METODOS Y TECNICAS

MICROBIOLOGIA I
CLASE 7
 FAMILIA MICROCOCACEAE
• Esta familia presenta 3 géneros:

Genero Micrococus
Genero Staphylococcus
Genero Planococcus.

• Algunos de ellos tiene importancia para el

hombre, pertenecen a la sección XIV
 GENERO STAPHYLOCOCCUS
 CARACTERISTICAS:
• Son GRAM +
• Aerobios y anaerobios facultativos
• Son inmóviles.
• De tamaño 0.5 y 2 micrometro.
• No formadoras de esporas.
• Se agrupan en racimos.
• Forman parte de la flora normal de las mucosas, piel.
• Se presenta en infecciones por intoxicación
alimentaria, heridas, quemaduras, procesos piógenos,
supurativos e inflamatorios.
 CLASIFICACION DEL GENERO
Staphylococcus aureus:
 Especie mas patógena, en muchas infecciones.
 Conocido como estafilococo dorado,
por su pigmento difusible de
color amarillo.
 Presenta 30 antígenos en su
pared celular:
 Polisacárido A: formado por ácidos teicoicos y
polímeros de fosfato de ribitol)
 Proteínas A: potente antígeno de propiedades
antifagocitarias, libera factores quimiotácticos (pus)
Las toxinas mas importantes comprenden al
Hemolisinas:
 Hemolisina alfa: de naturaleza fosfolipídica,
forma hemolisis alrededor de las colonias (en
medio agar sangre o chocolate)
 Hemolisina beta: Compuesta por
esfingomielinasas, produce hemolisis en glóbulos
rojos de carnero a 37º.
 Hemolisina gamma y delta: Interviene en
lesiones y heridas. No produce hemolisis.
o Presenta toxinas:
• Exfoliativa: es una exotoxina proteica causa eritema
en la piel.
• Leucocidinas: afecta a los macrófagos, leucocitos
polimorfonucleares, destruyéndolos y produciendo
resistencia a la bacteria.
• Enterotoxina: responden a las intoxicaciones
alimentarias y cuadros de enterocolitis, ricos en
hidrato de carbono, no presenta fiebre, fiebre y
nauseas y vómitos seguido de diarrea (1 o 2 dias)
• Exotoxinas: capaces de anular la acción jugo gástrico.
• Presenta fermentos ( coagulasas, fibrinolisinas o
estafiloquinasas y penicilinasas).
 La coagulasa: que hace pasar de fibrinógeno a fibrina
produciendo coagulación del plasma sanguíneo,
formando coágulos, produciendo procesos sépticos,
formando microémbolos.
 La Fibrinolisinas: Forman coágulos de fibrina
transformando el plasminógeno en plasmina, efecto
opuesto a la coagulasa.
 Las Penicilinasas: Enzimas de carácter beta-
lactamasa, que rompen el anillo betaláctamico de las
penicilinas.
 S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus

Catalasa + + +

Fermentación de Manitol + - -
(medio Chapman o manitol
salado)
Coagulasa + - -

Proteína A + - -

Sensibilidad novobiomicina + + -

Azucares ( glucosa, sacarosa, + + +

fructuosa, manosa)

INDOL - - -

Gelatinasa + + +

Prueba de Hugh-Leifson (O/F) + + +

Staphylococcus epidermitis:
• Cocos Gram + arreglados en grupos.
• Catalasa +, nucleasa -, coagulasa -, se presenta
en la piel humana y en las mucosas.
 GENERO STREPTOCOCCUS
CARACTERISTICAS:
• Tamaño de 1 y 1.5 micrómetro
• Anaerobios facultativos
• Disposición en pares y sobre todo
en cadena.
• Son saprófiticos del hombre, otros oportunistas y
algunos patógenos.
• Hay características importantes en el diagnostico
y aislamiento de los estreptococos:
Las Hemolisis:
• Gamma hemolítico: Estreptococos no
hemolíticos, no rompe hematíes.

