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Curso: Biologa Celular y Molecular

Oscar Nolasco Crdenas MSc.


oscarnol@hotmail.com
Noviembre 2017
1865 Gregor Mendel Publico sus
resultados sobre los factores de la
herencia.
Experiments in Plant Hybridization The
Natural Science Society

1868 descubrimiento de la nucleina (DNA)


Friedrich Miescher

1902 Walter Sutton Interrelaciona la


citologa y el Mendelismo (morfologa &
herencia). Cromosomas son unidades
hereditarias. Esta teora tambin fue
desarrollada por Theodor Boveri
1928 Fred Griffith Propuso la existencia de un principio transformante .

1944 Oswald Avery,Colin MacLeod,Maclyn McCarty. Reportaron que el principio


transformante de Griffith era el DNA.
1952 Martha Chase y Alfred Hershey empleando bacteriofagos marcados con 35S y
32P demostraron que el DNA es una molcula hereditaria
1950 Erwin Chargaff Determino que los organismos vivos
presentan una proporcin constante entre Adeninas 1953 Francis Crick y James
con Timinas y Guaninas con Citosinas. Watson resolvieron la
estructura tridimensional
del DNA.

1950 Rosalind Franklin Obtuvo las fotografas de alta


calidad de difraccin de rayos X del DNA

Rosalind Franklin

Maurice Wilkins
ESTRUCTURA DEL DNA
Las hebras estan formadas de
nucletidos unidos por enlace
fosfodiester generando el
esqueleto azcar fosfato

Las dos hebras se mantienen por el


apareamiento de bases en el DNA
por puentes de hidrgeno
La estructura del ADN provee el mecanismo para la herencia

1958 Matthew Meselson y Frank Stahl empleando la diferencia de densidades de isotopos


demostraron la propiedad semiconservativa de la replicacin del DNA.
EL DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGIA
MOLECULAR
Duplicacin o Replicacin
DNA
.
CCTGAGCCAACTATTGATGAA

transcripcin
Reversa
RNA CCUGAGCCAACUAUUGAUGAA

traduccin

Protena PEPTIDE
El ordenamientos de los genes es propio de cada organismo
Organizacin de genes humano
Estadisticas sobre el genoma Humano

Longitud 3.2 x 109 pares de nucleotidos


Numero de genes codifican a protenas Aprox 21000
Longitud de genes por protena 2.4 x 106 pares de nucleotidos
Tamao promedio de genes codifican protenas 27000 pares de nucleotidos
Nmero mnimo de exones por gen 1
Nmero maximo de exones por gen 178
Promedio de nmero de exones por gen 10.4
Tamao de exon largo 17106
Promedio de tamao de exones 145
Genes de RNA no codante Aprox 9000
Nmero de pseudogenes mas de 20000
Porcentaje de DNA en exones 1.50%
Porcentaje de DNA altamente conservado 3.50%
Porcentaje de DNA en elementos repetitivos aprox 50%
Las caractersticas de los cromosomas en la mitosis forma el kariotipo, lo que
permite el anlisis de cromosomas aberrantes, anlisis de anomalias
cromosomicas, Inversiones y Transposiciones
Duplicacin del DNA En eucariotes es complejo y se da en
varios orgenes de replicacin una
Ocurre en un origen de replicacin vez que se realiza la replicacin el
nico en DNA circulares (plasmidos) origen es inactivado
La sntesis de la nueva hebra es en sentido 5 a 3
Organizacin comn de las DNA polimerasa: La palma contiene el sitio
cataltico, los dedos posicionan el molde con el nuevo nucletido y el pulgar
mantiene la asociacin de la polimerasa y su sustrato, es importante en la
procesividad,
c

