TRANSFORMACIÓN GENÉTICA

Agrobacterium tumefaciens

Herramientas para el diagnostico de

enfermedades acuícolas
Estudiante: Allisson Rezabala Litaro
 ¿Qué es transformación genética ?

En biología molecular, la transformación es la alteración genética de una célula

resultante de la absorción directa, incorporación y expresión de los material
genético exógeno (ADN exógeno). El ADN exógeno se encuentra en el ambiente
y se introduce a través de la membrana de la célula bacteriana. La transformación
ocurre de forma natural en algunas especies de bacterias, aunque también se
puede efectuar por medios artificiales. Para que ocurra la transformación, la
bacteria debe estar en un estado de competencia, lo que puede ocurrir como
una respuesta limitada en el tiempo a las condiciones ambientales, tales como la
falta de nutrientes y una densidad celular elevada. Una transformación es uno de
los tres procesos por los que el material genético exógeno se puede introducir
en una célula bacteriana.
 ¿ Qu é son l os OG Ms?

Un organismo genéticamente
modificado (OGM) u
organismo vivo modificado
(OVM), comúnmente
denominado transgénico ,es
aquel cuya información
genética ha sido alterada
mediante técnicas de
ingeniería genética, con la
adición de genes (ADN) de
otro organismo.
 Agrobacterium
tumefaciens

Agrobacterium tumefaciens, es una bacteria que

causa en las plantas dicotiledóneas
unos tumores conocidos como "agallas" o
"tumores del cuello", que crecen en la zona
donde se unen la raíz y el tallo (cuello).
Agrobacterium es una proteobacteria alpha de
la familia Rhizobiaceae, la cual también incluye
a las fijadoras de nitrógeno que viven
en simbiosis con las legumbres. A diferencia de
éstas, Agrobacterium es un parásito y causa
grave daño a la planta afectada.
Proceso de infección
La bacteria se guía por sustancias que la planta expulsa fenoles a través de
heridas pequeñas, por las que se introduce. Se ubica entonces en los espacios
intercelulares y desde allí transfiere a las células de la planta un fragmento de
su material genético, un plásmido para transferir un segmento de ADN
conocido como T-DNA que se integra en alguna zona del genoma de la
planta.
Este T-DNA inyectado por el Agrobacterium contiene genes que provocan la
producción de reguladores del crecimiento vegetal, de lo cual resulta el
desarrollo del tumor. El T-DNA también contiene genes codificadores de
enzimas que causan que la planta produzca aminoácidos especializados
llamados opinas. Estas son una fuente de energía específica para A. tumefaciens,
pero no para otros organismos.
 Importancia en la biotecnología

La capacidad de transmisión de ADN por el Agrobacterium

está siendo extensamente explotada en biotecnología, como
medio de insertar genes foráneos dentro de las plantas y
desarrollar organismos modificados genéticamente. Se trata
entonces de un vehículo óptimo para operaciones de
ingeniería genética. Entre los transgénicos creados por este
método están las plantas productoras del insecticida Bt, una
toxina originalmente producida por el Bacillus thurigiensis.
 Proceso para transformación de células de
plantas con Agrobacterium tumefaciens

1) Transformar Agrobacterium con plásmidos conteniendo los genes vir y el T-

DNA con los genes deseados
2) Cultivar Agrobacterium con células de las plantas.
3) Eliminar Agrobacterium con antibióticos (Timentina).
4) Seleccionar plantas transgénicas mediante antibióticos (Kanamycina o
geneticina)
5) Regeneración de celular transgénicas de plantas
 T-DNA

El ADN de transferencia ( ADN -T abreviado ) es el ADN

transferido del plásmido inductor de tumores (Ti) de algunas
especies de bacterias tales como Agrobacterium tumefaciens y
Agrobacterium rhizogenes . El T-ADN se transfiere de la bacteria al
genoma de ADN nuclear de la planta hospedadora . La capacidad
de este plásmido especializado inductor de tumores (Ti) se
atribuye a dos regiones esenciales requeridas para la
transferencia de ADN a la célula huésped. Como el T-ADN está
bordeado por repeticiones de 25 pares de bases en cada
extremo. La transferencia se inicia en el borde derecho y termina
en el borde izquierdo y requiere los genes vir del plásmido Ti.

El T-ADN es de aproximadamente 24.000 pares de bases y

contiene genes que codifican enzimas para sintetizar las opinas y
fitohormonas .
 Región Vir

Los componentes genéticos de

Agrobacterium necesarios para la
infección y transferencia de ADN a la
células vegetales son tres: el T-DNA y la
región de virulencia o región vir, ambos
incluidos en el plásmido Ti, y los genes de
virulencia que se encuentran en el
cromosoma.
 Vir A y Vir G

Vir A y Vir G son expresados constitutivamente y controlan la

activación de otros genes vir.
Vir A es una proteína dimerica transmembranal con un dominio
de kinasa que actúa como receptor de ciertas moléculas fenólicas
que son liberadas por las células heridas/muertas de la planta.
El Vir A activado transfiere su fosfato al factor de transcripción Vir
G que se encuentra soluble en el citoplasma. El Vir G estimula la
transcripción de los otros genes vir
 Vir D y Vir E

Vir D1 y Vir D2 son

responsables del corte del T-
DNA en los bordes.
El Vir D2 se adhiere
covalentemente a la región 5’
de la cadena T-DNA que a su
vez es cubierta con la proteína
Vir E2 que se une
específicamente a cadenas
simples de DNA.
 Vir B y Vir D4 Transferencia del T-DNA

Exportación del T-DNA a El Vir E2 contiene dos secuencias

través de un tipo de de localización nuclear que
interactúan con componentes de
secreción bacterial
la planta llevando el T-DNA hacia
codificado por el operón Vir el núcleo.
B y Vir D4
El Vir D2 contiene una señal de
localización nuclear
 Al go dón B t e n Ch i na

• Las ventajas de la creación de una

planta productora de algodón con
genes de Bt reduce las toneladas
de insecticidas que se aplican, es
decir 15.ooo toneladas menos.
• Menos intoxicaciones en
agricultores
• Mejorar la producción
• Bt presente en el suelo
• Resistente a insectos
(Lepidópteras)