Diagnostic biologique de la

tuberculose

Pr .MAHMOUD .M
Plan
 Introduction
 Epidémiologie
 Caractères bactériologiques
 Physiopathologie
 Clinique
 Diagnostic biologique de la tuberculose
 Traitement
 Prophylaxie
 Conclusion
Introduction
 La tuberculose: maladie infectieuse, bactérienne,
contagieuse et nécrosante
 Transmission: voie aérienne
 Agent causal: bactérie du genre Mycobacterium
regroupant: M. tuberculosis
M. africanum
M. bovis
 Problème majeur de santé publique
 Incidence au Maroc: 100nouveaux cas/ 100000
habitants
Introduction
 Tropisme pulmonaire
 Maladie à déclaration obligatoire(MDO)
 Diagnostic biologique: examen direct+++
 Emergence importante avec l’association au V.I.H
 Traitement: curatif+préventif+dépistage dans
l’entourage des patients
 La prévention de la tuberculose repose à la fois sur des
mesures d’hygiène générale individuelles et collectives
et des mesures spécifiques par la vaccination.
Objectifs:

 Connaitre les principaux caractères bactériologiques des

mycobactéries de la tuberculose

 Savoir conduire un diagnostic biologique de la tuberculose

 Connaitre les moyens de prévention de la tuberculose

Epidémiologie
1/ Agent microbien :

• Mycobacterium tuberculosis ou bacille de Koch : >95 %

des cas.
• Autres étiologies : bovis , africanum.
• Bactéries non colorables par le GRAM .
• Colorable par la technique de Ziehl Neelsen.
• BAAR: bacilles acido-alcoolo résistants.
• Bactéries à croissance difficile : nécessité des milieux
spécifiques tel que Lowenstein Jensen.
• Croissance lente (2-8 semaines)
Epidémiologie
2/Réservoir :

• Homme: M. tuberculosis , africanum

• Animal (bétails): M.bovis

• Autres sources: contamination au labo+++

Animaux malades
Epidémiologie
3/Transmission :

• Voie aérienne +++: toux, éternuement avec un malade

bacillifère

• Laboratoire : manipulation de cultures positives.

• Voie digestive : aliments contaminés non stérilisés.

• Voie cutanéo-muqueuse : exceptionnelle.

Epidémiologie
4/ Réceptivité

 Pas d’immunité naturelle

 Tout individu vierge fait une primo-infection au contact

avec le BK

 Evolution variable selon l’état immunitaire

 Epidémiologie
5/Facteurs favorisants :

 Facteurs socio-économiques: promiscuité, défaut

d’ensoleillement, insalubrité
 Etats immunitaires: Immunodépression ( VIH ; Cancer ;
Diabète ; Insuffisance rénale )
 Facteurs nutritionnels et toxiques: dénutrition, alcoolisme,
tabac, toxicomanie

 Facteurs physiologiques: Personnes âgées , grossesses

Epidémiologie
7/ Aspects épidémiologiques

 Tuberculose: endémique dans le monde entier

 Prévalence et incidence de la tuberculose sont très

élevées dans les PEVD

 Maroc: très touché par la tuberculose

Epidémiologie

 Chaque seconde une nouvelle personne est infectée

dans le monde

 Chaque année :
 En 2014, 9.6 millions de nouveaux cas de
tuberculose à travers le monde dont 1.4 million lié
au VIH.

 1,5 Mde décès soit 4500décès/jour

 480000 personnes ont développé une tuberculose
multirésistante
Epidémiologie
 Au Maroc :

 Incidence : 89 nouveaux cas / 100 000 Habitants

 En 2015; 28 955 nouveaux cas par an
 1 681cas de rechutes
 6 régions les plus touchées : Casablanca , Tanger ,
Gharb , Fès , Rabat , Doukkala.
 1.7 % des patients tuberculeux sont VIH positifs.
Caractères bactériologiques
A/ Classification

 Ordre: Actinomycétales

 Famille: Mycobacteriacceae

 Genre: Mycobacterium
Complexe tuberculosis: M.tuberculosis, M.bovis, M.
africanum
Mycobacterium leprae
Mycobacteries atypiques
Caractères morphologiques
B/ Caractères structuraux :

 Enveloppe riche en lipides BAAR

 Se compose schématiquement du cytoplasme vers la

périphérie
 Membrane plasmique
 Squelette pariétale
 Couche externe
Caractères morphologiques
C/ Caractères morphologiques :

 Bacille fin légèrement incurvé ou rectiligne.

 2-5 µ de long et 0,3 µ de large ,bout arrondi, immobile
 Non capsulé , non sporulé, isolé ou groupé en amas.
 Ne se colore pas à la coloration de GRAM.
 BAAR : bacille acido-alcoolo résistant.( pas de
décoloration liée à la grande teneur en lipide de la
paroi )
Caractères morphologiques
D/ Caractères culturaux :

 Germes aérobies strictes

 Microaérophiles

 Croissance lente
 M.tuberculosis : 3 à 4 semaines
 M.bovis + africanum : 45 à 60 jours

 Température optimale de croissance : 35 à 37°.