c Los nucletidos adicionados son nucletidos


trifosfatos. El mecanismo involucra iones Mg
que coordinan con el grupo fosfato y residuos
Asp de la enzima DNA polimerasa
La DNA polimerasa controla la fidelidad de la replicacin.
Por efecto estrico discrimina un desoxiribonucleotido de
un ribonucleotido
Las enzimas polimeras tienen un mecanismo de relectura o
de proofreading (actividad exonucleasa 3 a 5) Evita la
mala incorporacin de un nucletido
Error 1 en 10 5 en polimerizacin 5 a 3
Error 1 en 10 2 en proofreading 3 a 5
Reparacin malapareamiento mismatch error 1 en 10 2
Combinacin de todas las actividades dan la posibilidad de
error 1 en 10 9
El desenrrollamiento del DNA
ocasiona un superenrrollamiento
positivo en la direccin de la
maquinaria de replicacin.
DNA girasa es una
topoisomerasa II, que rompe el
DNA e introduce supercoil
negativo a la cabeza de la
horquilla de replicacin
Fluoroquinolona inhibe DNA
girasas en muchas bacterias
gram-negativas:
ciprofloxacina y levofloxacina
(Levaquin)
DNA polimerasas
La sntesis de DNA en E. coli, Empieza con la unin de protenas
dnaA a la secuencia de origen de replicacin (ori)

Cerca de 20 molculas de DnaA se unen a


los cuatro repeticiones de 9 bases y
hexameros de DnaB (helicasa) se unen a
cada hebra de DNA en colaboracin con
DnaC.
La actividad helicasa requiere de ATP y
provoca la liberacin de dnaA.
El complejo primasoma (dnaB, dnaC y
dnaG) sintetizan el primer de RNA ( 10 a
60 nucletidos)
Composicin de la DNA
pol III holoenzima
3 DNA polimerasa 1 copia
de una molcula
portadora de la pinza
deslizante, este incluye
tres copias de protena T
que enlazan a las 3 DNA
polimerasas. La sntesis
conjunta de la hebra lder
y la hebra rezagada
propone el modelo
Trombon
La incorporacin de la helicasa en eucariote es dependiente de Cdc6 y Cdt1 y la activacin
de la helicasa y ensamblaje de replicasoma depende de dos quinasas que son activas en
la fase S
El problema de la duplicacin en los extremos en DNA lineal Telomeros son capuchones
(telomeros)
protectivoscaps sobre el
extremo de los cromosomas
y consisten de repeticiones
cortas en tandem
Previenen desde fusiones
Cromosomas y rearreglos del
kariotipo.

(TTAGGG)muchos
El problema de la duplicacin en los extremos (telomeros) puede resolverse por distintos
mecanismos.
La telomerasa usa su propia molcula de RNA y por transcripcin reversa extiende la hebra en
el extremo 3
Es mas activa en clulas germinales que en las somticas por lo que se encuentra relacionada
con la edad

(TTAGGG)poco
REPARACION DE ERRORRES EN EL DNA :
Sistemas de reparacin corrigen el dao en el DNA
Algunos sndromes
heredados con defectos en
la reparacin de ADN

M5H2,3,6M,L H1P, MS2 cancer de colon MMR


Xeroderma pigmentosum(X cancer de piel, sensibilidad UV,
P) groupsA -G anormalidades neurologicas NER
translesiones por ADN
XP variant Sensibilidad UV, cancer de piel polimerasa
leucemia, linfomas, sensibilidad
rayos gamma, inestabilidad ATM protein, kinasa
Ataxia telangiectasia(A T) genomica activada por DSB
cancer de mama, ovario y
BRCA2 prostata RH
envejecimiento prematuro, 3exonucleasa y
Werner syndrome cancer, inestabilidad genomica helicasa
cancer, crecimiento retardado,
Bloom syndrome inestabilidad genomica accesoria helicasa
anormalidades congenitas, Interstrand croslink
Fanconi anemia groupsA -G leucemia, inestabilidad genomica repair
hipersensibilidad a agentes que
46 BR patient causan dao en el ADN, ADN ligasa I
Depurinaciones, deaminaciones los principales cambios espontneos
que crean cambios en el ADN
5000 depurinaciones por clula por da
100 deaminaciones por clula por da
Xeroderma pigmentosa

No se puede escindir los


dmeros de pirimidina

Las mutaciones pueden


ocurren en cualquiera de los
ocho genes necesarios para
el sistema de reparacin de
errores denominados XPA a
XPG
Eukaryotic
Nucleotide Excision Repair
Pathways
Dos mecanismo:
1) Global
Xeroderma pigmentosum
XP

