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VIH/SIDA TIPO 1 Y 2, AGENTE ELIOLOGICO Y

EPIDEMIOLOGICO, MARCADORES SEROLOGICOS,


PREVALENCIA EN DONANTES DE SANGRE.

INT. TEC.MED. ESP. EN LA LAB. CLINICO Y ANATOMIA PATOLOGIA-


ROGER SILVA GUEVARA
INTRODUCCION

El SIDA ha desgarrado a numerosas


El síndrome de inmunodeficiencia familias y ha causado un sufrimiento
adquirida (SIDA) es la principal causa incalculable en las regiones más
infecciosa de muerte en adultos en el castigadas por el virus. En tales
mundo. Si no se trata, la enfermedad regiones, entre ellas algunas de las más
causada por el virus de la pobres del mundo, el VIH ha invertido la
inmunodeficiencia humana (VIH) tiene tendencia de aumento de la esperanza
una tasa de letalidad cercana al 100%. de vida registrada en las tres últimas
décadas del siglo XX.

El diagnóstico serológico del virus de la


inmunodeficiencia humana (VIH)
trasciende en importancia a otros
diagnósticos de laboratorio por la
El VIH/SIDA es una seria emergencia gravedad de la enfermedad que este
sanitaria mundial. virus produce, la existencia hoy en día
de tratamientos mucho más eficaces
que los iniciales y el conocimiento que
tienen los médicos y sanitarios sobre
esta infección.
VIH

• El VIH es un virus de la familia de los lentivirus.


• Existen dos tipos de virus VIH-1 y VIH-2, que son
muy similares pero tienen diferencias genéticas.
• Se ha demostrado que son virus altamente
complejos tanto a nivel estructural como en su
evolución.
• Los VIH-1 se clasifican en tres grupos distintos
(M,N,O), el más importante es el grupo M que se
subdivide en 9 subtipos de la A a la K. En América
del Norte, Central y Sudamérica predomina el
grupo B.
• La variabilidad de estos virus se expresa en nuevas
formas recombinantes que pueden generar una
mayor resistencia a la TARV.
CICLO DE REPLICACIÓN DEL VIH

El proceso de entrada se inicia con la interacción entre


la glicoproteína viral gp120 y la molécula de CD4, que
se expresa preferentemente en linfocitos, macrófagos y
células dendríticas. Una vez fusionadas las membranas
viral y celular, se produce la internalización de la
nucleocápside y la decapsidación del genoma vírico. En
este proceso, las proteínas de la cápside se
desensamblan y liberan el genoma viral al citosol. El
proceso de síntesis de ADN a partir del ARN viral o
retrotranscripción es realizado por el complejo
enzimático de la transcriptasa inversa, que efectúa la
síntesis de una doble hebra de ADN a partir del ARN
genómico. A partir del estado de provirus integrado, la
replicación del VIH comienza mediante la transcripción
del genoma viral. A partir de ese momento, la célula
empezará a producir todos los elementos necesarios
(proteínas, enzimas, nuevo material genético,…) que
permitirán el procesamiento y transporte de nuevos
viriones. La maduración final de los viriones,
traducción, ensamblaje y salida de las proteínas
virales se produce durante el proceso de gemación a
través de la membrana celular y mediante la acción de
la proteasa viral.
En 1997, el PRONAHEBAS inicia sus actividades, registrando los Centros de Hemoterapia y
Bancos de Sangre dispersos en el territorio nacional, y estableciendo la obligatoriedad de
tamizar el 100% de las unidades de sangre colectadas, mediante pruebas inmunoserológicas
específicas para Sífilis, Hepatitis B (Antígeno de superficie y Core), Hepatitis C, VIH 1-2, HTLV I
– II (virus linfotrópico de células T humanas) y Enfermedad de Chagas.
Historia natural del VIH y cinética de sus marcadores
MOLECULAR BIOLOGY OF HIV
Plasma HIV RNA

Anti-HIV Ab
p24 antigen

Dias Meses Años después infección VIH

DNA PCR
RNA PCR 8-17 días*
p24 Ag 12-26 días*
Anti-HIV 20-45 días*

* from ANAES Report January 2000


Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos directos
 Cultivo viral
 Antigenemia p24
 Detección de ácidos nucléicos
 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Pruebas de detección rápida
 Pruebas de confirmación
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos directos
 Cultivo viral
 Procedimiento complejo con sensibilidad
muy variable en los distintos estadios de la
infección y en distintos laboratorios.
 Antigenemia p24
 Detección del antígeno p24 del virus.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Detección de material genético del
virus mediante amplificación por PCR
 Carga viral plasmática: cantidad de
ARN del virus por mL de plasma.
 Las técnicas ultrasensibles pueden
llegar a detectar hasta 25-40
copias/mL.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos directos
 Detección de ácidos nucléicos
 Indicaciones de uso:
 Monitorización del tratamiento
antirretroviral
 Predicción de la progresión
 Valoración del riesgo de transmisión
 Diagnóstico de la infección aguda
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos

