CINTICA ENZIMTICA

Diagrama mostrando a Anidrase carbnica II. A esfera a cinzento um ion de

zinco que funciona como cofator no stio ativo.
CINTICA ENZIMTICA
CINTICA ENZIMTICA
CINTICA ENZIMTICA
A linha em vermelho representa a reao na ausncia de catalisador;
A linha em azul na presena de enzima.
S: nvel de energia do(s) substrato(s);
P: nvel de energia do(s) produto(s);
G: energia de Gibbs;
R: coordenada de reaco (sentidos de progresso de reaco);
G': energia livre padro bioqumica;
G: energia de ativao
S-P: do(s) substrato(s);
P-S: do(s) produto(s)).
 A cintica enzimtica o estudo do mecanismo pelo qual
as enzimas ligam substratos e os transformam em
produtos.
So utilizados dados sobre a velocidade de reao de
enzimas atravs de ensaios enzimticos.

Mecanismo de reao de uma enzima com substrato nico.

A enzima (E) liga o substrato (S) e liberta o produto (P).
Cintica de MichaelisMenten
Curva de saturao para uma enzima mostrando a relao
entre a concentrao do substrato e a velocidade de reao;
As reaes catalisadas por enzimas so saturveis, e a sua
velocidade de catlise no indica uma resposta linear face ao
aumento de substrato.
Se a velocidade inicial da reao medida sobre uma escala
de concentraes de substrato [S]);
a velocidade de reao (v), aumenta com o acrscimo de [S].
A medida que [S] aumenta, a enzima satura-se e a velocidade
atinge o valor mximo Vmax.
CINTICA ENZIMTICA
A saturao acontece porque, medida que
aumentada a concentrao de substrato, aumenta
tambm a quantidade de enzima presente sob a forma
de complexo enzima-substrato (ES).
velocidade mxima, Vmax, todos os centros ativos
esto ocupados (saturados) com substrato, ou seja, no
existe enzima livre para ligar mais substrato e a
concentrao de complexo ES igual concentrao de
enzima.
CINTICA ENZIMTICA
A atividade de uma enzima geralmente descrita atravs
de Vmax e tambm da constante de Michaelis-Menten (KM),
que representa a concentrao de substrato qual se
detecta uma velocidade de reaco igual a metade de
Vmax;

Cada enzima possui um KM caracterstico (kcat) para um

dado substrato; este parmetro muitas vezes usado
para demonstrar a fora de ligao de um substrato
enzima.

tambm usada outra constante cintica, kcat, para

descrever o comportamento de uma enzima,
representando o nmero de molculas de substrato que
podem ser catalisadas por centro ativo por segundo.
No modelo da cintica de Michaelis-Menten de uma reao com um
substrato existe uma reao bimolecular inicial entre a enzima E e o
substrato S para formar o complexo ES. Embora o mecanismo
enzimtico para a reao unimolecular possa ser
bastante complexo, h tipicamente um passo na determinao da
velocidade que permite que se modele o mecanismo como um
passo cataltico simples de velocidade constante k2.

(Eq. 1).

k2 tambm o valor mximo de reaes enzimticas catalisadas

por segundo.
Com baixas concentraes de
substrato [S], a enzima permanece
em equilbrio entre a forma livre E e o
complexo enzima-substrato ES;
aumentando [S] aumenta [ES] custa
de [E], mudando o equilbrio para o
lado direito.

Uma vez que a velocidade de reao depende da concentrao [ES], a

velocidade sensvel a pequenas alteraes de [S];
Altos valores de [S], a enzima fica totalmente saturada com substrato, e
existe apenas na forma ES.
Nestas condies, a velocidade (vk2[E]tot=Vmax) insensvel a pequenas
alteraes de [S]; assim, [E]tot a concentrao total enzimtica

que aproximadamente igual concentrao [ES] em condies de saturao

 A equao de MichaelisMenten[7]
descreve como a velocidade de
reao v depende da posio do
equilbrio ligado ao substrato e da
constante de velocidade k2.
Michaelis e Menten mostraram que
se k2 for bem menor que k-1
(chamada a aproximao de
equilbrio), pode obter-se a seguinte
equao:

A constante de Michaelis Km definida como a concentrao para a qual a

velocidade da reaco enzimtica metade de Vmax.
Isto pode verificar-se ao substituir Km = [S] na equao de Michaelis-
Menten.
Se o passo para determinao da velocidade for lento, quando comparado
com a dissociao do substrato (k2 << k-1), ento a constante de Michaelis
Km aproximadamente constante de dissociao do complexo ES,
embora tal situao seja relativamente rara.
A situao mais normal d-se quando k2 > k-1
na por vezes chamada cintica de Briggs-
Haldane. A equao ainda se verifica em
condies mais gerais, como provm da
aproximao ao estado estacionrio.
Durante o perodo inicial, a velocidade de
reao v relativamente constante,
indicando que [ES] tambm
aproximadamente constante (cf. equao 1):

A concentrao de [ES] dada por:

em que a constante de Michaelis Km definida por:

 ([E] a concentrao de enzima livre);
.
Em conjunto, a frmula geral para a
velocidade de reao v vem pela equao de
Michaelis-Menten:

A constante de especificidade kcat / Km uma medida da eficincia de

converso pela enzima do substrato em produto.
Usando a definio da constante de Michaelis Km, a equao escreve-
se na forma:
O grfico de velocidade face a [S] no linear.
Embora a baixas concentraes de substrato se mantenha linear, vai
curvando medida que aumenta a concentrao de substrato.
Antes da chegada dos computadores, que permitem ajustar
regresses no lineares de forma simples, podia chegar a ser
realmente difcil estimar os valores de Km e Vmax nos grficos no
lineares.
Ento vrios pesquisadores concentrassem os seus esforos em
desenvolver mtodos de linearizao da equao de Michaelis-
Menten, dando como resultado o grfico de Lineweaver-Burke
O grfico de Lineweaver-Burk ou representao de duplo recproco a
forma mais comum, e simples,de mostrar os dados da cintica
enzimtica.
Para tal, tomam-se os valores inversos de ambos os lados da equao
de Michaelis-Menten. Como se pode apreciar na figura da direita, o
resultado deste tipo de representao uma linha reta cuja equao
e = mx + c, sendo o ponto de interceco entre a reta e o eixo das
ordenadas equivalente a 1/Vmax, e o ponto de intercepo entre a recta
e o eixo de abcissas equivalente a -1/Km.

O grfico de Lineweaver-Burke ou do duplo recproco mostra o significado dos

pontos de interceco entre a reta e os eixos de ordenadas, e do gradiente da
velocidade.
INIBIO ENZIMTICA

Esquema cintico para inibidores enzimticos reversveis.

E=Enzima;
S=Substrato;
ES=Complexo;
P=Produto;
I=Inibidor
INIBIO ENZIMTICA
Inibidores enzimticos so molculas que reduzem ou eliminam a atividade
das enzimas.
Podem encontrar-se dois tipos:
Reversveis: quando a remoo do inibidor restaura a atividade enzimtica;
classificados como competitivos, acompetitivos, no-competitivos e mistos,
segundo o efeito que produzam nas constantes cinticas Km e Vmax.
Este efeito depender da unio do inibidor enzima E, ao complexo
enzima-substrato ES ou a ambos.

Irreversveis: quando o inibitor inativa de modo permanente a enzima.

Geralmente produzem modificaes covalentes de resduos do centro
cataltico da enzima.
Estas reaces decaem de forma exponencial e so habitualmente
saturveis.
Abaixo dos nveis de saturao, mantm uma cintica de primeira ordem em
relao ao inibidor.