5991-5857 Agilent MS Theory ES

Espectrometría de masas
Fundamentos y teoría
CONSTRUYENDO
UNA CIENCIA MEJOR
ENTRE AGILENT Y USTED
Exclusivamente para fines educativos

04 de mayo de 2018
© Agilent Technologies, Inc. 2016
1
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04 de mayo de 2018
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Introducción
La espectrometría de masas (MS) es una técnica de química analítica que

ayuda a identificar la cantidad y tipo de compuestos químicos presentes en
una muestra midiendo la relación masa/carga y la abundancia de iones en
fase gaseosa.
Un espectro de masas (espectros) es un gráfico de la señal del ión
en función de relación masa/carga. A partir de los espectros, se utilizan la
masa del ión molecular y los fragmentos para determinar la composición
elemental o la firma isotópica de un compuesto. Esta información se utiliza
para determinar las estructuras químicas de las moléculas, como los
pesticidas o péptidos.
La espectrometría de masas funciona ionizando los compuestos químicos
para generar moléculas cargadas o fragmentos de moléculas y medir su
relación masa/carga.

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Introducción
Ganador del Premio Nobel de Tecnología
John Fenn y Koichi Tanaka fueron galardonados con el Premio Nobel de Química en
2002 por el desarrollo de dos tecnologías de ionización suave:
• Tecnología por electrospray, Dr. Fenn
• Desorción láser suave, Dr. Tanaka
El Dr. Kurt Wüthrich fue el tercer ganador del Premio Nobel de Química en 2002 por
el desarrollo de métodos para la identificación y el análisis estructural de
macromoléculas biológicas.

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Índice
Introducción Funcionamiento
• Consideraciones básicas • Analizador de masas
• Masas y espectrometría de masas • Cuadrupolo simple
• Triple cuadrupolo
• Pasos fundamentales
• Trampa de iones
• TOF (Tiempo de vuelo)
Funcionamiento
• Ionización Resultados
• Impacto electrónico • Espectro de masas

• Ionización química • Cuadrupolo simple frente a TOF
• Consideraciones de la muestra (LC/MS) • Iones con carga múltiple y deconvolución
• Electrospray
Más información
• Ionización química a presión atmosférica
• Fotoionización a presión atmosférica • Página web de Agilent para instituciones
académicas
• Ionización multimodo
• Publicaciones
• MALDI
• ICP

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Introducción
Consideraciones básicas
Los elementos se pueden identificar de Los compuestos, formados por distintos
manera inequívoca por su masa. La elementos, pueden distinguirse por su masa:
espectrometría de masas es un método
analítico para medir el peso molecular
o atómico.
Glucosa C6H12O6 Penicilina C16H18N2O4S

PM: 180,1559 g/mol PM: 334,39 g/mol
Fuente: Tabla periódica, póster SI-0186
Índice
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Introducción
Masas y espectrometría de masas
La masa media de una molécula se obtiene sumando las masas atómicas medias
de los elementos que la forman.
Masa media del agua (H2O): 1,00794 + 1,00794 + 15,9994 = 18,01528 Da
La masa monoisotópica es la suma de las masas de los átomos de una molécula
utilizando la masa en reposo, en estado fundamental, no unida, del isótopo principal
(más abundante) de cada elemento en lugar de la masa media isotópica. La masa
monoisotópica se expresa generalmente en unidades de masa atómica unificada.
La masa exacta (más correctamente, la masa exacta medida) es una masa
determinada experimentalmente que permite determinar la composición elemental.
Para las moléculas con masa por debajo de 200 u, la precisión de 5 ppm es
normalmente suficiente para determinar de forma única la composición elemental.
Índice
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Introducción
Pasos fundamentales
Procedimiento de MS típico:
• Se ioniza la muestra (sólida, líquida, gaseosa)
• Durante la ionización, las moléculas de la muestra Muestra
podrían romperse en fragmentos cargados
• Los iones se separan según su relación
masa/carga (m/z)
• Los iones se detectan mediante un mecanismo + +
Ionización
capaz de detectar partículas cargadas (p. ej. + + + +
(positiva o negativa)
multiplicador de electrones)
• Los resultados se muestran como espectros de +
abundancia relativa como una función de la Manipular según la + + + +
relación masa/carga +
relación m/z
(o el tamaño a cargar)
• La identificación se produce mediante la
correlación de masas conocida con masas
Intensity
identificadas o mediante un patrón de
Detección
fragmentación característico m/z
Índice
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Funcionamiento
Ionización
Antes de que se pueda analizar la masa de la muestra, debe desionizarse
en la fuente de iones.
Introducción de muestras gaseosas:
• Ionización electrónico (EI)
• Ionización química (CI)
Introducción de muestras líquidas:

