cloraminas

son desinfectantes que actan sobre
protenas y cidos nucleicos de los
microorganismos.

Hipoclorito de sodio (agua lavandina)

Compuestos Fenlicos
Se usan membranas filtrantes con poros de un
tamao determinado.

Filtros profundos o Filtros de profundidad: consisten

de un material fibroso o granular prensado, plegado,
activado, o pegado dentro de los canales de flujo.

Membranas filtrantes: tienen una estructura continua, y

la retencin se debe principalmente al tamao de la
partcula.

Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): son

pelculas muy delgadas de policarbonato que son
perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y
sustancias qumicas.
 MTODOS BIOLGICOS
Mtodos para determinar la
susceptibilidad a los antimicrobianos
 Campo de Aplicacin

Para bacterias de rpido desarrollo como:

Enterobacterias, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus spp., Enterococcus spp y Vibrio
cholerae.
 El antibiograma

Mtodo para determinar la susceptibilidad de

un microorganismo ante diferentes antibiticos

Difusin con discos (Kirby Bauer)

Difusin dilucin o epsilomtrico

Dilucin
Difusin con discos (Kirby Bauer)

Paso 1: Paso 2:
Seleccionar colonias aisladas Colocarla en un tubo con solucin
fisiolgica y ajustar la turbidez
Difusin con discos (Kirby Bauer)

Paso 3:
Impregnar un hispo estril
con la suspensin bacteriana
Paso 4:
Inocular una placa de agar
Muller Hinton con el hisopo
impregnado en la suspensin
bacteriana
Difusin con discos (Kirby Bauer)

Paso 5: Paso 6:
Colocar los discos de Incubar por 18-24 horas a 35 C
antibitico
Difusin con discos (Kirby Bauer)

Paso 7:
Lectura e interpretacin de los halos
Difusin dilucin o epsilomtrico

Determina CIM

Se utiliza una cinta con

concentraciones

crecientes de antibitico
 Dilucin
Determina la CIM
Utiliza concentraciones fijas de antibitico
colocado en tubos o placas de agar