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Robert Hooke.1660-1665.
Microscopio compuesto
Hongos filamentosos.
Fluorescencia, Luz UV
Confocal, Laser
El microscopio Óptico, campo claro:
Dos series de lentes : Objetivo y ocular.
Luz visible
Producción imagen :
Células , componentes, m. ambiente.
abs-dispersan luz, dif grados:
Diferencias contraste: Imagen
Tinciones (Microorganismos pigmentados).
Componentes básicos de un microscopio
Brazo
Revólver
Objetivos
Condensador
T. Macrométrico
T. Micrométrico
Diafragma iris
Lámpara
Platina
T. del carro
Base
Fundamentos de óptica: Aumento y
Resolución:
Fundamentos de óptica: Aumento y Resolución:
CAPACIDAD DE AUMENTO/SIN LÍMITE (1000-1500X).
RESOLUCIÓN: Limitada, propiedades físicas lente (0j0)y luz
(Visible). limitada 400-700 nm.
Poder resolución del ojo humano;
◦ Límite de lo que se puede ver.
◦ Ojo humano: 0.2 mm = 200.0 micras 200,000 nm
- resolución +
Lente A B C D
RESOLUCIÓN:
Limitada, propiedades
físicas lente y luz.
Filtro de luz azul
Poder de Resolución
depende dos factores:
LR = / 2 N
APERTURA NÚMERICA=AN
•Directamente proporcional
•n=IR
•sen θ= Apertura Angular, AA
La apertura angular. Lente objetivo.
-Apertura angular AA:
-AA= ½ del Angulo, entre los rayos de luz más
divergentes, salen de la preparación, musetra,
objeto, y entran al objetivo
-Lentes objetivo:
-Plano convexos, muy pequeños,
-Apertura angular/visual= muy
angosta.
Uso AI:
LENTE-OBJETIVO llevada más cerca del objeto:
Distancia de trabajo, disminuye de 1.8 mm a 0.2 mm.
Captando más rayos divergentes.
Incrementa, Poder de Resolución.
100X
40X
Límite de Resolución:
530 nm
Ejemplo:
100x 1.3 N.A. objetivo a 530 nm=
0.53 um
0.53
= = 0.20 m
2 NA 2 X 1.3
Refractado.
Los rayos que , pasa través del objeto, se enfocan anillo,
retardado o avanzado ¼ long onda respecto a primero.
Refractada
Perceptible al ojo humano
Cambio de fase.
Los rayos se amplifican.(Brillante)
Los rayos interfiere . (Oscuro).
Directa
Refractada
Fluorescencia:
Capacidad de un objeto de emitir rayos de una longitud de onda
diferente, mayor, a los rayos incidentes
Luz incide es de menor λ.
Microscopio de fluorescencia
Visualizar muestras, emiten fluorescencia.
Capacidad de Fluorecer :
Auto florescencia (clorofilas)
Colorantes fluorescentes: fluorocromos
Sulfato de quinina,
Auramina
LR = / 2 N
Microscopio de fluorescencia
La muestra se tiñe con una sustancia fluorescente: se
ilumina con luz de ondas cortas (UV), invisibles,/emite
luz longitudes ondas más largas (verde).
Microbiología Diagnóstica:
◦ Bacilo de tuberculosis.
◦ Inmuno-fluorescencia: Sustancia fluorescente se
une a anticuerpo específico, contra ciertos mo.
Técnica, área clínica
Microscopio de fluorescencia
Dispositivos especiales:
◦ Luz UV
◦ Filtro opaco al UV, Tubo micro: Protección de ojos.
◦ Lámparas/filtros (selección )
◦ Condensador
◦ Uso de fluoro-cromos
Condensador
Fluorescencia
Microscopio de fluorescencia
Microscopio Confocal. de barrido láser.
Fuente de iluminación, luz de
un láser.
Potente y monocromática
Excita en muestra fluorescencia.
Espécimen iluminado con luz de cierto
color, éste emitirá luz brillante otros
colores.
contraste impresionante/
fondo oscuro.
Se retratan distintos planos, se
integran: Tridimensional.
1930.-Radiaciones electromagnéticas LR = / 2 N
long onda e, 0.5 nm.
Luz visible 400-700.0 nm
Muestra
Eq Ocular: Imagen real .
250,000 X
Muestras:
Contraste adecuado:
- Célula aislada-gruesa
- Cortes ultrafinos: 0.02 u. ( metacrylato, ultra-microtomo-
diamante)
Microscopio electrónico de
transmisión
TEM: Transmision Electron
microscope
Poder resolución:
Estructuras sub-celulares: ac nucleicos.
Microscopio electrónico de transmisión
TEM: Transmision Electron microscope
Microscopio electrónico de barrido.
SEM: Scanning Electrón Microscope.
Fuente de e;
pistola de tungsteno caliente,
hexaboruro de lantano
Haz e, barre superficie muestra.
E desviados, dispersados pantalla, imagen.
◦ Tercera Dimensión: Solo Superficie
◦ Aumentos: 100,000 X.
◦ .
◦ Cámaras; Microfotografías electrónicas.
Esporas
dmáx.= 10 nm
Campylobacter jejuni
Bacillus
S aureus
Utilidad:.
Investigaciones neuroquímicas:
Estudios de Neurotransmisores (SNC) Mal de Parkinson y Alzheimer.