• Ionización de electrospray (ESI)
• Ionización química a presión atmosférica (APCI)
• Fotoionización a presión atmosférica (APPI)
• Ionización multimodo (MMI)
• Desorción/ionización de matriz asistida por láser (MALDI)
• Plasma acoplado inductivamente (ICP)
Índice
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Funcionamiento
Ionización
La polaridad de los analitos determina la fuente de ionización.
100.000 ESI Ionización de electrospray

ESI
APPI Fotoionización a Presión
Peso molecular
Atmosférica
APPI APCI Ionización Química a Presión
Atmosférica
APCI
GCMS GC/MS Cromatografía de gases/
Espectrometría de masas
10
no polar muy polar
Polaridad del analito
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Ionización electrónico (EI)
El Ionización electrónico (EI) es el método más común de ionización en cromatografía
de gases (GC).
Las moléculas que salen del cromatógrafo de gases son bombardeadas por un haz de electrones
(70 eV) que elimina un electrón de la molécula lo que da como resultado un ión cargado.
CH3OH + 1 electrón  CH3OH+ + 2e- Ión molecular
El EI normalmente produce moléculas iónicas de una sola carga y fragmentos iónicos (las partes
más pequeñas de las moléculas originales) que se utilizan para la elucidación de estructuras.
CH3OH+  CH2OH+ + H o CH3OH+  CH3+ + OH Fragmento iónico
Un electrón o fotomultiplicador detecta los iones separados.

El espectro de masas generado traza la intensidad de la señal a una relación m/z dada.
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Ionización electrónico (EI)
La interfaz GC/MS funciona a temperaturas altas.
Cubierta del
calentador
Aislamiento
Cámara de
ionización Columna
Cámara del MS Horno de GC

analizador
Conjunto
calentador/sensor
El extremo de la columna sobresale de 1 a 2 mm en la cámara de ionización.
Interfaz EI GC/MS. Fuente: Manual de funcionamiento del Sistema GC/MS de triple cuadrupolo Agilent 7000 (pág. 46)
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Ionización química (CI)
El es un proceso de transferencia directa de energía con la energía cinética del electrón
depositada directamente en una molécula del analito.
La CI es un proceso indirecto que involucra un agente químico intermedio. Esto se da sobre todo
en la ionización química positiva (PCI). En la PCI, la fuente de iones se llena con un gas reactivo
que se ioniza para crear iones reactivos que reaccionan con el analito.
Los gases reactivos que se usan de forma más frecuente son: metano, iso-butano y amoníaco.
El gas reactivo aplicado determina el comportamiento de la ionización y la fragmentación del
analito.
Las reacciones principales del metano son:
CH4 + e-  CH4+, CH3+, CH2+ El gas reactivo se ioniza por electrones que se introducen en la fuente de ionización.
CH4 + CH4+  CH5+, CH3
CH2+ + CH4  C2H4 + + H2
CH2+ + CH4  C2H3+ + H2+H
CH3+ + CH4  C2H5+ + H2
C2H3+ + CH4  C3H5+ + H2
Índice Consulte las notas para obtener más información

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Funcionamiento
Ionización – Consideraciones de la muestra (LC/MS)
ESI APCI APPI
Volatilidad no Alguna volatilidad Alguna volatilidad

necesaria necesaria necesaria
Técnica preferida Los analitos deben Los analitos deben

para los analitos poseer estabilidad poseer estabilidad
termolábiles térmica térmica
Iones formados Iones formados Iones formados

en solución en fase gaseosa en fase gaseosa
Puede formar iones Forma solo iones Forma solo iones

multicargados con una sola carga con una sola carga
Muchos compuestos ionizarán correctamente mediante estas tres fuentes. APCI/APPI

pueden ionizar moléculas que son demasiado no polares para que ESI las ionice.
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Consideraciones de la muestra (LC/MS)
ESI APCI APPI
Compuestos de PM
Iones en solución p. ej. Compuestos de PM y
intermedia y polaridad de
catecolamina, conjugados de polaridad intermedios p. ej.
intermedia a baja p. ej. PAHs,
sulfato, aminas cuaternarias PAHs, PCBs, ácidos grasos,
PCBs, ácidos grasos, ftalatos,
ftalatos, alcoholes
alcoholes
Compuestos con Compuestos con Compuestos con
heteroátomo p. ej. heteroátomo p. ej. heteroátomo p. ej.
carbamatos, benzodiacepinas carbamatos, benzodiacepinas carbamatos, benzodiacepinas
Compuestos que multiplican

