UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTIN

FACULTAD DE INGENIERIA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA METALURGICA

Metalografía y Microscopia Electrónica

FUNDAMENTOS DE MICROSCOPIA

2 Ing. Juan Manuel Jara G.

 Microscopia
Es el estudio detallado de los componentes
de materiales (minerales, metales y
aleaciones), por el tamaño que poseen,
requiere el uso de microscopio
Metalográficos y Electrónicos que
permitan ampliar muchas veces más la
imagen de las estructuras que los
constituyen para su estudio.
Fundamento de la microscopía:
La microscopía es la técnica que
permite observar objetos con un
microscopio (simple o compuesto) y
obtener una imagen aumentada del
mismo y para ello es necesario tener
en cuenta estos tres elementos:
 El objeto a estudiar (preparación
de muestra)
 Una fuente de iluminación.
 Un sistema óptico
Trans-iluminación:
La trans-iluminación ha sido indudablemente el primer
método de iluminación en la larga historia de la microscopía.
El rayo electromagnético (luz visible por ejemplo) debe
atravesar el objeto, en éste caso un corte histológico.
Como condiciones fundamentales para ser observados al
microscopio compuesto, los preparados biológicos deben ser
muy delgados y transparentes. Deben ser rebanados con
instrumentos especializados (micrótomos) que permiten
obtener cortes cuyo espesor debe estar en el orden de las
micras. Rutinariamente el espesor del corte puede oscilar en
un rango que va de 1 a 5µm, pero su grosor dependerá del
tipo de células y tejidos.

Corte histológico: es una sección o rodaja fina de un material y generalmente coloreada con
alguna tinción específica para resaltar una parte de la estructura.
La flecha amarilla representa el haz de luz incidente sobre la muestra, que en la
transiluminación atraviesa la misma; mientras que en la epi-iluminación el rayo
incide de manera oblicua y en este caso son los rayos reflejados los que se capturan
para formar la imagen.
Aumento y resolución
Los términos aumento y resolución
deben ser bien conocidos por todo
usuario del microscopio. El
mecanismo mediante el cual se
produce este fenómeno ha sido
estudiado por siglos y se explica
mediante leyes de la física.
Considerar únicamente el aumento
no es suficiente para sacar el mejor
partido del microscopio, pues otro
factor, la resolución, determina lo
que se verá.
Aumento
El poder de aumento de una lente está determinado por el
grado de curvatura de su superficie y la distancia focal. En las
lentes convexas mientras mayor sea la curvatura, menor será
la distancia focal y mayor será el aumento. Se ha enunciado
anteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos
etapas y puesto que una sola lente no es suficiente se deben
colocar varias lentes una detrás de la otra, potenciando de
esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes,
cercano al objeto en estudio, se denomina objetivo y el
segundo juego, cercano al ojo del observador se denomina
ocular. Cada sistema de lentes es capaz de producir una
imagen aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, así
que 10x significa que la imagen está aumentada 10 veces.
AUMENTO TOTAL: Aumento del objetivo x Aumento del ocular
Resolución
Es la capacidad que tiene un sistema óptico de aislar dos puntos que se
encuentran muy próximos entre sí, de manera que se puedan ver
individualizados uno del otro. La riqueza de detalles que puede ser
observada al microscopio depende de la habilidad de este para hacer
que los puntos del objeto que están muy cercanos aparezcan en la
imagen como puntos separados.
Mientras más corta sea la distancia entre esos puntos del objeto, más
finos serán los detalles.
La distancia entre esos dos puntos se conoce como Límite de
Resolución, el cual es también referido como el Poder de Resolución y
puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del
microscopio.
Factores que determinan el poder de resolución
Al observar pequeños objetos al
microscopio, la luz incidente
proveniente de ellos es desviada
de su trayectoria inicial y
mientras más pequeños sean,
mayor será la desviación. Las
lentes del objetivo deben
recolectar como sea posible la
mayor cantidad de rayos
desviados para formar una
imagen nítida; a más rayos
capturados, mayor resolución
(1) Muestra que es atravesado por un haz de rayos luminosos (2) los cuales son
captados por el objetivo (3). Al formarse el cono de luz proveniente del objeto se
determina un ángulo, también llamado de apertura, donde a representa la mitad del
mismo.
Apertura numérica
A partir de las observaciones precedentes, nace la definición de
(AN), cifra a considerar para determinar el rendimiento de una
lente objetivo :

AN = n x sen α
Donde α = la mitad del ángulo de apertura del objetivo.
n = el índice de refracción del medio que se encuentra entre el
objeto y el objetivo.
(Para el aire n = 1 y para el vidrio o aceite n = 1.51)
Incrementar la resolución

Otra manera de incrementar la

resolución es creando, del lado
de la fuente luminosa, un cono
amplio con un ángulo mayor.
Para ello se emplea otro juego
de lentes denominado
condensador el cual posee la
misma apertura numérica que
el objetivo.