• Alfa hemolíticos: estreptococo

del grupo viridans, produce hemolisis
parcial en torno a la colonia (decoloración parda
verdosa)
• Beta hemolíticos: estreptococo
hemolíticos, destruyen los glóbulos
rojos próximos a la colonia,
produciendo halos de
transparencia en torno a esta.
Las toxinas: ( estreptocócicas o
estreptolisinas)
• La estreptolisinas O: son una holoproteína
extremadamente activa produciendo
hemolisis en medios que contienen sangre.
• La estreptolisina S: son heteroproteínas
exotoxina muy activas de efecto hemolítico
frente al glóbulo rojo pero también frente a
granulocitos y macrófagos
 CARACTERISITCAS ANTIGENICAS:
• Se sitúan en la pared celular y en su capsula.
 En la pared celular: la presencia de peptidoglicano le
confiere el carácter de toxina y se une a la pared del
la célula epitelial que invade.
• La presencia del Carbohidrato C que le confiere la
variación de estreptococos que van desde al A – V:
 Streptococcus Beta hemolíticos: grupos A,B, C, G y F
 Streptococcus Alfa, Beta, Gamma hemolíticos:
Grupo D
 Streptococcus Viridans
 Acción Patógena de cada grupo
especial.
Streptococcus del grupo A.
 Streptococcus pyogenes:
• Se encuentran en la mucosa nasal y faríngea, presenta
antígeno M.
• Presenta toxina eritrogénica: Escarlatina
• Síntomas como dolor de garganta, fiebre, cefaleas y
malestar general y a veces vomito.
 Las Enzimas que forman:
 La estreptoquinasas, activa el plasminógeno para que
este pasa a plasmina, sustancia responsable de la lisis
de fibrina ( ruptura de coágulos)
La desoxiribonucleasa estreptocócica: esta
despolariza al ADN, son antígenas y presenta 4
grupos (A,B,C,D)
• Ejm: estreptodornasa del tipo B: reumatismo
articular agudo.
La Hialuronidasa: Hidroliza el Ac. Hialurónico
del tejido conjuntivo
La Proteinasa estreptocócica: se encarga de la
difusión del estreptococos en el tejido
conectivo de los procesos inflamatorios.
 GRUPO HEMOLISIS LOCALIZACION PATOGENIA HABITAD
A beta piel, mucosas, faringitis, sinusitis, hombre
corazón (válvula endocarditis, meningitis,
mitral daño fiebres reumáticas( no
progresivo), supuradas)
articulaciones glomerulonefritis, sepsis,

B beta Rinofaríngeo, aparato Infecciones pulmonares Hombre

Urogenital e (neo), piel, mucosas,
intestinal tracto respiratorio

C alfa, beta, Rinofaríngea Infecciones faríngeo Hombre y

gamma respiratoria, mamas (vaca) animales
D(Enterococo alfa, beta, Saprófiticos, crecen Infecciones urinarias y Hombre y
gamma medio ricos NaCl, heridas animales
utiliza esculina
D(No ente Alfa, Afectan a los Infecciones urinarias, Hombre y
ro coco) gamma animales otitis, heridas animales
E alfa Rinofaríngea, vías Desconocida leche
genitales e intestino
F alfa Rinofaríngea, vías Afecciones respiratorias Hombre
genitales e intestino benignas
 GRUPO HEMOLISIS LOCALIZACION PATOGENIA HABITAD
G alfa Rinofaríngea, vías Afecciones respiratorias hombre
genitales e intestino benignas (raro)

H Alfa, gamma Rinofaríngeo Afecciones respiratorias Hombre

benignas (raro)

K Alfa, gamma Faringe Afecciones respiratorias hombre

benignas (raro)

L Alfa, gamma Vías urinarias Infecciones de las vías perros

urogenitales
M Alfa Vías urinarias Infecciones de las vías perros
urogenitales
N Gamma Leche No produce efectos Productos
patógenos lácteos
O, P, Q Alfa, gamma Saprofítico Faringe ( O ) Vías respiratorias hombre
superiores no patógeno