Compuestos que son Compuestos que son
la carga en la solución p. ej.
demasiado no polares para demasiado no polares para
proteínas, péptidos,
la respuesta de ESI la respuesta de ESI
oligonucleótidos
Índice
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Funcionamiento
Ionización – electrospray (ESI)
La ionización de electrospray (ESI) es una técnica de
ionización suave. Inyector de HPLC
Se rocía (nebuliza) el eluyente del LC en una cámara Capilar

de nebulización a presión atmosférica en presencia
de un campo electrostático fuerte y de gas de secado
calentado. El campo electrostático se produce entre
el nebulizador, que en este diseño se encuentra a Nebulizador
tierra y el capilar, que está a alta tensión. Spray

Moléculas adecuadas: disolvente
• Pequeñas moléculas (glucosa) y biomoléculas

mayores (proteínas, oligonucleótidos)
La carga múltiple es el fenómeno en ESI, que permite
analizar moléculas mayores (-> Deconvolución)
Gas de secado calentado
Fuente de ionización de electrospray.

Fuente: Guías de concepto de LC/MS (pág. 22)
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Proceso ESI
De gotas cargadas a iones de analitos Evaporación
El nebulizador produce un tamaño uniforme de la
gota.
Las gotas cargadas son atraídas hacia la capilaridad
dieléctrica. La corriente de nitrógeno caliente que
rodea el capilar reduce el tamaño de las gotas. Este
proceso se llama desolvatación. Explosiones de coulomb
Las gotas siguen reduciéndose hasta que las fuerzas
electrostáticas de repulsión (Coulomb) superan a las
fuerzas de cohesión de las mismas, lo que provoca la
explosión de dichas gotas.
Este proceso se repite hasta que los iones del analito
finalmente se desorben en la fase gaseosa, llevados Clúster de disolvente del ión
por un campo eléctrico fuerte en la superficie de las
microgotas. Este proceso se llama evaporación
de iones. Ión del analito
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Ionización química a presión atmosférica (APCI)
APCI es un proceso de ionización química en fase
gaseosa. Por lo tanto, el analito necesita estar en Inyector de HPLC
fase gaseosa para realizar la ionización. Nebulizador
(pulverizador)
El eluyente del LC atraviesa una aguja de
nebulización, que crea un spray fino. Evaporar
(calentador)
Las gotas se vaporizan completamente en un tubo
cerámico calentado (~ 400 a 500 °C).
Moléculas adecuadas:
Gas de
+ + secado
• Moléculas ˂ 1.500 u + + + + +
Aguja de
• Compuestos menos polares y no polares descarga
de corona
(analizados normalmente mediante cromatografía
de fase normal)
Capilar
Fuente de ionización química a presión atmosférica.

Índice Fuente: Guías de concepto de LC/MS (pág. 27)
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Funcionamiento
Ionización – Proceso APCI
Esto muestra los procesos de evaporación
e ionización de APCI. Evaporación
Tenga en cuenta que el analito no se ioniza

hasta después de la evaporación y después
de que se ionice el gas reactivo.
Vapor
Después, el gas reactivo transfiere una carga
al analito.
+
La APCI genera normalmente solo iones con +
una sola carga, sin embargo, es posible Gas reactivo + + +
cargado formado +
obtener iones con doble carga donde las + +
zonas de carga estén separadas +
(normalmente por una región hidrofóbica). Carga transferida al
analito
+
+
Iones del analito + +
+

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Funcionamiento
Ionización – Fotoionización a presión atmosférica (APPI)
Con la técnica de APPI, el eluyente del LC pasa
a través de una aguja de nebulización para crear Inyector de HPLC
un spray fino. Nebulizador
(pulverizador)
Las gotas se vaporizan completamente en un tubo
cerámico calentado. Evaporar
(calentador)
La mezcla de gas/vapor pasa a través de la luz
ultravioleta de una lámpara de criptón para ionizar
las moléculas de la muestra. Los iones de la muestra Gas de
hu
se introducen en el capilar. ++ secado
+ ++ ++ ++ ++
La APPI se aplica a muchos de los mismos
compuestos que normalmente se analizan mediante
APCI. La APPI ha demostrado ser particularmente
valiosa en análisis de compuestos no polares y
aromáticos. Lámpara de UV Capilar
Fuente de fotoionización a presión atmosférica.

