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NANOPARTICULAS METALICAS

SÍNTESE, CARACTERIZAÇÃO E
APLICAÇÃO EM SISTEMAS
BIOLÓGICOS COM ÊNFASE EM
FÁRMACOS E COSMÉTICOS

• AULA 6 QP-434 (19/09/07)


• Prof. Nelson Durán
• IQ-UNICAMP
Como preparar as nanopartícula?
Nanopartículas de prata

Sal do metal + agente redutor

E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland


Como preparar as nanopartícula?
Nanopartículas de Au e Pd

Arredondadas, lisas de 18 nm de Hexagonal de 30 nm de partículas


partículas de Au por redução de Pd preparada por redução de
de citrato uma sal de Pd com baixa
Concentração de ácido ascórbico
E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland
Como preparar as nanopartícula?
Nanopartículas de metais
Conhecidas da antiguidade

Ouro coloidal usada para vidros tingido com vermelho e


púrpura dos tempos medievais até agora

E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland


Sintese de nanoparticulas
metalicas
85oC
FeCl3 + 6H2O + FeCl2 . 4H2O + NH4OH --------------

HAuCl4 + NaBH4 ---------------

[Ag(NH3)2]+ Ac. ascorbico/1 h r.t. --------------


PREPARATION
Chemical Synthesis of silver nanoparticles
Como preparar nanopartículas? Nanocubos de
prata

E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland


Como preparar as nanopartícula?
Nanopartículas de óxidos metálicos

E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland


Caracterização de nanopartículas de TiO2 por
TEM

E.C. Constable, Depart. Chemistry, University of Basel, Switzerland


Como caracterizar as nanopartículas?
PREPARATION
Biosynthesis of silver nanoparticles
Fusarium oxysporum was grown by 7 days

The biomass was filtrated and resuspended in sterile water

The biomass was filtrated and AgNO3 (10 mM) was added
in the fungal liquid

Absorptions were measured in UV-Vis


Durán et al. J. Nanobiotechnol. 3, 1-7 (2005).

MATERIAIS E MÉTODOS

Coleção de 20 linhagens de Fusarium

Culturas de
Fusarium spp

MEV - nanopartículas
Espectro UV-vis Cultura em
meio
0,017/10-3 M de AgNO3
líquido (YM)
72 Horas
12 Horas
Biomassa em
Solução coloidal de reação Caldo fungal água destl.
Para seleção da linhagem com melhor eficiência, levamos em
consideração os dois métodos de biossíntese, tanto usando a
biomassa quanto usando o líquido fungal

A Métodos B

Após ser separada a


No caldo, foram
biomassa da água
introduzindo,017/10-3
destilada. Este peso
M de AgNO3
úmido foi
adicionada em uma
solução de 0,017/10-3
Nanopartículas de M de AgNO3 .
prata.
Souza et al. 58º SBPC, Florianopolis (2006)
Utilizando as
nanopartículas
da melhor
linhagem
Nanopartículas

Impregnação em
tecido têxtil para
atividade biocida
Algodão 100% Poliéster

Teste oligodinâmica

Staphylococcus aureus Klebisiela pneumoniae


Durán et al. Patente Braz. PIBr 0605681-4 (2006)
PRÉ-ENSAIO E RECUPERAÇÃO DAS NANOPARTÍCULAS EM
EFLUENTES
A água de lavagem do tecido têxtil impregnado com
nanopartículas de prata, foi submetida ao tratamento C.
violaceum.

100mL/100mL 100mL/60mL 100mL/20mL

48 Horas
sob
agitação

Aeração (0,5 Análise Ausência de


L/mim) espectro UV-vis ar
Durán et al. J. Biomed. Nanotechnol. 3, 203-208 (2007).
RESULTADOS

•Espectro UV-vis de linhagens de Fusarium

produtoras de nanopartículas de prata.