 Ph optimum : 6.8 – 7
Caractères morphologiques
• Les milieux de culture :

o Milieux solides à l’œuf coagulé :

Milieu de Lowenstein Jensen
Milieu de Coletsos

o Milieu solides gélosés :

Milieu de Middlebrook et cohn

o Milieu liquides :
Milieu de Sauton
Milieu de Dubos
Caractères morphologiques
E/ Caractères biochimiques :

 Production d’acide nicotinique : Niacine test

 Réduction des nitrates en nitrites

 Catalase
Physiopathologie
Clinique
1/ Primo infection tuberculeuse

• Dans 90 à 95% des cas asymptomatique

• Sinon : fièvre , A.E.G , Sueurs nocturnes , toux ,

Hémoptysies

• Radiologie : opacités parenchymateuses, ADP

médiastinales ou interbronchiques.
Clinique
2/ La tuberculose de réactivation

 Signes cliniques en fonction de la localisation :

 Tuberculose pulmonaire : Toux Hémoptysie
 Tuberculose ganglionnaire : Adénopathie
 Tuberculose osseuse : Mal de Pot , compression
médullaire
 Tuberculose rénale : Hématurie
 Tuberculose génitale : Stérilité
 Tuberculose hématopoïétique : SMG , HMG , ADP
Diagnostic biologique de la
tuberculose
A/ Prélèvements
 Temps capital
 Prélèvement répété 3jours de suite
 Avant toute antibiothérapie
 Pot propre

 Pulmonaire :
o Crachat , expectoration profondes.
Matin au réveil , après rinçage, effort de toux :
3 fois car émission discontinues
Diagnostic biologique
Tubage gastrique :

 Il consiste à prélever directement dans l’estomac les

sécrétions bronchiques qui ont été dégluties pendant le
sommeil.

 Cette épreuve sera réalisé chez un sujet alité depuis la

veille au soir

 Maintenu à jeun

 Le plus tôt possible après le réveil

Diagnostic biologique
Génito-urinaire :

• Urines : totalité des urines

• Sperme

Les autres formes de tuberculose :

• Ponction : pleurale , articulaire , abcès ,

méningite.
• Biopsie : osseuse , vertébrale , hépatique .
Diagnostic biologique
B / Traitement des prélèvements :

 Précaution de protection
 Locaux bien aérés
 Gants , masques , lunettes
 Hottes de sécurité microbiologique
 Centrifugeuse dédié à la recherche de BK
 Matériel stérilisable par autoclavage.
Diagnostic biologique
 Prélèvements stériles :
 LCR , liquide d’épanchement.
 Inoculés directement dans les milieux de culture sans
traitement préalable.

 Prélèvements contaminés :
 Crachats ( flore commensale abondante )
 Fluidifier et décontaminer les prélèvements (soude ,
ac sulfurique)
 La fluidification par de la N Acetyl cysteine permet
de liquéfier les produits pathologiques et libérer les
mycobactéries.
Diagnostic biologique
C- Examen microscopique :

• Temps capital+++
• Réalisé sur les frottis du produit pathologique.
• Coloration de Ziehl Nelsen à la fuschine phéniquée
M.O (x100)
• Coloration à l’auramine MIF (x40)
Diagnostic biologique
 Coloration à l’auramine:
Technique: -coloration des bacilles par une solution
d’auramine O phéniquée pendant 15min
-Rinçage avec de l’eau distillée
-décoloration pendant 5min par mélange
acide-alcool
-une contre coloration avec une solution de
rouge de thiazine(1min)
- rinçage à l’eau distillée
- lames séchées recouvertes de lamelle et
observées à l’aide d’un microscope à fluorescence x25
- les bacilles apparaissent fluorescent sur
fond rouge.
Diagnostic biologique
 Coloration de Ziehl Neelson:
 Technique: -coloration par une solution alcoolique de
fushine phéniquée x 10min
- Décoloration 3min avec un mélange
acide-alcool
- rinçage à l’eau distillée
-contre coloration 3 min par une solution
aqueuse de bleu de méthylène à 3%
-rinçage et séchage
- lecture en MO x 100 à immersion
- Les BAAR apparaissent rouges sur fond
bleu. Ce sont des bacilles fins légèrement incurvé ou
rectiligne de 0.5 à 2 µ.
Diagnostic biologique
• La positivité de l’examen direct est exprimé en
nombre de BAAR / champs .

• 1° étape du diagnostic

• Dans la tuberculose pulmonaire elle signe une

grande contagiosité.

• Informer le clinicien du résultat.

Diagnostic biologique
 Les BAAR sont dénombrés par champ microscopique:

 < 1 bacille / 100 champ : négatif

 De 1 à 9 / 100 champs : suspect à confirmer
 De 10 à 99 / 100 champs : ++
 De 1 à 9 / champ : +++
 De 10 à 99 /champs : ++++
 Plus de 100 bacilles / champ : ++++++
Diagnostic biologique
D/ Culture :

• Moyen le plus sur pour établir le diagnostic des

mycobactéries.