2) Acoplada a la transcripcin
Cockaine
CSA CSB

Trichothiodystrophy
XPD
El sistema de
reparacin
excision de
base BER,
repara daos
de deaminacion
o rupturas en
una sola
cadena
El sistema de
reparacin por
recombinacin
homologa HR y
de unin de
extremos EJ,
reparan la ruptura
de las cadenas de
DNA

El sistema de
reparacin por
recombinacin
homologa HR y de
unin de extremos
EJ, reparan la
ruptura de las
cadenas de DNA
Sistema de reparacin de una mala
incorporacin o mal apareamiento MMR
La recombinacin homologa en
meiosis genera el croosovers
TIPOS DE MUTACIONES
En el ADN
Sustitucion de bases
Transiciones PuPu o PiPi
Transversiones PuPi o PiPu
Efecto de las mutaciones en las protenas
Mutaciones conservativas
Mutacin silenciosa:Tripletes que codifican para el mismo aminocido:
AGG(arg)CGG(arg)
Mutacin con sentido o neutra:Tripletes que codifican para aminocidos
equivalentes distintos. AAA(lys)AGA(arg). Ambos son aminocidos bsicos
Mutaciones no conservativas
Mutacin cambio de sentido: aparece un nuevo triplete que codifica para un
aminocido de distinto tipo. La protena pierde su funcin si afecta su sitio catalitico
Mutacin sin sentido: Aparece un triplete de terminacin o stop:
CAG(gln)UAG(stop)
Mutacin con cambio de marco de lectura (insercin, delecin, duplicacin
inversin y transposicin) cambian el marco de lectura y la posicin del codon stop

Silenciosa Con Sentido Sin Sentido Readthrough


Curso: Biologa Celular y Molecular
Oscar Nolasco Crdenas MSc.
oscarnol@hotmail.com
Noviembre 2017
DEL DNA A RNA
Principales tipos de RNA en una clula
Principales ARN involucrados en los procesos de transcripcin y traduccin:
-ARNm Policistronicos en procariotes, monocistronicos en eucariotes
-ARNt
-ARNr
-Otros ARN en eucariotes ARNsn (ARN pequeo nuclear, ARN de
edicin), ARNsc (ARN pequeo citoplasmatico, micro ARN)

ARNs en E. coli

Tipo Sed. Coef. Mol. Wt. Residuos % del total ARN

mRNA 6 - 25 25,000 - 1,000,000 75 -3000 ~2


tRNA ~4 23,000 - 30,000 73 - 94 16
rRNA 5 35,000 120
16 550,000 1,542 82
23 1,100,000 2,904
Transcripcin
La informacin gentica almacenada en el DNA es transcrita a una copia de
RNA complementario.
La hebra de ADN que ha servido como molde se denomina hebra
antisentido y la otra hebra de ADN es denominada hebra codante o con
sentido y la secuencia es idntica a la del RNA sintetizado ( Excepto en las
posicin de T que son cambiadas por U)

(5')ATGCGCTATAGCTGTTT(3') Hebra de DNA no molde (+)


Doble
hebra de
codante
DNA
(3')TACGCGATATCGACAAA(5') Hebra de DNA molde (-)
antisentido

(5')AUGCGCUAUAGCUGUUU(3') Transcrito de RNA


Transcripcin
El producto transcripto puede
ser :
RNA mensajero o
mRNA;
RNA ribosomal o rRNA;
RNA de transferencia o
tRNA; u
Otros RNA como
ribozimas (act.
Enzimatica),RNA de
interferencia o iRNA
(actividades de
regulacin de la
expresin gentica), o
participar en actividades
postranscripcionales de
edicin de mRNA
(gRNA).
RNA POLIMERASAS
Transcripcin etapas:
Iniciacin:
La misma hebra es siempre
transcrita de un promotor dado.
La polimerasa se une al promotor
en una orientacin definida,
formando un complejo cerrado,
paso seguido la hebra se abre a 13
bp alrededor del inicio de
transcripcin (complejo abierto).
Las primeras transcripciones son
ineficientes y a menudo se liberan
pequeos transcriptos y se inicia
nuevamente la transcripcin.
La sntesis no requiere de cebador
o primer, la polimerasa inicia los
transcriptos con una A,
Elongacin:
La sntesis se realiza en un
corto espacio aprox
10bases. El DNA se
desenrrolla en frente y se
rehibrida por detrs. La
cadena de RNA se elonga a
travs del molde y permite
las funciones de
proofreading.

