UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN

MARTIN-TARAPOTO

METABOLISMO Y
NUTRICION BACTERIANA

M.Sc. Astriht Ruiz Ríos

Docente principal
Metabolismo Bacteriano
Energía

• La transformación de la energía, generación

de ATP, puede ser mediante 3 vías principales:
1. La respiración, que tiene lugar en presencia de
O2 y da como resultado
CO2 y H2O, es un proceso de oxidación.
2. La fermentación: en condiciones sin oxigeno.
3. La fotosíntesis: que obtiene la energía por
absorción de luz visible a través de la clorofila.
Nutrición Microbiana

• Las células están compuestas de:

1. Macromoléculas: polisacáridos, lípidos,
ácidos nucleicos y proteínas (Las
proteínas son las mas abundantes).
2. Agua.
El agua es el solvente ideal para los
organismos vivos debido a su polaridad
y a su cohesión
Nutrición

• Los microorganismos requieren para su

desarrollo y actividad celular compuestos
químicos: nutrientes.
• Dependiendo de las cantidades que se requieran
se habla de macronutrientes y micronutrientes.
• Existen diferencias en cuanto a los
requerimientos nutricionales de cada
microorganismo.
 1.- Requerimientos nutricionales
• Macronutrientes (g/L o mg/L)

1. Carbono: forma parte de aminoácidos, hidratos de carbono y

lípidos.
a) Utilizan compuestos orgánicos como fuente de carbono:
heterótrofos
b) Utilizan CO2 como fuente de carbono: autótrofos

2. Nitrógeno: forma parte de aminoácidos,

bases púricas y pirimidínicas; algunos
hidratos de carbono y lípidos.
a) Compuestos orgánicos: aminoácidos
b) Compuestos inorgánicos: NH4+ , NO3-
c) Fijación de nitrógeno atmosférico
3. Fósforo: forma parte de ácidos nucleicos, fosfolípidos,
cofactores, algunas proteínas y LPS.
a) Compuestos inorgánicos: fosfatos

4. Azufre: forma parte de aminoácidos (cis, met); coenzimas

(biotina, CoA).
a) Compuestos orgánicos: aminoácidos
b) Compuestos inorgánicos: Sulfatos (SO4 2-)

5. Otros macronutrientes:
• K+: cofactor y activadores de enzimas
• Ca2+: termorresistencia esporas, cofactor de
enzimas
• Mg2+: cofactor de enzimas, ribosomas
• Na+: Estabilidad de halófilos
• Fe2+ y Fe3+: citocromos, proteínas, cofactores.
• Micronutrientes (g/L)

a) Cobalto: síntesis de la vitamina B12

b) Cinc: papel estructural en muchas enzimas
(ADN y ARN polimerasas, proteínas de unión
a ADN…)
c) Molibdeno: necesario para la actividad de
algunas enzimas (Flavoproteínas,
nitrogenasa, nitratorreductasa, sulfito
oxidasa…)
d) Manganeso: activador de muchas enzimas
e) Cobre: grupo prostético de enzimas
respiratorias
•Factores de crecimiento

a) Aminoácidos
b) Bases púricas y pirimidínicas
c) Vitaminas:
- p-aminobenzoico. Ácido fólico. Ácidos nucleicos
- Biotina (B8): Ácidos grasos
- Niacina: NAD
- Riboflavina: FAD y FMN
- Piridoxina (B6): transformaciones de aa
- Tiamina (B1)
- Cobalamina (B12): Síntesis de desoxirribosa
Agua
• Es el principal componente del
protoplasma bacteriano; el medio
donde suceden las reacciones
químicas y sus productos.
Medios de cultivo

• Satisfacen las necesidades

nutritivas de los microorganismos
y pueden ser químicamente
definidos o complejos.

Para el cultivo correcto de una

bacteria es necesario conocer
sus exigencias nutritivas.
Tipos Nutricionales
Tipo Fuente de Fuente de Ejemplos
energía carbono
Fotoautotrofas Luz CO2 Algas y
cianobacterias
Fotoheterotrofas Luz Compuestos Algas y bacterias
orgánicos fotosintéticas
Quimioautotrofas o Química Compuesto Pocas bacterias
Litotrofas inorgánicos: H2,
NH3, NO2, H2S,
CO2
Quimioheterotrofas o Química Compuesto La mayoría de
Heterotrofas orgánicos: glucosa bacterias
Enzimas

• Catalizadores biológicos de naturaleza proteica.

