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ELISA

ENZYME-LIKED
INMUNOSORBENT ASSAY
PRUEBA INMUNOADSORBENTE LIGADO A ENZIMAS
La técnica ELISA se basa en la detección de un
antígeno inmovilizado sobre una fase solida mediante
anticuerpos que directa o indirectamente producen una
reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante,
puede ser medido espectrofotométricamente.
Se usa en muchos laboratorios para determinar si un
anticuerpo o antígeno particular está presente en la
muestra de sangre de un paciente. Aunque el
procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un
gran número de variables.
DISPOSITIVOS EMPLEADOS
• actualmente se implementan microplacas de 96 pocillos de
plástico tratado, para aumentar su capacidad de adsorción (en su
superficie) de moléculas, y con fondos de pocillo ópticamente
claros que permitan realizar las medidas de densidad óptica en
instrumentos específicos, espectrofotómetros de lectura de
placas que han recibido el nombre de lectores ELISA.
ELISA DIRECTO
• Las placas ELISA se preparan recubriendo los pocillos con
las soluciones en las que se sospecha se encuentra el
antígeno. Se incuban con anticuerpos marcados. Indican la
presencia de antígeno en la solución analizada.
PASOS PARA REALIZAR LA PRUEBA DE ELISA DIRECTO

• Consta de las siguientes etapas:


• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de antígenos específicos.
Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no
fijados.
• Adición de anticuerpos marcados (“conjugados”) con una enzima; si
los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará
solubilizado. Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no
hayan reaccionado.
• Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima
marcadora. Se puede parar la reacción si se desea.
• Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.
Adsorción de antígenos y anticuerpos (“tapizado”).
• Los métodos empleados son dos fundamentalmente:
• • Dilución del antígeno o anticuerpo en tampón carbonato (pH 9,6) e
incubación posterior durante 3h a 37°C o 16h a 4°C.
• • Tratamiento a 40-50°C en tampón fosfato (PBS) o en agua fisiológica
tamponada pH 7,2-7,4 hasta desecación.

Solución de lavado.
• Solución salina con Tween 20 como agente tensioactivo:
• ClNa ................................................... 8,5gr
• Tween 20 ........................................... 0,5mL
• Agua destilada .................................... 1000mL
LECTURA E INTERPRETACÍON DE RESULTADOS:

• Es posible la automatización de la lectura y por lo tanto su


objetividad. Esta lectura se puede conseguir con un simple
colorímetro o espectrofotómetro de cubeta o con sofisticados
equipos de lectura automática de microplacas.

• Los resultados finales de la lectura colorimétrica se reflejan


numéricamente mediante valores de absorbancia o densidad
óptica que se obtendrán a la longitud de onda más
adecuada para la coloración final alcanzada
APLICACIONES CLÍNICAS
• Enfermedades producidas por parásitos
• Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosoma
• Enfermedades producidas por micoplasmas
• Enfermedades producidas por bacterias
• Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas
• Enfermedades producidas por virus
• Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia felina
• Otras aplicaciones
• Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona)
• Cuantificacíon de inmunoglobulibas (IgG, IgE, IgA)
• Inmunopatología (Ac anti- DNA, Factor reumatoide, Inmunocomplejos circulares)
ARTICULOS
BIBLIOGRAFÍA

• Palacios, L(2012). E.L.I.S.A Enzime Linked Inmuno Sorbent Assay.


http://www.slideshare.net/lexass/presentación-Elisa-13245114

• Cultek (2006). Fundamentos y Tipos de ELISAs.


http://ww.cultek.com/int/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-protocolo.pdf

• Jose, M.(2009). Tecnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno Sorbent Assay)


http://es.scrid.com/doc/15834994/Tecnica-de-ELISA-Enzyme-Linked-Inmuno-
Sorbent-Assay.