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INSTITUTO TECNOLOGICO

SUPERIOR DE COMALCALCO
CINETICA ENZIMATICA
CINETICA MICROBIANA
Materia:
Biotecnología
Alumnos:
Heidi Guadalupe De La Rosa De La Cruz
Dany Alejandra Sánchez Domínguez
Karelly Pérez García
Soledad De Dios Ovando
Ángel De Jesús Ruiz De La Peña Solís
Carrera:
Ing. En Industrias Alimentarias
Semestre Y Grupo:
6to “A” 17/Abril/2018
Maestro:
I.A Hugo Alvarado Díaz
INTRODUCCIÓN

Las celulosas que pueden estar unidas a la superficie celular, o que pueden degradarse en
el medio, son enzimas inducidas, cuya actividad se inhibe por varios factores el PH, la
fuerza iónica, la temperatura, la concentración del sustrato y otros. Esto implica una
disminución en la utilización de los alimentos fibrosos por el rumiante, aunque la actividad
celulítica de los microrganismos del rumen se ha estudiado en varios trabajos, los
resultados son difíciles de comprar, debido a los diferentes sustratos y procedimientos
utilizados.
La mastitis es considerada la enfermedad infecciosa más costosa de las vacas lecheras,
debido a que induce una disminución en la producción de 4 a 30% de leche y baja su calidad,
además de incrementar los costos del cuidado de la salud del hato y un desecho prematuro
de animales genéticamente mejorados.
¿Que es la Cinética enzimática?

Estudia la velocidad de las reacciones químicas que son catalizadas por las
enzimas. El estudio de la cinética y de la dinámica química de una enzima permite
explicar los detalles de su mecanismo catalítico, su papel en el metabolismo, cómo
es controlada su actividad en la célula y cómo puede ser inhibida su actividad por
fármacos o venenos o potenciada por otro tipo de moléculas.
 La actividad catalítica de las enzimas depende de su
estructura
 Pueden requerir:

1. Su secuencia de aminoácidos y su conformación.


2. Un cofactor.
3. Un grupo prostético.
• Una reacción catalizada
enzimáticamente se lleva a cabo
en el sitio activo.
Materiales y Métodos

Colocar en baño
Diluir rumen
de agua Enfriar
filtrado
hirviendo

Adicionar
carboximetilcelul Adicionar a un Añadir 5 ml de
osa y buffer tubo de ensayo agua destilada
fosfato de sodio

Tomar 3 mL del
Centrifugar Agitar
sobrenadante
Resultados Y Discusión

En los ensayos enzimáticos es importante demostrar que la velocidad de la reacción que


se cataliza por una enzima es directamente proporcional a la concentración de la misma, a
una determinada concentración de sustrato.

La velocidad inicial mostró una relación polinomial entre el tiempo y el producto formado.
La actividad enzimática y la enzimática específica se redujo a partir de las
0.75 h de incubación (P < 0.001) y no se encontraron diferencias entre las
0.25 y 0.5 h
En la gráfica se muestra que la velocidad aumentó proporcionalmente
hasta una concentración de proteína en LRF
Curva de crecimiento

Fases de crecimiento

• Latencia
• Aceleración o exponencial
• Estacionaria
• Muerte
Factores para el pH- Acidez y
crecimiento microbiano Alcalinidad

Temperatura

 Mínima
 Optima
 Máxima

 Acidófilos o Psicrófilos
 Neutrófilos o Mesófilos
 Alcalófilos o Termófilos
o Termófilos extremos
Materiales y métodos
Determinación
Determinación
cepas de producción
del contenido
comerciales de ácidos
de péptidos
orgánicos

37°C
durante 24 Determinación Prueba de
Incubación de
horas y de viabilidad sensibilidad a los
las cepas
de L. casei antibióticos sobre
refrigeradas las bacterias
a 4°C (patógenas y
Obtención del láctica)
Determinación
incubar a inoculo L.
del nivel de
35°C casei
proteína
durante 24
horas
Determinación
Determinación de acido
de pH láctico
RESULTADOS

Se logró identificar las bacterias patógenas Staphylococcus aureus,


Staphylococcus epidermidis, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli
en las muestras de leche de vacas con mastitis subclínica y aislarlas
para su posterior uso.

Las pruebas de sales biliares bovinas y bilis bovina mostraron


crecimientos superiores a 109 UFC/ml. Las pruebas de producción
de gas y catalasa fueron negativas y la viabilidad a diferentes
valores de pH mostró un crecimiento de 1,1 x 1011; 2,0 x 1010 y 1,0
x 1010 UFC/ml para 2; 4,5 y 7, respectivamente.
Se encontró la fase exponencial de crecimiento a las 16 h 48 min con un
crecimiento de 3,3 x 1010 UFC/ml. El pH incial fue de 6,1; de 4,94 durante la
fase exponencial y de 4,32 en la fase final; en el análisis de regresión se
observó un descenso del pH de -0,117 (r2 0,63 p < 0,05)
CONCLUSIÓN

 Se concluye 0.25, 1:4 son los rangos de tiempo de concentración en que


se produjo mayor actividad enzimática
 Se concluye que Lactobacillus lactis presenta características adecuadas
como agente inhibidor de bacterias patógenas causantes de mastitis
subclínica en la región de Nariño (Colombia).
BIBLIOGRAFÍA

 Jurado G. Gúzman. I (2015). Determinación de la cinética, pruebas de crecimiento y efecto


de inhibición in vitro de Lactobacillus casei en Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis, Streptococcus agalactiae y Escherichia coli go. Revista Med Vet Zoot. pag.23-
39
 Galindo J, Gonzales N, Marreo Y. (2005) Cinetica de la actividad de las celulasas
microbionas en el liquido de rumen. Revista cubana de ciencia agrícola, vol. 39. núm. 4 pag.
587-592.
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