• Milieux de culture de référence: Lowenstein Jensen

Diagnostic biologique
1/ Culture classique en milieu solide
 Le milieu de L.J. est le milieu de référence
recommandé par l’OMS
 Ensemencement sur 4 tubes : 2LJ ; Coletsos, LJ
enrichi
 Ensemensement du culot de centrifugation
 Les tubes sont incubés en position inclinées non
vissés pour permettre l’évaporation.
 Lecture 1 fois / semaine pendant 8 semaines .
 Après ensemencement des milieux de culture les
cultures sont gardées 2 mois à 37° .
Diagnostic biologique
2/ Culture en milieu liquide :
 Système MB/BACTEC :
o Utilise une méthode de détection évaluant
l’évolution de la croissance bactérienne par la
quantité de CO2 qu’elle produit.
o Le système de lecture possède un équipement
informatique qui déclenche un signal de positivité.
 La respirométrie radiométrique Bactec:
o Apprécie la croissance bactérienne en mesurant la
quantité de CO2 marqué au carbone 14 libéré par
l’acide palmitique présent dans le milieu de
culture.
o Délai : 7 à 10 jours.
Diagnostic biologique
 Aspects des colonies

- Milieu à l’œuf: colonies de grande taille rugueuses en

chou-fleur, de teinte crème ou chamois ( Mycobacterium
tuberculosis), dysgoniques pour M.bovis et africanum

- Milieux liquides: culture en voile avec dépôt au fond

du tube
Diagnostic biologique
E/ Identification des BAAR

 Délai de croissance
 Aspect des colonies à la culture et confirmation par la
coloration de Ziehl Neelsen: couleur beige chamois, en
chou-fleur, rugueuses pour M.tuberculosis
 Tests biochimiques et résistance: Niacine test, catalase,
nitrate réductase, uréase, l’hydrazide de l’acide
thiophène 2 carboxylique
Caractères d’identification des mycobactéries de la
tuberculose
Diagnostic biologique
F/ Techniques de biologie moléculaire :

 PCR : permet la détection des mycobactéries en 24h

 Lyse des bactéries

 Extrait de l’ADN
 Amplification de l’ADN
 Révélation avec des sondes marquées.

• Détection des résistances aux anti-bacillaires

Diagnostic biologique
G/ Techniques histologiques

 L’examen anatomopathologique: présence de

follicules épithélioides et giganto-cellulaires avec
nécrose caséeuse
Diagnostic biologique
H/ Sérologie :

• Pas d’intérêt car réaction croisées avec les

mycobactéries atypiques.
Diagnostic biologique
I/ L’antibacillogramme:
 La méthode de proportion est la méthode de référence.
 Elle consiste à déterminer la proportion de mutants
résistants à un antibiotique donné.
 Rapport entre dénombrement de bactéries contenues
sur un inoculum avec un antibiotique donné et
bactéries qui ont poussées sur un milieu ne contenant
pas d’antibiotique = proportion critique
Diagnostic biologique
 Si % supérieure à la proportion critiqueRésistance .

 Si % inférieure à la proportion critique  Sensible .

 Environ 40 jours pour un antibiogramme.

 Mesure le % de bactéries résistantes pour chaque atb testé.

 Ce % est comparé à un nombre appelé proportion critrique

qui diffère selon les atb.
Diagnostic biologique
 Les ATB testés: Rifampicine, Isoniazide, Ethambutol,
Streptomycine, Pyrazinamide

 La résistance aux anti bacillaires peut être:

 Primaire
 Secondaire
 Multirésistance
Traitement
1/ Principes généraux

 Poly chimiothérapie: au moins 3 médicaments

 Prise unique quotidienne, le matin à jeun
 Régularité des prises et observance
 Traitement prolongé d’au moins 6 mois
Traitement
2/ Régimes thérapeutiques

 2SRHZ/4RH nouveaux cas

 2SRHZE/1RHZE/5RHE: échec et rechute
 Méningite tuberculeuse: 4 antibacillaires x 12 mois
 Corticoïdes indiqués: péricardite ou atteinte méningée
sévère
Prophylaxie
1/Dépistage radiologique :

 Embauche ;Etudiants ; Techniciens labo ; Médecin

2/Chimioprophylaxie :

 Isoniazide pour les sujets contacts .

3/Contrôle de la tuberculose bovine :

 Pasteurisation du lait
Prophylaxie
4/ Vaccination BCG :

 Vaccin vivant atténué

 Bacille utilisé : M. bovis atténué par plusieurs
passages successif en milieu de culture

5/ Mesures de précaution au laboratoire :

 Hottes aspirantes
 Pipetage à la bouche proscrit
 Contrôle du personnel tous les ans .
Conclusion
 Maladie infectieuse endémique due au BK .

 L’examen direct ( Ziehl et auramine ) permet

d’instaurer un traitement antibacillaire rapidement
,avant les résultats de la culture.

 La culture reste la méthode de référence.

 Biologie moléculaire : Amélioration des délais du

diagnostic .

 Le traitement est basé sur l’association d’anti bacillaire

.