S. Alfa, gamma Rinofaringe, alveolos neumonías, afecciones hombre

pneumoniae pulmonares inflamatorias y meningitis
otitis, sinusitis
Streptococcus del grupo B:
• Es saprofítico y a veces oportunista.
• Descomponen el hipurato sodico lo que lo
diferenciad del resto.
Streptococcus del grupo C:
• La esculina lo usa en forma irregular.
• Saprofítico rinofaringe, produce virulencia en
animales, mastitis (vaca) y muermo (caballo)
Streptococcus del grupo D:
• Resistentes a antibióticos
• Enterococos S. faecalis, S. faecium
• No enterococos S. bovis, S. equinus
Streptococcus del grupo E, F, G:
• Puede producir ciertos problemas patógenos,
infecciones urinarias, en heridas.
• Usa la esculina.
Streptococcus del grupo H:
• Utiliza raramente la esculina. Ejm S. sanguis
Streptococcus del grupo K:
• Saprofítico de la faringe.
• Es responsable de reacciones cruzadas con
estreptococo de los grupos D y M. Ejm. S. salivarius.
Streptococcus del grupo M y E:
• Solo animales, patógenos, presenta las 3 hemolisis
 Streptococcus del grupo N:
• Son estreptococo lácticos, se usa en las industrias, no
patógeno para el hombre, muy resistente, fermentador
de la lactosa Ejm: S. lactis , S. cremosi
 Streptococcus del grupo O, P, S:
• No son patógenos para el hombre solo el O en la
faringe.
 Streptococcus del grupo R, S, T:
• No patógenos para el hombre, son recientes y se
desconoce muchos de ellos.
Streptococcus del grupo Alfa hemolíticos o Viridans:
• Son estreptococos no capsulados
• Producen alfa y gamma hemolisis
• Son saprófiticos orofaringeos, mucosa bucal, placa
dental, produciendo infección tipo transitorio.
• En caso de complicación en pacientes que presenta
valvulopatías, interviene en la carie dental.
Streptococcus pneumoniae (neumococo):
• Constituyen un grupo aparte, corresponden a cocos
Gram – . Se presentan como diplococos, tiene capsula.
• Se caracteriza por que no crecen en medios de bilis
esculina. Necesitan medios mas específicos.
• Saprófiticos de la flora normal del aparato respiratorio.
• Interviene en procesos patógenos, por presentar
polisacárido capsular, en la superficie proteína M y
sustancias C. su multiplicación es en los alveolos.
• Proceso agudo con edema, disnea,
fiebre, malestar general, insuficiencia
pulmonar, dolor pulmonar, escalofríos,
tos, esputo sanguinolento.
 PRUEBA BIOQUIMICAS
Hemolisis catalasa glucosa sorbitol coagulasa DNAasa oxidasa Prueba
de
CAMP

BETA Grupo A
Hemolisis - + - - +
total
Grupo A
-
Grupo D
-
Grupo D
-
Grupo C,G,F.
-
Alfa Grupo
Hemolisis - Viridans
parcial

S.
- - - pneumoniae
Hemolisis Inhibición inhibición Bilis Hidrolisis ClNa
bacitracina optoquina esculina Hipurato Na 6.5%
BETA + + V V/ - - Grupo A
Hemolisis
total
+ + V V/ - - Grupo A

- - + + - Grupo D

- - - + + Grupo D

- - - - + Grupo C,G,F.