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Funcionamiento
Ionización – Proceso APPI
Esto muestra los procesos de evaporación
Evaporación
e ionización de la fotoionización.
Vapor
Tanto APPI como APCI son similares, con APPI para
realizar la ionización, se sustituye una lámpara por la
aguja de corona. Además, normalmente en la APPI se
utiliza un disolvente adicional o modificador de fase
móvil, llamado "dopante" (D) para ayudar con el h h
proceso de fotoionización.
+
+ +
+

APPI directa: M  hu  M e 
+ + + + + +
+

 SH  M  H   S 

M El fotón ioniza el
El dopante se
analito
fotoioniza y actúa
APPI dopante:  como gas reactivo
D  hu  D   e 
+
+
D  M  M  H   D
 
+ +
+
D   M  M   D Iones del analito

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Funcionamiento
Ionización – Ionización multimodo (MMI)
La fuente multimodo es una fuente de iones
que puede funcionar de tres maneras diferentes: Inyector de HPLC
• APCI
• ESI Nebulizador
• APCI/ESI simultáneos
Incorpora dos zonas separadas eléctricamente,
una para ESI y otra para APCI. Durante la APCI/ESI
simultáneas, los iones que forman ambos modos de Zona ESI
Zona APCI
ionización se introducen en el capilar y el Contenedor
espectrómetro de masas los analiza de forma térmico
simultánea. Capilar
Aguja de
descarga
MMI es útil para los cribados de especies de corona Gas de
desconocidas, o cualquier muestra que contenga secado
una mezcla de compuestos donde algunos
responderán por ESI y otros por APCI.
Fuente multimodo.
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Funcionamiento
Ionización – Desorción/ionización de matriz asistida por láser (MALDI)
La desorción/ionización de matriz asistida por
láser (MALDI) es una técnica de ionización
Haz del láser
suave.
La muestra se mezcla con la matriz y se aplica
Rejilla de extracción
a una placa de metal.
Un láser pulsado irradia la muestra, activando
la ablación y la desorción. Ión del analito
Las moléculas del analito se ionizan en la

al espectró-
pluma caliente de los gases ablacionados. metro de
masas
Los iones se aceleran en el espectrómetro
de masas. Ión de la matriz
Moléculas adecuadas: Zona del analito/matriz

en la diana MALDI
Lente de enfoque
• Biomoléculas (ADN, proteínas, azúcares)
• Moléculas orgánicas grandes (polímeros)
Índice
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Funcionamiento
Ionización – Plasma acoplado inductivamente (ICP)
Un instrumento de plasma acoplado
inductivamente (ICP) utiliza una fuente de Separación Detección
plasma en la que la energía se suministra
mediante corrientes eléctricas producidas por
HPLC MS orgánico opcional
inducción electromagnética, es decir, por
campos magnéticos que varían con el tiempo. GC
El plasma es tan energético que reduce las
Interfaz
Detector(es)
moléculas en los elementos ionizados. CE convencional(es) ICP-MS
opcional(es)
Existen distintos tipos de geometrías ICP FFF

disponibles que pueden acoplarse a las Detector(es)
convencional(es)
distintas tecnologías: Otra opcional(es)
• ICP-AES Espectroscopia de emisión