Souza et al. 58º SBPC, Florianopolis, S.C. (2006)


Silver nanoparticles
Size: 1,6 nm
(biosynthesis) Silver nanoparticles
Size: 175 nm
(Chemical synthesis)
Durán et al. J. Nanobiotechnol. 2005
a b

Amostras centrifugadas Impregnação das nanopartículas em a) algodão e


b) polyester
MEV do extrato líquido
Espectro UV-VÍS
1) Algodão 100% e 2) polyester 100% 3) Cultura de Staphylococus
aureus e 4) Teste com tecido algodão impregnado com
nanopartículas de prata frente à cultura bacteriana e 5) teste do
tecido polyester impregnado com nanopartículas de prata frente à
cultura bacteriana
1 4
3

2
5
ATIVIDADE BIOCIDA DO TECIDO IMPREGNADO
(ALGODÃO) COM NANOPARTÍCULAS DE PRATA
frente a bactéria S. aureus
MICROSCOPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA DO TRATAMENTO
DE ALGODÃO COM NANOPARTICULAS DE PRATA

Tecido Controle (sem nanopartículas de prata)

Tecido com
nanopartículas de
prata

Durán et al. J. Biomed. Nanotechnol. 3, 203-208 (2007).


ATIVIDADE BIOCIDA DO TECIDO IMPREGNADO
(POLIÉSTER) COM NANOPARTÍCULAS DE PRATA frente a
bactéria S. aureus

M.O das amostras não impregnadas

M.O do Poliéster
impregnado com
nps.
POSSÍVEL RECUPERAÇÃO

•Os tecidos impregnados com nanopartículas, após


sucessivas lavagens, perdem gradativamente sua
atividade biocida, uma vez que as nanopartículas
são liberadas durante este processo.
•Para evitar o descarte de nanopartículas no
ambiente, foram realizados ensaios com diferentes
concentrações de inóculo da bactéria,
Chromobacterium violaceum.
Espectros A e B, correspondentes às amostras controle (A, sem
diluição e B, diluição de 10 vezes). (C, D e E submetidas à
aeração). (F, G e H submetidas à ausência de ar) todas tratadas
com Chromobacterium violaceum.
EDS: Espectro de nanopartículas de prata em bactéria
Chromobacterium violaceum.
CONCLUSÃO
•Todas as 20 linhagens de Fusarium utilizadas neste trabalho apresentaram
capacidade de produção de nanopartículas de prata, entretanto, foram as três
mais eficientes separadas (dados apresentados no Relatório Parcial). Destas,
foi selecionada a linhagem 07SD.
•Avaliaram-se dois métodos de biossíntese: um empregando diretamente a
biomassa do fungo e outro apenas o líquido fungal. Este último mostrou
melhores resultados. Logo, deu-se continuidade ao trabalho empregando este
método.
•Os tecidos impregnados com as nanopartículas de prata apresentaram
atividade biocida frente a Staphylococcus aureus e Klebsiella pneunomiae.
•A possibilidade de recuperação das nanopartículas de prata após lavagens
sucessivas dos tecidos utilizando Chromobacterium violaceum foi comprovada,
podendo ser empregada no reaproveitamento contínuo dessas nanopartículas
(ainda em teste)

Durán et al. J. Biomed. Nanotechnol. 3, 203-208 (2007).


Jun Tian, Kenneth K. Y. Wong, Chi-Ming Ho, Chun-Nam Lok,
Wing-Yiu Yu,] Chi-Ming Che, Jen-Fu Chiu, and Paul K. H. Tam.
Topical delivery of silver nanoparticles promotes wound
healing.ChemMedChem.(2007)2,129-136.

• Preparation of the dressings:


• Nanosilver-coated dressing: Initial experiments were carried
out by using silver nanoparticle grafted dressing (silver
content: 2.75 mgg1, Anson Nanotechnology Group Co., Ltd.
Hong Kong). A piece of silver nanoparticle-coated dressing
(4H3 cm2) weighed 0.1737 g. This corresponds to 0.4777 mg of
silver nanoparticles on each piece. Transmission electron
microscopy revealed that silver nanoparticles were spherical,
with diameters of 149.8 nm based on 750 particle
measurements on five sites of interest. Subsequently
experiments were performed with silver nanoparticles (1 mm)
synthesized by borohydride reduction of AgNO3 in the
presence of citrate as a stabilizing agent, as previously
described.[45] Similar efficacy with silver nanoparticle dressing
was confirmed (data not shown).
SSD
NT
ND

Silver Nano Silver sulfadiazine

E:epidermid
HF: hair follicles
CULTURA DE MICRORGANISMOS NO PANO DA FERIDA NOS DIAS 1, 3, 5, 7 E 10 NOS ANIMAIS
TRATADOS COM ND (GRIS), SSD (BRANCO E NÃO TRATADO (GRIS ESCURO)
silver nanoparticles can modulate local and systemic
inflammatory response following burn injury by cytokine
modulation.