El objeto (1) es iluminado con un rayo de luz (2) que formará un cono luminoso
frente al objetivo. Se colocó otra lente (4) que recoge y condensa la luz antes que
ilumine al objeto.
Líquido entre la lámina
Para aumentar aún más la
resolución, además de agregar un
condensador, otra posibilidad es
colocar algún líquido entre la lámina
cubre objeto y el objetivo. Se ha
obtenido buenos resultados con
ciertos aceites (aceite de cedro) cuyo
índice de refracción es igual al del
vidrio cubre objeto, eliminando toda
reflexión de los rayos luminosos
A la izquierda el espacio entre el cubre objeto (5) y el objetivo (3) es ocupado por el
aire; a la derecha el espacio es ocupado por un líquido de inmersión (6). Apréciese
que el cono de luz y el ángulo a son mayores con inmersión.
El poder de resolución

El poder de resolución de un microscopio compuesto de

campo claro puede ser calculado de manera razonable
mediante la fórmula :

Donde δ delta= resolución expresada en micrómetros.

lambda λ = longitud de onda de la luz empleada.
AN= Apertura numérica.
Factores que limitan la resolución en un sistema de
formación de imágenes.
Los sistemas ópticos y
habitualmente los microscopios
pueden presentar errores que
producen distorsión de las imágenes.
Son producidos mediante varios
mecanismos, ya sea por el
comportamiento de la luz al incidir
sobre el objeto en estudio o ya sea
por defectos propios de las lentes.

. Estos defectos son comúnmente conocidos como

aberraciones.
Algunos resultan de la esfericidad de la superficie de la lente
y son derivados de la interacción de la luz con dicha
superficie. Estos defectos producen alteraciones de los
detalles de las imágenes y se pueden presentar combinados.
En la actualidad, con el uso de técnicas de manufactura
moderna que han permitido la elaboración de lentes más
efectivas, se ha logrado corregirlos en gran medida
Difracción
El término difracción viene del latín diffractus que significa
quebrado. La difracción es el fenómeno que se observa cuando
la luz, al pasar por el extremo de una superficie se "dobla"
desviandose del trayecto y no sigue su propagación en línea
recta.

Cuando la luz pasa por una rendija, no sigue su trayecto en

línea recta, se “dobla”, en otras palabras, se difracta
 Expansión de la luz
En la trans-iluminación del objeto,
las ondas luminosas encuentran
obstáculos en su trayecto, lo que
produce una expansión de la luz
por la difracción y se obtiene una
imagen borrosa que limita la
capacidad de aumento útil de un
microscopio. Por ejemplo, los
detalles menores de media
milésima de milímetro (0,5 µm) no
pueden verse en la mayoría de los
microscopios ópticos.
Discos de Airy y resolución. (a,b,c) tamaño de los discos y su perfil de intensidad, que
decrece de (a) hasta (c) relacionados con la apertura numérica a medida que
aumenta. (d) dos discos de Airy superpuestos y (e) discos de Airy en el límite de
resolución.
 Aberraciones
 De esfericidad, relacionadas con la forma esférica de la
lente: Se producen por falta de convergencia de las ondas
luminosas que pasan por la periferia de la lente cuando no
son enfocadas en el mismo punto que aquellas ondas que
pasan por el centro, las cuales son refractadas ligeramente;
mientras que las que inciden en la periferia son refractadas en
mayor grado y convergen en diferentes puntos focales.

Aberración de esfericidad. Los rayos que inciden paralelamente al eje principal no

convergen todos en un mismo punto. Los rayos de la periferia convergen más cerca de
la lente
 Cromáticas, relacionadas con las variaciones en los índices
de refracción de las diversas frecuencias (colores) que
conforman la luz blanca visible: Cuando la luz blanca
atraviesa una lente, las diferentes frecuencias son
refractadas de acuerdo a su frecuencia.
La incapacidad de la lente de reunir nuevamente los rayos
refractados en un punto focal común resulta en una discreta
diferencia en el tamaño del objeto y en franjas de colores
rodeando la imagen.

Aberración cromática. La luz blanca se descompone al atravezar la lente y las

diversas longitudes de onda convergen en varios puntos focales diferentes
 Radiación electromagnética
La radiación electromagnética puede manifestarse de diversas
maneras como calor radiado, luz visible, rayos X o rayos gamma.