Detectan la respuesta
inmunitaria (humoral o celular)
del huésped, bien mediante la
detección de anticuerpos
específicos del virus o bien
mediante la investigación de
la inmunidad celular
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 Son las que primero se realizan y sirven
para descartar los resultados
negativos
 Precisan confirmación aquellas que
han sido positivas
 El enzimoinmunoensayo (EIA) es el
método más utilizado como método
de cribado
VIH-1. Diagnóstico indirectos
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado
 EIA 3ª generación detecta todas las
subclases de anticuerpos y no sólo
las IgG  mayor sensibilidad para
reconocer la primoinfección (IgM) y
para el diagnóstico de la infección
pediátrica (IgM e IgA).
 EIA 4ª generación detecta al mismo
tiempo al antígeno p24 y a los Ac
frente al VIH  acortamiento del
período ventana.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos
 Pruebas de detección o cribado

 Emplean antígenos similares a los EIA


 Obtención del resultado entre 1 y 20 minutos
 Algunas pueden hacerse en saliva o en sangre
completa
 Sensibilidad comparable a las técnicas de
cribado, especificidad algo menor
 Inconveniente: LECTURA SUBJETIVA
VIH-1. Diagnóstico indirectos

PRUEBAS
RÁPIDAS
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

PRUEBAS DE DETECCIÓN RÁPIDA

Resultado Resultado Resultado


negativo reactivo indeterminado

Negativo Debe Repetir la


definitivo confirmarse prueba en un
(salvo periodo mediante EIA mes
ventana) o Western Blot
VIH-1. Diagnóstico indirectos

Pruebas de Detección. EIA


Causas de Falsos Positivos

Relativas al Suero
• Congelación-descongelación
• Almacenamiento a tª subóptima
• Aspecto lipídico, turbio o hemolizado
• Contaminación microbiana
• Tratamiento con calor >60ºC
• Error de extracción o identifiación
VIH-1. Diagnóstico indirectos

Pruebas de Detección. EIA


Causas de Falsos Positivos

Relativas a la Presencia de Autoanticuerpos


• Anticuerpos anti-HLA-DR4, DQw3
• Enfermedades reumatoideas
• Polimiositis
• Lupus eritematoso
• Multitrasfundidos
• Trasplantados renales
• Multíparas
VIH-1. Diagnóstico indirectos

Pruebas de Detección. EIA


Causas de Falsos Positivos

Relativas a Otras Condiciones


• Hemodializados
• Sd. Stevens-Johnson
• Administración previa de inmunoglob
• Vacunación previa (gripe, hepatitis B)
• Enf. Hepática alcohólica grave
• Cadáver
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Es la más utilizada
 Es altamente específica
(1/20.000 falsos positivos y
1/250.000 falsos negativos)
 Puede dar tres tipos de
resultados
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Métodos indirectos
 Pruebas de confirmación: Western Blot
 Positivo: presencia de ciertas
bandas
 Negativo: ninguna banda
presenta reacción
 Indeterminado: ni positivo, ni
negativo
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Un resultado indeterminado en el Western Blot del


VIH-1 suele corresponder, por lo menos, a siete
situaciones distintas:
 Infección por el VIH-2.
 Durante el proceso de seroconversión por el VIH-1.
 Enfermedad avanzada.
 Niños nacidos de madres seropositivas.
 Individuos africanos (divergencia genética de las
cepas).
 Reactividad inespecífica o cruzada con otros
anticuerpos.
 Individuos tratados con antirretrovirales con cargas
virales indetectables.
Diagnóstico de laboratorio de la infección por el VIH

 Si aparece un resultado indeterminado en el Western


Blot:
 Interrogar sobre potenciales fuentes de exposición recientes
al VIH
 Repetir EIA y Western Blot a los 3-6 meses
 Realizar pruebas específicas para VIH-2 en suero inicial más
pruebas suplementarias (PCR) para el VIH-1
VIH-1. Diagnóstico indirectos

Pruebas de Confirmación
Line Immune Assay (LIA)

Western Blot (WB)


VIH-1. Diagnóstico indirectos
Características operacionales de las pruebas de
detección de Ac frente al VIH

 Sensibilidad: Es la probabilidad de que para un sujeto


enfermo se obtenga en la prueba un resultado
positivo.
 Especificidad: Es la probabilidad de que para un
sujeto sano se obtenga un resultado negativo.
 Valor predictivo positivo: Es la probabilidad de
padecer la enfermedad si se obtiene un resultado
positivo en el test.
 Valor predictivo negativo: Es la probabilidad de que
un sujeto con un resultado negativo en la prueba esté
realmente sano.
¡GRACIAS
POR SU ATENCIÓN!