IL-6 TGF-beta IL-10

 ND VGEF IFN-gama
▄ No treatment
▲ SSD

IL-6 aumenta inflamação


TGF-beta auenta inflamação
Il-10regula citokinas
VGEF (vascular endotelial
growth factor)
promove cicatrização
IFN-gama aumenta colageno
PATENTES EM COSMÉTICOS
• Facial mask comprising a nanometer metal coating. Ko, Chuan Tao. (Taiwan). U.S. Pat. Appl. Publ.
(2007), 5pp. CODEN: USXXCO US 2007125383
• Silver-containing an antimicrobial body care product. Hanke, Bernhard. (Procter and Gamble
Company, USA). PCT Int. Appl. (2000), 22 pp. CODEN: PIXXD2 WO 2000078281
• Antimicrobial gel formulation containing silver nanoparticles for treating female genital infections, its
preparation method and uses. Chen, Hu. (Shenzhen Agt Pharm. Co., Ltd., Peop. Rep. China). Faming
Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu (2005), 16pp. CODEN: CNXXEV CN 1672689 A
• Manufacture of cosmetics containing silver nanoparticles and Carbopol. Liu, Baning; Ma, Xiaoling; Liu,
Xi. (Peop. Rep. China). Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu (2004), No pp. given.
CODEN: CNXXEV CN 1539403 A
• Formulation of UV absorbers by incorporation in solid lipid nanoparticles. Herzog, Bernd. (Ciba
Specialty Chemicals Corporation, USA). U.S. Pat. Appl. Publ. (2003), 16 pp. CODEN: USXXCO US
2003235540 A1
• Pharmaceutical compositions for treating allergic dermatitis comprising nano-gold solution. Han, Sang
Pil; Yoo, Eui Jae; Choi, Paeck Hi; Choi, Young Deuk. (Hanssem Health Co., Ltd., S. Korea). Repub.
Korean Kongkae Taeho Kongbo (2006), No pp. given. CODEN: KRXXA7 KR 2006134261
• Hair preparations containing silver nanoparticle colloids for the treatment of bacteria-caused hair
depilation. Han, Sang Pil; Yoo, Eui Jae; Choi, Paeck Hi; Choi, Young Deuk. (Hanssem Health Co., Ltd.,
S. Korea). Repub. Korean Kongkae Taeho Kongbo (2006), No pp. given. CODEN: KRXXA7 KR
2006110600
• Vaginal adhesive preparation containing silver nanoparticles and its preparation method. Gu, Maojian;
Ren, Fuzheng; Liang, Wei; Jiang, Zongrun. (Shanghai Jnj Modern Pharmaceutical Technologies Inc.,
Peop. Rep. China). Faming Zhuanli Shenqing Gongkai Shuomingshu (2006), 14pp. CODEN: CNXXEV
CN 1857310
• Anti-microbial condom containing silver nanoparticles, capable of preventing various adult diseases and
pregnancy. Yang, Won Dong. (S. Korea). Repub. Korean Kongkae Taeho Kongbo (2005), No pp.
given. CODEN: KRXXA7 KR 2005114182
• Antiaging cosmetics containing gold nanoparticles and silk fibroin for maintaining antioxidant activity.
Hur, Won; Lim, Kun Bin; Ahn, Hyo Soon; Shin, Hwa Sook. (Fineco. Ltd., S. Korea). Repub. Korean
Kongkae Taeho Kongbo (2006), No pp. given. CODEN: KRXXA7 KR 2006108789
Que fazem as nanopartículas? Escova de
dentes
MATERIAS PARA FERIMENTOS
Área superficial grande de partículas
de prata tamanho nano melhora a
efetividade antibacteriana
-melhora os tempos de recuperação
-mata bactéria mais rápido com
nanoparticulas que outras formas
de prata
Que fazem as nanopartículas? Sem
comentários
Lewin et al. Nat Biotechnol. 18, 410 (2000)
Sitio de ação de antibioticos
P. Li, J. Li, C. Wu, Q. Wu,J. Li. Synergistic antibacterial
effects of β-lactam antibiotic combined with silver
nanoparticles. Nanotechnology 16, 1912–1917 (2005)

Without any antibiotics


5 ug/mL of silver nanoparticles

150 ug/mL of amoxicillin

150 ug/mL of amoxicillin + 5 ug/mL of silver


nanoparticles
E. coli 5 x 10(6) colônias de bac., a) 5 ug mL(-1) de nanoparticulas de prata, b) 0.150 mg mL (-1) de
antibiotico) , c) 0.150 ug mL(-1) de antibiotico + a), d) b0 + 10 ug mL (-1) nanoparticulas de prata.
MECANISMO DA AMOXICILINA

Li et al., Nanotechnology 16, 1912 (2005).