• Su accionar es esencial en el metabolismo
bacteriano.
• Actúan de manera especifica a través de un sitio
activo, produciendo un efecto catalítico sobre
las moléculas del sustrato, convirtiéndola en un
producto especifico.
• Funcionan en forma secuencial: sistema
multienzimatico.
Fermentaciones

• Una fermentación en una reacción de

oxidación – reducción interna equilibrada
en la que algunos átomos de la fuente de
energía (donador de electrones) se
reducen, mientras otros se oxidan y la
energía se produce por fosforilación a
nivel de sustrato.
• Una ruta bioquimica muy usada para la
fermentation de la glucosa es la
glucolisis, tambien denominada via de
Embden-Meyerhof .
Oxigeno
Los microorganismos son muy variables en cuanto
a la necesidad del oxigeno.
Se dividen dependiendo del efecto del oxigeno:

1.Aerobios estrictos: los que requieren oxigeno

como aceptor terminal de electrones, no proliferan
en ausencia de O2. ej. Mycobacterium bovis.

2.Microaerofilos: utilizan O2 a niveles muy bajos.

Un 12%. No proliferen en la superficie de un
medio sólido. Ej. Haemophillus suis
Oxigeno

3. Anaerobios estrictos: las que no

emplean oxigeno para su metabolismo,
sino qe obtienen su energía de
reacciones fermentativas. Ej. Clostridium
tetani
4. Anaerobios aerotolerantes: pueden
crecer en presencia o ausencia de
oxigeno, pero la energía la obtienen por
fermentación. Ej. Bacterias acidolacticas.
Oxigeno

5. Anaerobios facultativos:
son bacterias que proliferan mediante
procesos oxidativos, utilizando oxigeno
como aceptor terminal de electrones, o
en anaerobiosis, empleando reacciones
de fermentación para obtener energía.
Ej. Streptococcus, E. coli
Condiciones necesarias para el desarrollo microbiano:

Oxígeno
Temperatura

• La temperatura es un factor ambiental

importante en el control de crecimiento
microbiano.
• Los M.O pueden agruparse según los
márgenes de temperatura que requieren.
• Se distinguen 4 grupos:
1. Psicrofilos 2. Mesófilos

3. Termofilos 4. Hipertermofilos.
Clases de M.O. según la
temperatura

Tipo Rango de Temperatura M.O

Temperatura Optima

Psicrofilo 0 - 20 15 Algas

Mesofilo 20 - 40 38 E. coli

Termofilo 40 - 70 60 Bacillus
stearothermophi
llus
Hipertermo 90 - 115 106 Thermus
acuaticus
filos
pH

• La acidez o alcalinidad de un medio tiene

una gran importancia sobre el crecimiento
microbiano. La mayoría de MO. Crecen a
un pH entre 6 y 8.
• El pH intracelular debe permanecer
próximo a la neutralidad.
EFECTO DEL pH SOBRE LOS MICROORGANISMOS

•Acidófilos:intervalos de 2-5
Acidófilas obligadas Thiobacillus y Archaea que incluyen
Sulfolobus y Thermoplasma

•Alcalófilos intervalos de 10-11

género Bacillus

•Neutrófilos intervalos de 6-8

 CULTIVO Y CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS

Medios de cultivo: composición y preparación

Medios de cultivo químicamente definidos

Medios complejos (no definidos)
Tipos de medios de cultivo
El medio de cultivo químicamente definido se prepara añadiendo cantidades precisas de
compuestos orgánicos e inorgánicos puros a un volumen conocido de agua destilada.
Se conoce su composición exacta.

Medio definido para Escherichia coli

K2HPO4 7g
KH2PO4 2g
(NH4)2SO4 1g
MgSO4 0,1 g
CaCl2 0,02 g
Glucosa 4-10 g
Elementos traza 2-10 g
(Fe, Co, Mn, Zn,
Cu, Ni, Mo)
Agua destilada 1000 ml
pH7
 Medio definido para Leuconostoc mesenteroides

- K2HPO4 0,6 g
- KH2PO4 0,6 g
- NH4Cl 3g
- MgSO4 0,1 g
- CaCl2 0,02 g
- Glucosa 25 g
- Acetáto sódico 20 g

- Aminoácidos (ala, arg, asn asp,cis, glu, gln, gly, his, iso, leu, lis, met, phe, pro, ser, thr,
trp, tyr, val). 100-200 g de cada uno
- Purinas y pirimidinas (adenina, guanina, uracilo, xantina). 10 mg de cada una

-Vitaminas (biotina, folato, ácido nicotínico, piridoxal, piridoxamina, piridoxina,

riboflavina, tiamina, pantotenato, ácido p-aminobenzoico) 0,01-1 mg de cada una

Elementos traza 2-10 g (Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo)

Agua destilada 1000 ml

pH7
Para elaborar el medio complejo se utilizan hidrolizados de proteínas y
otras sustancias muy nutritivas pero no definidas químicamente que se
pesan y se añaden a un volumen conocido de agua.
No se conoce la composición exacta del medio complejo.