atómica
Diagrama esquemático que muestra las interrelaciones de
• ICP-OES Espectroscopia de emisión óptica varios componentes en un sistema de ICP-MS acoplado
• ICP-MS Espectrometría de masas
• ICP-RIE Grabado con iones reactivos
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas
Después de la ionización y del desplazamiento de los iones, los analitos entran en el
analizador de masas.
El espectrómetro de masas mide las señales del ión lo que da como resultado el
espectro de masas, que puede proporcionar información valiosa sobre el peso
molecular, estructura, identidad y cantidad de un compuesto.
Existen distintos tipos de analizadores de masas:
• Cuadrupolo simple (SQ)
• Triple cuadrupolo (QQQ)
• Tiempo de vuelo (TOF)
• Trampa de iones (IT)
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Cuadrupolo simple (CS)
Los iones cargados generados en la
fuente de iones entran en el analizador Fuente de
ionización externa
de masas.
El analizador de masas cuadrupolar se
escanea secuencialmente para que solo
un único ión m/z pueda pasar de una vez.
El resto de iones se pierde.
Detector
m/z - relación masa/carga:
Filtro cuadrupolo
Masa de un ión (Daltons o u) dividido por de masasconceptual - cuadrupolo simple
Modelo
el número de cargas en el ión
Información recibida: MS solo Modelo conceptual - cuadrupolo simple
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Cuadrupolo simple (CS)
Monitorización de ión único (SIM) Modo de barrido
El analizador de masas se
analiza secuencialmente
pasando cada m/z que
El analizador de masas se configura para hay en el rango de masas
El analizador
permitir de masas
solodeiones de
que seleccionado al detector
configura para permitir
un único m/z pasen que
solopor
los el
iones de la m/z
detector
simple pasen por el detector
Se monitoriza un ión diana con m/z Tiempo (s) --->

específico. La SIM en un cuadrupolo simple
En el modo MS de barrido, el analizador
permite obtener la mejor sensibilidad para
de masas cuadrupolar se escanea
realizar la cuantificación, sin embargo se
secuencialmente permitiendo el paso
pierde especificidad.
por el detector de 1 m/z cada vez.
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Triple cuadrupolo (QQQ)
Los iones cargados generados en la fuente de
iones entran en el analizador de masas.
Ionización
externa
El analizador está formado por tres
cuadrupolos (Q1-Q3) y por lo tanto varios
modos de funcionamiento que darán como
Filtro cuadrupolo
resultado información diferente. matriz Q1 Celda de colisión
Una configuración común es la siguiente:

• Q1: se utiliza como filtro para la m/z específica
(ión precursor) Detector
Filtro cuadrupolo
• Q2: se utiliza como celda de colisión para Q3 del producto
fragmentar el ión precursor y generar iones
producto
Modelo conceptual - Triple cuadrupolo
• Q3: configurado para la m/z específica (SRM o
Esquema que muestra el modo SRM
MRM) o en modo de barrido (barrido del ión
producto)
Información recibida: MS y MS/MS

Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Triple cuadrupolo (QQQ)
Monitorización de reacción múltiple (MRM) Modo MS/MS de barrido completo
Celda de colisión Celda de colisión

con gas nitrógeno Celdacon
degas nitrógeno
colisión
con gas argón.
Los iones precursores con una m/z única pasan a La diferencia entre el modo de barrido completo y
la celda de colisión. Los fragmentos iónicos se SRM o MRM es la función de barrido. Q3 se
generan mediante la colisión con moléculas de escanea secuencialmente permitiendo el paso por
nitrógeno. Q3 se configura para una m/z única de el detector de 1 m/z cada vez. Se genera un
fragmento iónico específico. Este método es muy espectro de ión del producto. Este modo de
sensible y se utiliza para realizar cuantificaciones. funcionamiento es menos sensible que el SRM o
MRM.
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Trampa de iones (IT)
Los iones cargados generados en la fuente de
iones entran en el analizador de masas. Todos
los iones de la polaridad seleccionada por
encima del rango de masas seleccionado
pueden almacenarse a la vez en la trampa.
Los iones pueden manipularse en el
analizador de masas de trampa de iones,
realizando múltiples etapas de aislamiento y
fragmentación, hasta el momento de detectar.
En vez de cuatro varillas paralelas, la trampa
de iones está formada por un electrodo con
forma de anillo circular más dos tapas que
forman una "trampa".
Modelo conceptual - Trampa de ión
Información recibida: MS y MS/MS
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Trampa de iones (IT)
Paso 1: Aislamiento del ión precursor Paso 2: Fragmentación del ión precursor
a
a
Analizador de masas
de la trampa de ión b
Una vez han finalizado la inyección y La excitación resonante del ión precursor
acumulación del ión, la puerta de iones se provoca la disociación inducida por colisión
cierra y los iones no se inyectarán más en el (CID) y se generan los iones del producto (a).
analizador de masas. A las masas expulsadas Los iones producto de barrido completo se
se les aplica formas de ondas por encima y expulsan hacia el detector (b).
por debajo del ión precursor.
Índice
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Funcionamiento
Analizador de masas – Tiempo de vuelo (TOF)
Los iones cargados generados en la fuente
de iones entran en el analizador de masas.
Espejo de iones
Componentes del analizador:
• Filtro de masas (Q1) opcional
• Tubo de vuelo
• Celda de colisión (Q-TOF) Filtro cuadrupolo de
masas (Q1)
Después de que los iones hayan atravesado Fuente Óptica de transferencia
el cuadrupolo o la celda de colisión llegan al de iones
Detector
pulsador de iones. Se aplica un pulso de alta Celda de colisión
Pulsador
de iones
de iones
tensión que acelera los iones en el tubo de