Terminacin :
En algunas celulas existe
una secuencia seal que
desencadena la
terminacion, en otras el
proceso no es claro
Transcripcin procariotes
Promotor
El promotor reconocido por la polimerasa conteniendo el factor sigma
tiene dos secuencias conservadas, cada una de seis nucleotidos,
separadas por 17-19 nucleotidos, en la posicion menos 10 y menos 35
Elementos adicionales UP element promotores de genes rRNA
aumentan la interaccion enzima DNA
Extended 10 element carece de la region -35 (genes gal)
Elemento discriminador hebra bajo del elemento -10
Inicio de la transcripcin en procariotes
Factor sigma mantiene estable la unin de la RNA polimerasa
al promotor en el DNA. Este factor de iniciacin es especifico para la transcripcion de
diferentes grupos de genes en E. coli. El factor 70 puede dividirse en 4 regiones. La
region 2 se une a una hebra del elemento -10.
La subunidad sigma es posicionada dentro de la estructura holoenzima para hacer
factible el reconocimiento de varios elementos promotor
Terminacin de la transcripcin procariote
Terminacin Rho dependiente

En la terminacin dependiente de r no se
presenta el tramo de poliA, aunque s se
forma una horquilla en la que la RNA
polimerasa hace una pausa y si se
encuentra la protena r presente se
detiene la transcripcin.
No se conoce a detalle el mecanismo de
disociacin, pero en este se produce la
hidrlisis de ATP por efecto de r.
Terminacin de la transcripcin Procariote
Rho independiente

Terminacin independiente de rho (r), contiene una secuencia que induce a


la formacin de una horquilla en el transcrito de RNA de 10 a 15 nucletidos
antes del final, seguida por un tramo de poliA en la cadena molde que facilita
la disociacin de los elementos de la transcripcin.
Transcripcin en eucariotes

3 RNA Polimerasas en Eucariotes, en plantas pueden encontrarse


hasta 5.

RNA polimerasa I transcribe la mayoria de los genes de rRNA


RNA polimerasa II transcribe todos los genes que codifican
proteinas y algunos RNA pequeos nucleares
RNA polimerasa III transcribe los genes de tRNA y genes de 5S
rRNA y RNA pequeos nucleares

A diferencia de la polimerasa procariote que solo requiere un factor de


inicicacion , en eucariotes se requiere de varios factores llamados
factores generales de transcripcion
Transcripcin eucariote:
Promotor 40-60 nucletidos:
El componente de TFIID que se une y distorsiona la caja TATA es TBP
Tata binding protein, las otras subunidades son llamadas TAFs factores
asociados a TBP.
TFIID es un factor critico en el reconocimiento del promotor y
establecimiento del complejo de preiniciacion
TFIIA, TFIIB, TFIIF junto con polimerasa y
TFIIE y TFIIH forman el complejo de
preiniciacin, formado este complejo se
produce la denaturacion del promotor. Esta
hidrolisis requiere de ATP y es mediada
por TFIIH
El carboxiterminal de la polimerasa debe
ser fosforilado: distino numero de
repeticiones heptapeptido de tyr-ser-pro-
the-ser-pro-ser
El inicio de la transcripcin requiere de
protenas adicionales, protenas
regulatorias, del complejo mediador,
enzimas modificadores del nucleosoma
El complejo mediador comprende mas de
20 subunidades
La terminacin de la transcripcin en eucariotes
Modelo Torpedo : esta ligada a una RNAsa Rat 1 y otros factores que
actuaran al igual que Rho iniciando la terminacin
Modelo alosterico: Cambio de procesividad de la enzima pasada la seal la
procesividad disminuye y el cambio conformacional iniciara la terminacin
EL TRANSCRIPTO DE mRNA EN EUCARIOTE SUFRE DIVERSOS
PROCESOS:
Adicin de metil guanosina en 5 ( 5capping) o Adicin del capuchon 5
Corte y empalme ( RNA splicing)
Adicin de cola de poliA
Corte y empalme ( RNA splicing)

Mecanismo de splicing mediado por el splicesoma


Splicing alternativo
Proceso de
Poliadenilacin
En eucariotes los RNA maduros son exportados del ncleo

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