*
Fenómenos asociados a la radiación electromagnética
Existen multitud de fenómenos
físicos asociados con la radiación
electromagnética que pueden ser
estudiados de manera unificada,
como la interacción de ondas
electromagnéticas y partículas
cargadas presentes en la materia.
Entre estos fenómenos están por
ejemplo la luz visible, el calor
radiado, las ondas de radio y
televisión o ciertos tipos de
radioactividad por citar algunos
de los fenómenos más destacados.
.Espectro electromagnético

La ordenación de los diversos tipos de radiación electromagnética

por frecuencia recibe el nombre de espectro electromagnético.
Luz visible
La luz visible está formada por radiación electromagnética
cuyas longitudes de onda están comprendidas entre 400 y 700
nm. La luz es producida en la corteza atómica de los átomos,
cuando un átomo por diversos motivos recibe energía puede que
algunos de sus electrones pasen a capas electrónicas de mayor
energía.

*
Luz visible
Los electrones son inestables
en capas altas de mayor
energía si existen niveles
energéticos inferiores
desocupados, por lo que
tienden a caer hacia estos,
pero al decaer hacia niveles
inferiores la conservación de la
energía requiere la emisión de
fotones, cuyas frecuencias
frecuentemente caen en el
rango de frecuencias asociados
a la luz visible.
 Calor radiado
Cuando se somete a algún
metal y otras substancias a
fuentes de temperatura estas se
calientan y llegan a emitir luz
visible.
NATURALEZA DE LA LUZ
Existe una teoría ondulatoria y una teoría corpuscular que
explican la naturaleza y propiedades de la luz. Actualmente
se sabe que la luz tiene un carácter dual (onda-partícula).
Para efectos de la mineralogía óptica emplearemos
básicamente los conceptos de la teoría ondulatoria, ya que
con su ayuda podemos explicar mejor los fenómenos de
refracción, reflexión, é interferencia.
TEORÍA ONDULATORIA DE LA LUZ
La luz está constituida por ondas
longitudinales (es decir,
como esferas que surgen de la
fuente luminosa, produciendo un
movimiento paralelo a la dirección
de propagación de la onda, igual
que las ondas del sonido), y que se
transmiten en un medio
homogéneo.

El aire es un medio homogéneo, porque aunque es un

compuesto formado por muchos elementos, todos ellos están
muy bien mezclados, y no se pueden diferenciar a simple vista
lo diversos componentes que lo conforman. Eso lo convierte
en un medio ideal para transmitir la luz.
TEORÍA CORPUSCULAR DE LA LUZ
Esta teoría supone que la luz está formada por partículas
materiales (llamadas corpúsculos) que son emitidos por los
cuerpos que reflejan la luz a gran velocidad.

Este postulado permite afirmar

que la luz: se propaga en
movimiento rectilíneo en el medio
y como son tan pequeños en
comparación con la materia, no
hay fricción, así los focos
luminosos emitirían minúsculas
partículas que se propagan en
todas direcciones y que al chocar
con nuestros ojos, producen la
sensación luminosa.
ESPECTRO ELECTROMAGNÉTICO
La radiación electromagnética presenta un componente
vectorial magnético y otro eléctrico; ambos son perpendiculares
a la dirección de propagación y perpendiculares entre si, el
efecto del vector eléctrico sobre la materia es la que determina
principalmente el comportamiento y propiedades de la luz.

Utilizados para fines

*
Minera gráficos y
Metalográficos
VISION AL OJO HUMANO
Las radiaciones electromagnéticas presentan diferentes
longitudes de onda; pero sólo las comprendidas entre 3900 Å
y 7700 Å Pueden ser captadas por el ojo humano.

*
ELEMENTOS DE LAS ONDAS LUMINOSAS
La longitud de onda (λ) es igual a la distancia entre dos
crestas ó entre dos nodos. La amplitud esta dada por la
altura de la cresta. La longitud de onda Determina el color,
y la amplitud la intensidad. la velocidad (V) depende del
medio. La velocidad de la luz en el vacío (C) es
2.9979*106 Km./seg.
La frecuencia (f) es el número de longitudes de onda que
pasan por un punto en un segundo:

f = V/λ (Hz)
La frecuencia no depende del medio. Si un rayo de
luz, emitido con una determinada longitud de onda;
cambia de medio, variarán su velocidad y su longitud
de onda; pero su frecuencia permanece constante.
La frecuencia permanece constante.

f1 f2

f1 = f2
MEDIO AIRE
PRISMA DE VIDRIO
LA LUZ SOLAR Ó LA LUZ DE INCANDESCENCIA
Emiten una mezcla de ondas con
diversas longitudes de onda. El
ojo humano es incapaz de
separarlas y percibe una idea
general que se considera luz
blanca.
El haz de luz blanca, como ya se
mencionó consiste en ondas de
diferentes longitudes que vibran
en todas direcciones
perpendiculares a la
trayectoria. Idealmente lo
podemos representar como un
cilindro, cuyo radio está dado
por las máximas amplitudes.
LA LUZ MONOCROMÁTICA
Consiste en ondas de una misma longitud que vibran en
diferentes direcciones perpendiculares a la trayectoria y la
podemos representar idealmente como una sucesión de
semihusos.
Dirección
“A”

