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PRODUCTOS BIOTECNOLOGICOS
INDUSTRIALES
Microbiología industrial
I.- MICROBIOLOGIA Y BIOTECNOLOGIA
•Antibióticos:
•Streptomyces, produce la anfotericina B, la kanamicina, la
neomicina, la estreptomicina, las tetraciclinas, entre otras
•Bacillus brevis produce la gramicidina S.
•La insulina, la hormona de crecimiento y el interferón,
pueden ser obtenidos mediante técnicas de ingeniería
genética utilizando la bacteria Escherichia coli.
•Algunas vitaminas como la B12 es producida por
Pseudomonas denitrificans o el Propionibacterium.
•Antibióticos.
•Los B-lactámicos, son
efectivos para tratamiento
de bacterias Gram (-),
•No se utilizan a gran
escala.
•Tratamiento con
detergentes.
•Los detergentes son
anfipáticos.
•Forman micelas con los lípidos
de las membranas,
desestabilizandolas.
•Se clasifican en tres tipos:
•Aniónicos (sales de tetra-
alquil-amonio, pH básico)
•Catiónicos (SDS, pH acido)
•No iónicos (triton-X)
b.2.- Tratamientos físicos.
•Shock osmótico,
congelamiento/descongel
amiento, descompresión,
termólisis,
•Shock osmótico.
•Se produce cuando las
células son sometidas a
medios hipertónicos ó
hipotónicos
•Las células con pared
celular, son mas difíciles
de romper.
Congelamiento/descongelamiento
•Los cristales de hielo que se forman y crecen
durante el congelamiento, si se desarrollan en el
citoplasma, rompen la membrana celular.
•La congelación lenta no funciona tan bien como la
rápida.
b.3.- Métodos enzimáticos.
•Disrupción enzimática.
•Es un método muy preciso pero requiere una clara
comprensión de la estructura de la pared celular de las
células que se quiere lisar.
•La principal limitación del método es el costo
•Ejemplo: enzima Lisozima (muramidasa)
•Autolisis:
•Método en el cual las células inducen su propia
disrupción, por que se producen señales que inducen la
liberación de enzimas que degradan los organelos y
membranas celulares.
•Es un método lento.
•Se inducen mutaciones en la célula, introduciendo genes
que codifican antibióticos o enzimas que degradan las
organelas y membrana celular
Medida de la Eficiencia de la disrupción
•Metodos directos
•Se cuenta las células destruidas y las intactas.
•Técnicas: recuento en cámara, contador electrónico,
recuento en placa, centrifugas analíticas.
•Metodos indirectos.
•Determinación del grado de liberación de un metabolito al
medio externo
V.- PROCESOS DE PURIFICACION
•Pre-tratamiento y
acondicionamiento.
Adsorción,
precipitación.
•Alta resolución:
cromatografía de
intercambio,
cromatografía de
afinidad, cromatografía
de ligando,
cristalización.
•Terminación: filtración
por geles, HPLC.
a.- Métodos de laboratorio. Cromatografía.
•En cromatografía, las
moléculas se distribuyen entre
dos fases distintas, y la
separación tiene relación directa
con su diferencia de afinidad en
cada fase.
•Los compuestos mas afines a
la fase móvil que a la fase
estacionaria recorren una
distancia mayor que los demás.
•Los diversos métodos
cromatográficos difieren con
respecto a la fase móvil (líquido
o gas), la fase estacionaria
(papel, gel o empaque sólido) y
la fuerza que impulsa a la fase
móvil (presión, gravedad o un
campo eléctrico).
Precipitación
•Se concentra el soluto de
una solución convirtiéndolo
en sólido mediante la
acción de un agente
precipitante.
•Ventajas:
•1. Operación que se
adapta fácilmente a gran
escala
•1. Puede realizase en
forma continua
•2. El equipo que se utiliza
es sencillo
•3. Se dispone de diversos
agentes precipitantes y
en muchos casos éstos son
baratos
Precipitación salina (Salting-out)
•En altas concentraciones
salinas (o alta fuerza iónica)
algunos solutos como proteínas
ó polímeros precipitan debido al
aumento de las interacciones
hidrofóbicas entre ellos.
•La concentración salina y el
tipo de sal requerida para la
precipitación varían con el
soluto.
•
•Este fenómeno es empleado
para la separación de
proteínas.
•Mecanismo: La adición de
sales elimina el agua de la
proteína hidratada, dejando las
regiones hidrofóbicas en
libertad de combinarse
intermolecularmente
Ecuación de la precipitación con sales
•Log S = A−m[Sal]
•Donde: S = Solubilidad de la proteína a un valor dado de
concentración salina.
•A = Constante que depende la proteína, del pH y la
temperatura. (toma un valor mínimo en el punto isoeléctrico)
•m = Pendiente de la curva de solubilización por salado.
Ésta es independiente del pH y la temperatura, pero varía
con el tipo de sal y de proteína. (Las sales con aniones
polivalentes tales como sulfatos y fosfatos tienen m mayores
que las sales univalentes, y los cationes polivalentes como el
calcio y el magnesio disminuyen el valor de m)
•Naturaleza de la sal:
•Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series
de Hofmeister):