vuelo. Un espejo de iones en el extremo del Turbo 1b Turbo 1a Turbo 2 Turbo 3
tubo refleja los iones y los envía al detector
que registra su tiempo de llegada. Esquema de un espectrómetro de masas de TOF.
Información recibida: Fuente: Time-of-Flight Mass Spectrometry
(Espectrometría de masas TOF).
TOF: MS solo El gráfico muestra un Q-TOF.
Cuadrupolo TOF: MS y MS/MS
Índice
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Funcionamiento
El tiempo de vuelo (t) para cada masa es único y viene determinado por la energía
(E) a la que un ión se acelera, la distancia (d) que tiene que viajar y la m/z.
E  1 / 2mv 2 que está resuelto para m de esta forma: Acelerar la Distancia de la
energía (E) trayectoria del vuelo (d)
Pulsador
m  2E / v 2
y está resuelto para v así: de iones
Óptica Tubo de vuelo
de iones Fuente de iones b
Detector
Detector
v  (2E / m) ecuación 1
Celda de colisión
con gas argón.
La ecuación indica que para una energía cinética dada, E, las masas más pequeñas
tendrán velocidades mayores que las masas más grandes. Los iones con masas
menores llegarán antes al detector.
La velocidad viene determinada (y en consecuencia la masa) por la medida del
tiempo que tarda un ión en alcanzar el detector.
Índice
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Funcionamiento
La segunda ecuación es la ya conocida velocidad (v) igual a la distancia (d)
dividida por el tiempo (t): v  d / t
Las ecuaciones 1 y 2 combinadas producen: m  (2 E / d 2 )t 2
Para una energía (E) y distancia dadas, la masa es proporcional al cuadrado

del tiempo de vuelo del ión. E y d se mantienen constantes y dan como resultado una
variable A que simplifica la ecuación: m  A  t
2
Para ser muy precisos, se debe considerar también un retraso del tiempo para aplicar
la alta tensión: t  tm  t0
Esto dará como resultado la ecuación final: m  A(tm  t0 )

2
Índice
04 de mayo de 2018
34
Resultados
Ejemplo 1
279,1
Espectro de masas de la
350.000
CH3
+ sulfametazina analizado con
[M + H]
O N analizador de masas cuadrupolo
300.000 O S
NH
simple
N CH3
250.000 Fórmula molecular: C12H14N4O2S

[M+H]+: 279,33
H2N
200.000
150.000
100.000
281,0 280,0
+
301,0
50.000 [M + Na]
Espectro de masas de sulfametazina.

0 Fuente: G1960-90083 (pág. 17)
100 200 300 m/z
Índice
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35
Resultados
Ejemplo 2
Espectro de masas del
sucralose con un
analizador de masas Q-TOF
Fórmula molecular: C12H19Cl3O8
Molar mass: 397.64 g/mol
Mass spectrum of sucralose in (A) negative ion

mode and (B) positive ion mode.
Source: Identification and Fragmentation of
Sucralose Using Accurate-Mass
Q-TOF LC/MS and Molecular
Structure Correlator Software (Fig 1, p 3)
Índice
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36
Resultados
Cuadrupolo simple frente a TOF de alta resolución
Bajo poder de resolución
El análisis con un cuadrupolo simple (triple)
proporciona información de la masa nominal (poder
de resolución bajo), los instrumentos de TOF pueden
Abundancia
Masa diana
proporcionar información de la masa exacta (poder
de resolución alto).
Interferencia
Para realizar el análisis por tiempo de vuelo, se
necesita realizar la calibración continua del sistema
TOF y así asegurarse la mejor exactitud de masa Alto poder de resolución
posible. Las medidas suelen desviarse solo algunas
partes por millón (ppm). Masa diana
Abundancia
Con una resolución de masas y una exactitud de
masas suficiente, un espectrómetro de masas TOF
puede confirmar positivamente la composición Interferencia
elemental.
Masa
Poder de resolución de un cuadrupolo simple (a) frente

