ESCUELA DE VERANO 2009

DRA. GERMAINE JACOB A.

hebras hebras hijas

parentales

REPLICACION DEL DNA

 REPLICACION

TRANSCRIPCION

TRADUCCION

PROTEINA DOGMA CENTRAL

DE LA
BIOLOGIA MOLECULAR
Francis Crick y James Watson, en Cambridge,
England, 1953.
Fotografa del archivo del Cold Spring Harbor Laboratory, New York, USA

Crick, Watson y la molcula de DNA

 LA REPLICACION DEL DNA ES SEMICONSERVATIVA

CADA MOLECULA HIJA

POSEE UNA HEBRA
PROVENIENTE DE LA
MOLECULA PROGENITORA Y
UNA HEBRA NUEVA.

HEBRA NUEVA HEBRA NUEVA

HEBRA ANTIGUA HEBRA ANTIGUA

 EL DNA SE EXTRAE Y SE CENTRIFUGA
AL EQUILIBRIO EN UNA GRADIENTE DE
DENSIDAD DE CsCl

DNA PESADO

DNA PARENTAL

Experimento de Meselson y Stahl

DNA HIBRIDO

PRIMERA GENERACION
MOLECULAS HIJAS
LIVIANO

(15N - 14N)
HIBRIDO

SEGUNDA GENERACION
MOLECULAS HIJAS
REPLICACION DEL DNA : MODELO DE BACTERIAS

BACTERIAS:
UN UNICO CROMOSOMA CIRCULAR

UN UNICO ORIGEN DE REPLICACION

 ORIGEN DE REPLICACION

3 secuencias de 4 secuencias de 9 bp: unin de Dna A

13 bp en tandem

SECUENCIAS DE CONSENSO
 INICIO
DE LA
REPLICACION:

PROTEINAS
Dna A
Dna B : helicasa
Dna C
LA REPLICACION ES BIDIRECCIONAL A PARTIR DEL
ORIGEN

Cooper et al, 2000

FORMACION DE 2 HORQUILLAS
DE REPLICACION, EN DIRECCIONES
OPUESTAS
LA REPLICACION ES BIDIRECCIONAL A PARTIR DEL
ORIGEN

2 HORQUILLAS DE REPLICACION,
EN DIRECCIONES OPUESTAS

fragmentos
de Okazaki

horquillas de
replicacin

fragmentos
de Okazaki
 SOBRE ENRROLLAMIENTO DEL DNA:
LAS TOPOISOMERASAS RELAJAN AL DNA
SOBRE ENRROLLADO

DNA relajado
(Watson y Crick)

REPLICACION
DEL DNA
cromosoma
circular
cerrado
DNA
sobre
enrrollado
AVANCE DE UNA
HORQUILLA TOPOISOMERASA

HELICASA

PROTEINAS SSB

RNA
partidor
PRIMASA

PRIMASA

RNA
partidor
 DNA POLIMERASAS

ENZIMAS QUE CATALIZAN LA SINTESIS DE

LAS NUEVAS HEBRAS DE DNA

1. Utilizan d-ATP, d-GTP, d-CTP y d-TTP como sustratos

para la polimerizacin.

2. Polimerizan en sentido 5 3, adicionando

nucletidos al extremo 3 libre.

3. Requieren una hebra de DNA molde.

4. Necesitan un partidor (primer, cebador).

unidades del DNA : d-ribonucleotidos
d-NUCLEOTIDOS : d-nucleosidos trifosfato
 .
HEBRA .
.
NUEVA
H
E
B
R
A
formacin del
enlace M
fosfodister
NUCLEOTIDO O
ENTRANTE: L
trifosfato,
en el DNA
D
queda un E
slo fosfato
 DNA molde
DNA molde
3 5

DNA primasa
DNA polimerasa III

3 5
5 3
RNA partidor
DNA polimerasa III

3 5
5 3

RNA partidor DNA nuevo

(10 - 60 nt)
HEBRA LIDER Y HEBRA DISCONTINUA O RETARDADA

Una hebra del DNA, la que se sintetiza en la

misma direccin en que avanza la horquilla de
replicacin, crece en FORMA CONTINUA:
HEBRA LIDER

La otra hebra, la que crece en la direccin opuesta a la

direccin en que avanza la horquilla, crece en
FORMA DISCONTINUA, en fragmentos llamados
FRAGMENTOS DE OKAZAKI:
HEBRA DISCONTINUA O RETARDADA
 FRAGMENTOS DE OKAZAKI:
sntesis de la hebra discontinua o retardada

avance de la
horquilla

hebra lder (continua)

hebra retardada (discontinua)

FRAGMENTOS DE OKAZAKI : 1000 - 2000 nt

 La sntesis de cada
fragmento de Okazaki
requiere de un partidor
sintetizado por la
DNA primasa

Hebra lder

Sntesis de un fragmento de Okazaki

RNA
partidor
Fragmento de Okazaki previo
 DNA PRIMASA

SINTETIZA LOS PARTIDORES DE RNA,

TANTO PARA LA HEBRA LIDER COMO PARA
CADA UNO DE LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI.