Dirección “B”
LUZ PLANO - POLARIZADA
Es la que vibra en un solo plano
MICROSCOPIO METALOGRAFICO
FRENTE DE ONDA

Considerando sólo las ondas paralelas que provienen de una

única fuente de luz monocromática, el frente de onda es la
superficie formada por puntos correspondientes de las diversas
ondas.
 NORMAL DE ONDA
Es la perpendicular a dicha superficie
En medios óptimamente ISÓTROPOS, es decir, medios en los
que las propiedades ópticas son iguales en todas las
direcciones, la normal de onda coincide con la trayectoria.
En medios ópticamente ANISÓTROPOS, la normal de onda y
la trayectoria forman un ángulo.

NO
RM
AL
 RAYO

NORMAL

RAYO

EN MEDIOS ISOTROPOS
 RAYO

NORMAL

EN MEDIOS ANISOTROPOS
INTERFERENCIA ENTRE ONDAS LUMINOSAS
Cuando dos ondas de la misma longitud de onda (λ) vibran en el
mismo plano y se propagan en la misma dirección se produce el
fenómeno de interferencia, es decir, de ambas ondas forman
una resultante.
Si oscilan acompasadamente (igual fásica) la amplitud de la
resultante será igual a la suma de las amplitudes de las
componentes (interferencia constructiva).

Por el contrario, si las dos oscilaciones actúan exactamente de

manera opuesta (retardo de 1/2λ, 3/2λ, 5/2λ, etc.)
coincidiendo los senos y las crestas de las ondas, se origina
EXTINCIÓN de aquellas (interferencia destructiva). Cuando el
desplazamiento fásico no suponga una, ni media longitud de
onda, la oscilación resultante podrá ser mayor, igual ó menor
que las componentes.
 RESULTANTE

CONSTRUCTIVA

Interferencia constructiva

DESTRUCTIVA
1/2 L.
RESULTANTE

DESFASE

Interferencia destructiva
POLARIZACIÓN
La luz solar y la luz de incandescencia en general, vibran en
todos los planos perpendiculares a la trayectoria. La luz cuyas
vibraciones están restringidas a determinadas direcciones
en el espacio se denomina luz polarizada. Existen 3 tipos de
polarización: lineal, circular y elíptica la polarización circular
es un caso especial de la elíptica.
REFRACCIÓN Y REFLEXIÓN
Refracción es el fenómeno por el cual un rayo de luz cambia su
dirección de propagación al pasar oblicuamente de un medio a
otro. Reflexión es el fenómeno por el cual un rayo de luz
cambia su dirección de propagación al incidir sobre una
superficie de separación de dos medios sin poder atravesarla.
ABSORCIÓN DE LA LUZ Y COLOR DE TRANSMISIÓN
Absorción luminosa es la perdida
de la intensidad de luz al pasar a
través de un medio material. Esta
pérdida se debe a que parte de la
energía luminosa se transforma
en calorífica durante el paso. El
I = I0* е-4πkd/λ
grado de absorción de la luz
depende considerablemente del
espesor del material. El
debilitamiento de la energía sigue
la ley de LAMBERT.
Donde I es la intensidad de la luz, a una distancia d de recorrido dentro del
material desde la superficie de incidencia, I0 es la intensidad inicial, k es el
coeficiente de absorción y λ0 la longitud de onda de la luz en el vacío.
DISPERSIÓN
Dispersión es el fenómeno por el cual un haz de luz blanca
se separa en sus colores componentes al atravesar un medio
de mayor índice de refracción.
El grado de separación angular entre dos rayos luminosos
de dos longitudes de onda diferentes depende de las
diferencias entre los dos índices de refracción para esas
longitudes de onda.

Coef. Dispersión = Nf - NC

La diferencia entre los índices en una sustancia para los rayos con λ = 4861 Å (azul, línea F de
fraunhofer) y λ = 6563 Å (rojo, línea C de fraunhofer) se conoce como coeficiente de dispersión.
Este coeficiente tiene un valor característico para cada material.
LECTURA SUGERIDA

1. Principio de Huygens-Fresnel. Historias de la Ciencia.

Recuperado en Noviembre 23, 2007, de la World Wide Web:
http://www.historiasdelaciencia.com/?p=168

2. Wilson T., Friedrich M., Diaspro A. Basics of Light

Microscopy & Imaging. GIT VERLAG GmbH & Co. KG.

3. Davison, M., Abramowitz, M. Optical Microscopy.

Olympus Microscopy Resource Center.