CLINDAMICINA
NANOPARTICULAS DE PRATA COMO CARREGADORES
DE FARMACOS

CLIN
CLIN

CLIN CLIN

CLIN CLIN

CLIN
CLIN
Sintese quimica e fungica

Brocchi et al. J. Nanosci. Nanotechnol., submitted (2007)


MINIMUM INHIBITION
CONCENTRATION (MIC)

Durán et al., Crit. Rev. Microbiol. Submitted (2007).


VANCOMICINA EM NANOPARTICULAS PARA AUMENTAR
SUA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA

Gu et al. Nano Lett. 3, 1261-1263 (2003)


SINTESE DE NANOPARTICULAS DE OURO COM
VANCOMICINA
SILVER
NANOPARTICLES
AND NEGLECTED
DISEASES
CLIN
CLIN

CLIN CLIN

CLIN CLIN

CLIN
CLIN
Goal

Cutaneous leihmaniasis Propiobacterium acnes


bacteria
SKIN PERMEATION IN VITRO

Human abdominal skin

The nanoparticles did not reach the


receptor compartment
O QUE FAZEM AS NANOPARTICULAS DE PRATA?

Gade et al., Appl. Microbiol. Biotechnol., submitted (2007)


SINTESE DE NANOPARTICULAS
DE OURO ASSOCIADA A IgG

HAuCl4 + NaBH4

IgG de soro humano


BACTERIA
BACTERIA

Imã

SEPARAÇÃO

ANALISE
MLDI Analysis: (H. Steen and M. Mann. “The abc’s (and xyz’s) of peptide
sequencing”. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 5, 699-711 (2003)).
Staphylococcus saprophyticus were collected from patients at the Hospital,
Streptococcus pyogenes JRS 75 and JRS 4 were from collections S. pyogenes
JRS 75 was obtained by mutating M protein from the strain of S. pyogenes
JRS 4.29
The lowest cell concentration that was detected for both Staphylococcus
saprophyticus and Staphylococcus aureus in aqueous sample solutions (0.5
mL) was 3 x 10(5) cfu/mL, while the detectable cell concentration for S.
saprophyticus in a urine sample was 3 x 10(7) cfu/mL
Absorption and desorption of chemotherapeutic drugs
from a magnectically targeted carrier (MTC). Rudger et al.
J. Control. Releae 74, 335-340 (2001).
Doxorubicin follows the Langmuir theory for
milling, particles are resuspended and dispersed,
adsorption to MTCs. The Langmuir theory
holds that the solute adsorbs to sites on the carbon
surface in a discrete one to one correspondence.

ACTIVATED CARBON

MAGNETICALLY TARGETED CARRIER (MTC)


ALVOS NAO ESPECIFICOS
------------------------------------------------------------------------------------------------------

Rudger et al. J. Control. Releae 74, 335-340 (2001)


Treatment of a hepatocellular carcinoma by
MTCs in clinical human trials

As shown in the left panel following the treatment of a HCC tumor with MCT-DOX the hepatic arteries
Remain patent, demonstrating particles toletaribility as evidenced by the lack of trombosis and/or
embolization of the arteries. Localization and retention of the particles in the target tumor are showed
in the the righ papel by magnetic resonant imagins (MIR) (the particles were in the local after 28 days)
DOENÇAS
DE PELE

ACNE
Contra a bacteria Propiobacterium acnes
associada em parte com a inflamação do
acne

Clindamycin
Emulsão topica 1% ou gel

Liga-se as subunidades ribossomais 50S e


Inibe a síntese de proteínas
CLIN

CLIN
CLIN

CLIN
CLIN CLIN
CLIN

CLIN CLIN
Durán et al. Patente submetida (2007)

CLIN
CLIN
ACNE
AGRADECIMENTOS

REDE NANOTUB0S
DE CARBONO
CNPq/MCT

CNPq/MCT