DNA POLIMERASA III

SINTETIZA LA HEBRA LIDER

SINTETIZA LOS FRAGMENTOS DE OKAZAKI

EN LA HEBRA RETARDADA
 DNA POLIMERASA III
(UNA SUBUNIDAD CATALITICA)

Hebra
lder
Fragmentos
Hebra de Okazaki
retardada

DNA primasa
siempre unida a la
hebra retardada
para formar los
RNA partidor partidores de RNA

DNA POLIMERASA III

(LA OTRA SUBUNIDAD CATALITICA)
 DNA polimerasa III:
varias subunidades, 2 subunidades catalticas
 Dna polimerasa III

vista desde un vista lateral

extremo del DNA
 DNA POLIMERASA I y DNA LIGASA

molde de la hebra retardada

F. OKAZAKI PARTIDOR F. OKAZAKI

DNA POLIMERASA I:
hidroliza los partidores
completa los espacios

DNA LIGASA:
sella el DNA
 DNA POLIMERASA I

1. HIDROLIZA LOS PARTIDORES CON SU

ACTIVIDAD EXONUCLEASA 5 3

2. POLIMERIZA PARA COMPLETAR LA

HEBRA RETARDADA CON SU ACTIVIDAD
DNA POLIMERASA 5 3 Polimerasa y
EXO 3 5

A diferencia de la DNA polimerasa III,

la DNA polimerasa I es una sla
cadena polipeptdica

EXO 5 3
 LAS DNA POLIMERASAS POSEEN
ACTIVIDAD CORRECTORA

EXONUCLEASA 3 5
(contraria a la direccin de polimerizacin 5 3)

bases mal
apareadas

Exonucleasa
3 5
DNA polimerasas : actividad correctora

Sitio activo de
polimerasa
Sitio activo
exonucleasa
3 5
 una forma
tautomrica de C
(C*) puede
aparearse con A
e incorporarse a
POL EXO la cadena.
POL EXO
antes que la
polimerasa contine,
C* cambia a C y
queda
mal apareada.
 El apareamiento
POL EXO
incorrecto en el extremo
3- OH de la hebra que
se est sintetizando
bloquea la elongacin.
La DNA polimerasa se
devuelve para
posicionar las bases
mal apareadas en el
sitio exonucleasa.
POL EXO

El nucletido mal
apareado es removido.
La DNA polimerasa avanza y
retoma su actividad
polimerasa.
 tasa de error en la polimerizacin =
1 / 104 -105 nucletidos

Con la actividad correctora mejora 102 - 103 veces

tasa de error polimerizacin + act. correctora =

1 / 106 - 108 nucletidos
 origen
horquilla en contra horquilla a favor
de de los punteros
los punteros del reloj del reloj

complejos Ter - protena Tus

 horquilla en
contra de los horquilla a favor de
punteros del los punteros del
reloj reloj

cromosomas concatenados

(Tipo II)

cromosomas separados
 REPLICACION EN EUCARIONTES

en eucariontes, cada molcula de DNA est empaquetada

en un cromosoma mittico que es 10000 veces
ms corto que su largo extendido.
eucromatina: fibras de
30 nm y fibras de11 nm.
heterocromatina: ~ 10 %
del total, altamente
condensada, como en
la mitosis.

cromosomas altamente
condensados
En metafase 10000 x de
compactacin.
REPLICACION EN EUCARIONTES:
multiples orgenes de replicacion
bidireccional a partir de cada orgen

inicio de la replicacin
en los distintos orgenes

replicacin bidireccional
desde cada orgen

Cooper et al, 2000

 ORIGENES DE REPLICACION

En levadura abarcan aproximadamente 150 pares

de bases, con varias secuencias conservadas.
Hay alrededor de 400 orgenes en los
16 cromosomas del genoma haploide.

En todos los eucariontes se requiere un complejo

multienzimtico llamado ORC que se une a varias
secuencias en el orgen. Este complejo interacta
con y es regulado por una serie de protenas
involucradas en el control del ciclo celular.
 DNA POLIMERASAS DE EUCARIONTES

Tipo Funcin
replicacin nuclear ; asociada a la hebra retardada y
a la primasa
reparacin nuclear
replicacin y reparacin mitocondrial
replicacin nuclear ; asociada a la hebra lider
enzima nuclear
 DNA polimerasa d

Se asocia con la protena PCNA, de estructura

muy similar a la subunidad b de la DNA
polimerasa III de bacterias y de funcin anloga,
dando procesividad a la DNA polimerasa d.
Tiene actividad correctora y sera la encargada de
la sntesis de los fragmentos de Okazaki y
de la hebra lder.
 (e)
Hebra
lder

Complejo de b abierta con d

d y e
Hebra discontinua

RNA partidor
(helicasa) del fragmento
de Okazaki
previo

a) Sntesis continua de la hebra lder, mientras la

helicasa desenrrolla al DNA
 primasa

partidor del
fragmento de
Okazaki previo

primasa
nuevo
RNA
partidor

b) DNA primasa se une a la DNA B (helicasa),

sintetiza un nuevo partidor de RNA y se disocia.
 primasa se disocia

Una nueva subunidad b

contacta a un nuevo RNA
partidor

se completa la sntesis
del fragmento de Okazaki
 se descarta
la subunidad
b anterior

Nueva subunidad b
Se ubica una nueva
subunidad b