Alfa - + - - + Grupo
Viridans
Hemolisis
parcial

- + - - + S.
pneumoniae
Toma de Muestra y procedimiento
• Región Rinofaringe con hisopo estéril o muestra de
pus, (exudado faríngeo) se analizara rápidamente (por
sensibilidad a los agentes externos)
• Se realiza un frotis , luego la Tinción Gram (
cocos Gram +) de acuerdo a lo que se sospeche.
• Ejm S. neumoniae, con tinción negativa o con tinta
china visualizar capsula.
• Sembrado en tubo en agar sangre o de carnero al 5% o
agar chocolate condición aerobias o ligeramente
anaerobias o microaerófilas 10% CO2.
• Se considera negativa si al cabo de 5 días no crece.
• Las colonias de aspecto grisáceo, redondo, de bordes
lisos y muy pequeños, donde la zona hemolítica se
observa clara.
 GENERO NEISSERIA
 CARACTERISTICAS:
• Pertenece a la sección X, donde se incluye
a la Familia Neisseriaceae.
• Forma cocos, con tendencia a agruparse como
diplococos.
• Tinción Gram – . Son aerobios estrictos.
• Son del hombre y los animales, algunas son muy
patógenas, pueden ser saprofítica.
• Se aísla de la región faríngea, genital, fosas nasales.
Presenta 4 géneros:
• Neisseria, Branhamella, Acinetobacter, Moraxella
 La Neisseria se divide en 3 grupos:
 Neisseria meningitidis (meningococo)
• Especie patógena, se maneja a temperatura de 35
a37º, son muy estrictas.
• Es un germen parasito obligado.
• Se asocia en pareja, como grano de café, fimbrias
• Colono de las vías respiratorias altas (MENINGITIS)
• Presenta capsula mejora su capacidad invasiva,
presenta cepas de serogrupos del meningococo,
presentan 13 serogrupos, como la A,B,C,D,L,
H,I,K,X,Y,Z,E29,W135.
 CARACTERISTICA MORFOLOGICAS:
• Diplococo Gram negativo de forma arriñonada
• Inmóviles
• Anaerobios facultativos
• Oxidasa y catalasa positivos
• Llamados meningococos
• Intracelulares
• Degrada maltosa y glucosa
• El ABC y W135 son los causantes del 90% de las
enfermedades.
 Neisseria gonorrhoeae (gonococo)
• Especie muy exigente, cultivos enriquecidos
con CO2 (5% al 10%) para potenciar el
crecimiento.
• Crece en temperaturas entre 35º y 37º,
sensible a gérmenes externos. Parasito
obligatorio del hombre, produce la Gonorrea.
(cervicitis, uretritis, conjuntivitis, vaginitis,
salpingitis, obsesos, endometritis, peritonitis)
• Presenta afinidad a la mucosa urogenital
• Posee endotoxinas con gran inactivación a los
anticuerpos.
• Se puede infectar en cualquier mucosa como uretra,
endocérvix, faringe, conjuntiva .
• Se transmite por contacto sexual, en pocas horas se
adhieren ala superficie de la mucosa gracias a las
fimbrias.
• Produce endotoxinas con efecto toxico en la uretra,
cuello del útero y ano, por destrucción de las células
epiteliales y formación de proceso supurativo.
 TOMA DE MUESTRA
N. meningitidis:
• Se toma especialmente LCR (punción lumbar)
• Se puede tomar de sangre y/o exudado faríngeo.
Examen rápido por sensibilidad ext.
• Medio de transporte de Thayer-Martin modificado.
 N. gonorrhoeae:
• De uretra en el hombre, de útero, cuello del útero y
recto de las mujeres y en los homosexuales del ano.
• La toma debe ser temprano en la mañana antes de la
primera micción, para hacer un examen directo.
• Medio de transporte de Thayer-Martin modificado.
 EXAMEN DIRECTO Y DE CULTIVO
N. meningitidis:
• La muestra de LCR es turbio o purulento se divide en 2 o
3 tubos, una de las muestras se centrifuga y sobre el
sedimento se hace el frotis y la tinción Gram, tinción
tinta china y tinción de azul de metileno.
• Del sobrenadante se puede estudiar si hay presencia de
albuminas y globulinas y polisacáridos capsulares.
• Del segundo tubo se siembra en agar sangre, agar
chocolate y agar Mueller-Hinton enriquecido con CO2 (5-
10%) y gran humedad. El tercero se realiza hemocultivo.
 N. gonorrhoeae:
• Se realiza un frotis, para la tinción Gram, caso +
diplococos, asociado a gérmenes contaminantes
( dando a errores).
• Se sembrara en agar sangre, agar chocolate, medio
Thayer-Martin modificado y enriquecido, el medio
NYC, que contiene levadura, hematíes hemolizados y
plasma, antibióticos (vancomicina, anftericina,
trimetrópin).

• NYC: medio New York City

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS:
• Diplococo Gram negativo como grano de café.
• Aerobios
• Oxidasa y catalasa positivos
• Crecimiento a 35 a 37 º de temperatura, con CO2 ( 5
a 10%) humedad entorno a 70%.
T-M
 PRUEBAS BIOQUIMICAS
Cata oxidasa Fermen- Nitrato Glucosa Lactosa Sacarosa Maltosa
lasa tacion a nitrito
N. + + - - + - - -
gonorrhoeae

N. + + - - + - - +
meningitidis

N. subflava + + - - + - +/- +
• Se diferencia del resto por la prueba de la
fermentación de carbohidratos, fermentando
solo la glucosa
 Neisseria saprofitas:
• Habitual en la zona rinofaringe y en el aparato
genital, son poco exigentes, crecen a temperatura
entre 22 y 35º C , resistentes a agentes externos y no
son patógenos para el hombre.
• Entre las especies tenemos:
• N. mucosa, N. Subflava, N. lactamica, N.sicca.
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS:
• Diplococo Gram negativo
• Forma arriñonada
• Catalasa y oxidasa, positiva
• Sensibles a la desecación, temperatura pH, luz
solar, antisépticos y desinfectantes.
• Desarrollo en Thayer-Martin
DIFERENCIAS ENTRE MENINGOCOCO
Y GONOCOCO