Medio complejo
para Escherichia coli
y Leuconostoc mesenteroides

Glucosa 15 g
Extracto de levadura 5g
Peptona 5g
KH2PO4 2g
Agua destilada 1000 ml
pH7
 Tipos de medios de cultivo

Medios sólidos y líquidos

Los medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les
añade agar (1.5%) como agente gelificante.
El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-
anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.
El agar se funde a 80-90ºC y se puede enfriar hasta una temperatura de
40 a 42 ºC sin endurecerse.
La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundido
se vierte sobre placas Petri y se deja solidificar antes de su uso.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y
formar masas aisladas visibles llamadas colonias.
Medios de cultivo: sólidos y líquidos/mínimos y complejos

Microbiología Alimentaria 07-08 29

Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos
microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivo

Medios enriquecidos
Medios generales a los que se añaden nutrientes especiales para
mantener el crecimiento de microorganismos heterótrofos exigentes.
Ej., el agar sangre

Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar
Levine (eosina-azul de metileno) y Agar MacConkey se emplean para
detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que
inhiben el crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar
algunas bacterias de forma específica. Ej., el agar celulosa se usa para
aislar bacterias que digieren la celulosa.
Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso
permiten una identificación tentativa de los microorganismos según sus
características biológicas.
El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene
lactosa y colorante rojo neutro, las colonias fermentadoras de lactosa
(Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen
fácilmente de las colonias no fermentadoras.
Mezcla de microorganismos

Microbiología Alimentaria 07-08 32

Medios de cultivo: selectivos y diferenciales

Microbiología Alimentaria 07-08 33

Crecimiento de poblaciones

• Es el aumento en el numero de celulas de

una poblacion.
• Velocidad de crecimiento es el cambio en
el numero de celulas o en la masa
celular, experimentado por unidad de
tiempo.
• Durante el ciclo de division celular, todos
los componentes se duplican.
• Tiempo de generacion: es el tiempo que
se requiere para que la poblacion se
duplique.
• Los tiempos de generacion varian
ampliamente entre las diferentes
bacterias.
Ej. 1 a 3 horas, 10 min, o varios dias.
Curva de crecimiento
bacteriano

• Cultivo puro de bacterias en un medio

liquido.
Fase 1: de adaptación o
latencia.

El crecimiento de la población no inicia

inmediatamente, sino después de cierto
periodo de tiempo, el cual puede ser
breve o largo, dependiendo de varios
factores.
Fase 2: de crecimiento
exponencial o logarítmico

Es la consecuencia del hecho de que

cada celula se divide en dos. Las
bacterias se encuentran en un estado
optimo.

Su velocidad esta influenciada por

temperatura, nutrientes.
Fase 3: estacionaria.

El medio de cultivo no se renueva,

comienzan a acumularse metabolitos
tóxicos, se modifica el pH, los nutrientes
se agotan, la velocidad de multiplicacion
se retrasa y hay un equilibrio entre
bacterias vivas y muertas.
Fase 4: de Muerte.

Cuando continua el crecimiento en el medio de

cultivo viejo se produce una inversión
numérica con respecto a la fase exponencial.
En este periodo son mas las bacterias muertas
que las vivas, hasta que se termina con la
muerte de todas.
Si son bacterias con capacidad de esporular,
se produce la esporulación en esta fase.
Cultivo continuo

• El quimiostato es un aparato que se utiliza

para obtener un cultivo continuo en medio
renovado, permite mantener poblaciones
de células en crecimiento exponencial por
largos periodos de tiempo.
Sistemas abiertos o continuos: el quimiostato

D=F/V
Lavado del cultivo

Microbiología Alimentaria 07-08 42

 Medidas directas del
crecimiento bacteriano.

1. Recuento de células totales.

- Microscopia -
2. Recuento de celulas viables.
- Recuento de colonias -
Medidas indirectas del
crecimiento bacteriano

• Turbidez. Es un método muy rápido y útil

de medir el crecimiento bacteriano.
- fotómetro -
- espectrofotómetro -
 CURVA DE CRECIMIENTO
BACTERIANO
FASES
1. Latencia
2. Logarítmica o exponencial
3. Estacionaria
4. Muerte o declive
Log nº células viables

Pocas células

Tiempo Células vivas

Células muertas
 Equilibrio
Log nº de bacterias
Crecimiento

Muerte

Reposo

Tiempo
 ¡¡¡ 21 min !!!

Microbiología Alimentaria 07-08 47

1: alfa-hemólisis

Colonias aisladas

alfa-hemólisis

Cultivo confluente

2: beta-hemólisis

Colonias aisladas

beta-hemólisis