a una fuente de TOF (b): Agilent data
Índice
04 de mayo de 2018
37
Resultados
Cuadrupolo simple frente a TOF
Espectro de masas típico de Espectro de masas típico de TOF
Cuadrupolo simple
+TDF MS: Experimento 2, de 0,932 a 1,007 min desde sulfa 284 a.wiff Agilent
279,1
156,0116
100% Recuento máx. 4,8e4
CH3
+
350.000 [M + H]
O N
300.000 O S
NH N CH3
250.000
H2N
200.000
150.000
307,0027
285,0207
100.000
281,0 280,0
149,0242 309,0000
301,0
50.000 [M + Na]
+
0
100 200 300 m/z m/z (amu)
Espectro de masas de sulfametazina. Espectro de masas de la sulfacloropiridazina con iones
Fuente: G1960-90083 (pág. 17) aductos y fragmentos iónicos. Fuente: Agilent data
Índice
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38
Resultados
Iones con carga múltiple y deconvolución
Dependiendo de la molécula analizada y de la técnica de ionización, se podrán generar iones
con carga múltiple.
Las moléculas pequeñas y la APCI ofrecen moléculas simples cargadas:
La m/z medida se corresponde con el peso molecular después de restar (ión positivo)
o sumar (ión negativo) el portador de carga.
Para las moléculas grandes (péptidos, proteínas) ionizadas con ESI, existe más de un sitio
de carga disponible (para la protonación o deprotonación) lo que puede dar como resultado
iones con carga múltiple:
Esto hace que las moléculas como por ejemplo los anticuerpos (1 Mio Da) sean accesibles
a la espectrometría de masas, dado que los iones medidos se desplazan a un rango de la
m/z de medida más legible.
Es necesario realizar un algoritmo matemático para determinar el peso molecular real de la

m/z medida. este proceso se conoce como deconvolución.
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Resultados
Iones con carga múltiple y deconvolución – Ejemplo
1177,68 Masa esperada de la sintetasa de glutamina sin modificar:

51.772,7 u
Abundancia
1205,06
1233,73
1117,6
1263,80 51772,87
1126,52
1295,38
1102,58
1.170 1.180 1.190
1328,53
Relación masa/carga (m/z)
1057,61 1363,47
1400,31
Abundancia
1016,17
Abundancia
1439,18
996,67
977,87 1480,25
922,01
50.600 50.800 51.000 51.200 51.400 51.600 51.800 52.000 52.200 52.400 52.600 52.800
700 800 900 1.000 1.100 1.200 1.300 1.400 1.500 1.600 1.700 1.800 1.900
Masa (u)
Relación masa/carga (m/z)
Espectro de masas de la sintetasa de glutamina. Espectro de masas deconvolucionado de la sintetasa

de glutamina expresada.
Fuente: LC/TOF-MS de masa exacta para la confirmación de pesos moleculares de la proteínas intactas (Fig 1, pág. 4)
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Índice
04 de mayo de 2018
40
Más información
Para obtener más información sobre los productos de Agilent, visite los sitios web
www.agilent.com y www.agilent.com/chem/academia
Si tiene más preguntas o sugerencias sobre esta presentación, póngase en contacto con
academia.team@agilent.com
Publicación Título N.º pub.

Agilent 7000 Series Triple Quad GC/MS Operation Manual (Manual de
Manual G7000-90044
funcionamiento del Sistema GC/MS de triple cuadrupolo Agilent 7000)
Agilent 6100 Series Quadruple LC/MS system – Concepts Guide (Guía de
Guía G1960-90083
conceptos del sistema LC/MS de cuadrupolo Agilent serie 6100)
Descripción técnica
Time-of-Flight Mass Spectrometry (Espectrometría de masas TOF) 5990-9207EN
general
Identification and Fragmentation of Sucralose Using Accurate-Mass Q-TOF
Aplicación 5991-4066EN
LC/MS and Molecular Structure Correlator Software
Accurate-Mass LC/TOF-MS for Molecular Weight Confirmation of Intact
Aplicación 5989-7406EN
Proteins For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Vídeos www.agilent.com/chem/teachingresources
Imágenes www.agilent.com/chem/teachingresources
Índice
04 de mayo de 2018
41
GRACIAS
POR SU
ATENCIÓN
Número de publicación 5991-5857ES
04 de mayo de 2018
42
Abreviaturas
Abreviatura Definición Abreviatura Definición
APCI Ionización química a presión atmosférica Cromatografía de líquidos/espectrometría de

