Universitatea de Științe Agronomice si Medical Veterinare București

Facultatea de Biotehnologii

Asepsia
Laboratorului și a Mediilor Nutritive

Un proiect realizat de :
Rădoi Tudor
Șerbănică Cristian
Asepsia
Asepsia este starea rezultată din înlăturarea tuturor
microorganismelor patogene (bacterii, virusuri, fungi și paraziti).
Termenul de asepsie adesea se referă la acele practici ce induc sau
promovează asepsia într-un mediu în care se lucrează, fie într-un
laborator fie într-un mediu nutritiv, pentru a preveni infecția.
 Ideal, un laborator sau un mediu nutritiv este total aseptic, adică este
steril, nu mai există microorganisme, nici cele ce pot cauza boli,
putrefacție sau fermentație. Este o stare greu de obținut deoarece în
acest moment nu exista o modalitate de a elimina toți contaminanții fără
a cauza distrugeri. Totuși, eliminarea patogenilor este scopul asepsiei,
nu al sterilizării.
 Culturile de celule reușite depind foarte mult de menținerea celulelor
pure, fără contaminanți. Ustensilele, mediile si reactivii nesterilizate,
particulele aeriene pline de microorganisme, incubatoarele și suprafețele
de lucru murdare sunt toate surse de contaminare biologică.

Tehnicile de asepsie, proiectate să furnizeze o barieră între

microorganisme din mediul înconjurător și culturile de celule sterile,
depind de un set de proceduri de reducere a probabilității contaminării
din partea surselor pecizate mai sus.
Reguli de asepsie
Asepsia este una din condiţiile esenţiale pentru realizarea unei culturi tisulare sau celulare. Regulile care
guvernează un spaţiu aseptic sunt:

-acces limitat la camera de culturi celulare, de obicei prin zonă ecluză

-suprafeţele de lucru se decontaminează înainte şi după utilizare

-manipularea probelor biologice se face numai cu instrumentar steril, eventual de unică utilizare şi semiautomatizat
sau complet automatizat

-experimentatorul va purta echipament special şi mască de protecţie

-sterilitatea permanentă controlată a spaţiului de lucru

Principii de urmat:
• se foloseşte întotdeauna echipament individual
de protecţie (halat, mănuşi, ochelari); opţional
se pot folosi mănuşi termoizolante, vizieră şi
şorţ special pentru manipularea azotului
lichid;
• bonete speciale care să acopere părul strâns;
• echipament special pentru camera de culturi;
• ordinea şi curăţenia pe suprafaţa de lucru;
• marcarea corectă a recipienţilor, mediilor,
eprubetelor cu conţinutul şi data preparării;
• manipularea unei singure linii celulare o dată.
Nu se trece cu un vas pe deasupra altora;
• între operaţiuni, se curăţă masa cu alcool 70% şi se
lasă circa 15 minute între manipularea succesivă a 2
linii celulare diferite;
• utilizarea de recipiente separate cu medii pentru
diferitele linii celulare;
• examinarea zilnică a culturilor pentru posibile
contaminări bacteriene sau fungice;
• controlul de calitate al mediilor şi reactivilor înainte
de utilizare (data expirării, pH, contaminare);
• evitarea ambalării în carton a instrumentarului sau
culturilor;
• aseptizarea hotei, filtrelor, incubatoarelor,
microscoapelor;
Dezinfectanți
Există un număr mare de dezinfectanți disponibili. Problema este aceea că nu
există un dezinfectant perfect: puternic, sigur, disponibil și ieftin. Dezinfectantul
perfect ar trebui să sterilizeze perfect materialul pe care este aplicat, fără a provoca
daune organismului infestat sau mediului, să fie ieftin și non-coroziv. Din păcate,
dezinfectantul ideal încă nu există, acestea putând fi prin natura lor chiar mortale.
Următorul tabel oferă informații despre unii dezinfectanți avantaje și dezvantaje.
Tipul Brand-ul
Clor Clorox, Purex (5.25%
hipoclorit de sodiu)
Dioxid de clor stabilizat Oxyfresh
Fenoli Lysol, Stericol, Environ, O-
SylStaphene
Glutaraldehidele Wavecide, Cidex, Sporcide,
Banacide, Sterol
Spectrul de actiune
Puternic împotriva
bacteriilor și virusurilor. În
general se diulează 1:30.
Necesită 5’ timp de
contact. Inactivat de
materialele organice.
Puternic împotriva
bacteriilor și virusurilor.
Puternic impotriva multor
bacterii, fungi si unii virusi.
Are nevoie de 10’ timp de
contact. Nu lucreaza optim
in prezenta materialelor
organice.
Puternic împotriva
bacteriilor incluzând sporii
și virusurile. Lucrează bine
în prezența materialelor
organice și este considerat
stabil iî comparație cu alți
dezinfectanți.
Avantaje Dezavantaje
Un bun dezinfectant si Caustic, inactivat de
dezodorizant. Ieftin și materiile organice, iși
disponibil. pierde efectul rapid,
produce compuși
secundari cancerigeni
Un bun dezinfectant și Nu este prea disponibil.
dezodorizant. Soluția Scump. Inactivat de
diluata este considerata materiile organice.
sigură. Fumurile de dioxid de clor
concentrate pot fi toxice
pentru țesuturile vii.
Bun dezinfectant bacterian Concentratiile mari pot sa
si viral. Cost moderat. irite pielea, ochii și
plămânii. Nu omoara toate
bacteriile și virusurile.
Foarte stabil și puternic Scump și greu de obținut.
Poate irita pielea, ochii și
plămânii.
Bibliografie
• http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/bios318/318manual.htm#aseptic
• http://www.umsl.edu/~microbes/techniques.html
• https://
www.thermofisher.com/ro/en/home/references/gibco-cell-culture-basics/as
eptic-technique.html
• http://cyd.ro/laborator-de-culturi-de-celule/
• http://www.umsl.edu/~microbes/pdf/disinfectants.pdf
• http://
www.sciencebuddies.org/science-fair-projects/project_ideas/MicroBio_Tec
hniques.shtml
• https://www.cdc.gov/hicpac/disinfection_sterilization/6_0disinfection.html