LC/MS
masas
APPI Fotoionización a presión atmosférica M Ión molecular
CI Ionización química Desorción/ionización de matriz asistida por

MALDI
láser
CID Disociación inducida por colisión
MMI Ionización multimodo
D Dopante (APPI)
MRM Monitorización de reacción múltiple
Da Dalton
MS Espectrometría de masas
EI Impacto electrónico
m/z Relación masa/carga
ESI Ionización de electrospray
QQQ Sistema LC/MS triple cuadrupolo
GC Cromatografía de gases
SIM Monitorización de ión único
GC/MS GC/MS
SH Moléculas de disolvente
ICP Plasma acoplado inductivamente
SQ Cuadrupolo simple
IT Trampa de iones
(Q) - TOF Tiempo de vuelo
Índice
04 de mayo de 2018
43

5991-5857 Agilent MS Theory ES

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Espectrometría de masas

Exclusivamente para fines educativos

Este conjunto de diapositivas ha sido preparado por Agilent

Exclusivamente para fines educativos

La espectrometría de masas (MS) es una técnica de química analítica que

Exclusivamente para fines educativos

• Desorción láser suave, Dr. Tanaka

Exclusivamente para fines educativos

• Impacto electrónico • Espectro de masas

Exclusivamente para fines educativos

Glucosa C6H12O6 Penicilina C16H18N2O4S

Fuente: Tabla periódica, póster SI-0186

Introducción de muestras líquidas:

100.000 ESI Ionización de electrospray

CH3OH + 1 electrón  CH3OH+ + 2e- Ión molecular

CH3OH+  CH2OH+ + H o CH3OH+  CH3+ + OH Fragmento iónico

Un electrón o fotomultiplicador detecta los iones separados.

Cámara del MS Horno de GC

El extremo de la columna sobresale de 1 a 2 mm en la cámara de ionización.

Índice Consulte las notas para obtener más información

ESI APCI APPI

Volatilidad no Alguna volatilidad Alguna volatilidad

Técnica preferida Los analitos deben Los analitos deben

Iones formados Iones formados Iones formados

Puede formar iones Forma solo iones Forma solo iones

Muchos compuestos ionizarán correctamente mediante estas tres fuentes. APCI/APPI

ESI APCI APPI

Compuestos que multiplican

Se rocía (nebuliza) el eluyente del LC en una cámara Capilar

tierra y el capilar, que está a alta tensión. Spray

• Pequeñas moléculas (glucosa) y biomoléculas

Fuente de ionización de electrospray.

Fuente de ionización química a presión atmosférica.

Tenga en cuenta que el analito no se ioniza

Índice Consulte las notas para obtener más información

Fuente de fotoionización a presión atmosférica.

Índice Consulte las notas para obtener más información

Las moléculas del analito se ionizan en la

Moléculas adecuadas: Zona del analito/matriz

Existen distintos tipos de geometrías ICP FFF

• ICP-AES Espectroscopia de emisión

Se monitoriza un ión diana con m/z Tiempo (s) --->

Una configuración común es la siguiente:

Información recibida: MS y MS/MS

Celda de colisión Celda de colisión

tensión que acelera los iones en el tubo de

Las ecuaciones 1 y 2 combinadas producen: m  (2 E / d 2 )t 2

Para una energía (E) y distancia dadas, la masa es proporcional al cuadrado

Esto dará como resultado la ecuación final: m  A(tm  t0 )

250.000 Fórmula molecular: C12H14N4O2S

Espectro de masas de sulfametazina.

Mass spectrum of sucralose in (A) negative ion

Poder de resolución de un cuadrupolo simple (a) frente

Es necesario realizar un algoritmo matemático para determinar el peso molecular real de la

1177,68 Masa esperada de la sintetasa de glutamina sin modificar:

Espectro de masas de la sintetasa de glutamina. Espectro de masas deconvolucionado de la sintetasa

Publicación Título N.º pub.

Abreviatura Definición Abreviatura Definición

APCI Ionización química a presión atmosférica Cromatografía de líquidos/espectrometría de

CI Ionización química Desorción/ionización de matriz asistida por

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