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FISIOLOGIA DEL CRECIMIENTO

BACTERIANO
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 El desarrollo puede definirse como el aumento ordenado de


todos los constituyentes quìmicos de la célula.
 Se trata de un proceso que implica la replicaciòn de todas
las estructuras celulares, organoides y componentes
protoplasmáticos a partir de los nutrientes presentes en el
medio circundante.
 Las bacterias son microorganismos en extremo versàtiles.
Presentan una enorme capacidad para la utilizaciòn de
materiales alimenticios muy variados, que oscilan desde
sustratos totalmente inorgànicos hasta compuestos
orgànicos muy complejos.
 Muchas especies han aprendido a desarrollarse en una
amplia diversidad de nichos ecològicos con temperaturas,
acidez y tensiones de oxígeno extremas.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES:
 Las bacterias autotróficas (litòtrofas) sólo requieren agua,
sales inorgánicas y dióxido de carbono para su desarrollo.
 Las bacterias heterotróficas (organótrofas) exigen una
forma orgànica de carbono para su crecimiento.
 Los átomos de nitrógeno de los aminoácidos, las purinas y
las pirimidinas provienen del amonio.
 El flujo de nitrógeno en estos compuestos comienza con la
reducción del nitrógeno atmosférico a amonio por los
microorganismos fijadores de nitrógeno.
 Fotótrofos: microorganismos que no requieren una fuente
exógena de un determinado factor de crecimiento.
 Auxótrofos: microorganismos que requieren del agregado
de un factor de crecimiento al medio de cultivo.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 Todas las bacterias requieren cantidades de un cierto


nùmero de iones inorgànicos. Ademàs del nitrògeno, el
azufre y el fòsforo, que estàn presentes como
constituyentes de compuestos biològicos importantes, el
potasio, el magnesio y el calcio aparecen en las bacterias
asociados de forma funcional con ciertos polìmeros
aniònicos.
 Tambièn se ha demostrado para la mayor parte de los
microorganismos la necesidad de hierro, manganeso, zinc,
cobre y cobalto.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

Sobre la base de sus requerimientos de oxìgeno las bacterias


pueden ser divididas en cinco grupos:
 Anaerobios obligados: multiplican sòlo en condiciones de
alta intensidad reductora, para ellos el oxìgeno es tòxico.
 Anaerobios aerotolerantes: no son destruidos por
exposiciòn al oxìgeno.
 Anaerobios facultativos: son capaces de desarrollarse en
condiciones de aerobiosis y de anaerobiosis.
 Aerobios obligados: requieren oxìgeno para su crecimiento

 Microaeròfilos: se multiplican mejor en tensiones de


oxìgeno bajas, las tensiones altas tienen un efecto
inhibidor.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 En los anaerobios obligados y aerotolerantes el


metabolismo es estrictamente fermentativo.
 No obstante en los anaerobios facultativos se emplea una
forma de metabolismo respiratorio cuando se encuentra
oxìgeno disponible, pero en su ausencia se produce
fermentaciòn.
 Cuando se cultivan microorganismos en presencia de aire
tienen lugar una serie de reacciones enzimàticas cuyo
resultado es la producciòn de peròxido de hidrògeno y del
radical superòxido. En los aerobios y en los anaerobios
aerotolerantes y facultativos la enzima superòxido
dismutasa impide la acumulaciòn del iòn superòxido pero
en el anaerobio obligado esta enzima està ausente.
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 El peròxido de hidrògeno formado en la reacciòn de la


dismutasa es destruido con rapidez por la enzima catalasa
que està presente en los aerobios y en los anaerobios
facultativos.
 Ademàs de las bacterias quimiolitòtrofas y fotolitòtrofas que
emplean CO 2 como fuente principal de carbono celular, las
quimioorganòtrofas tambièn presentan exigencias de un
suministro adecuado de CO 2 para una fijaciòn heterotròfica
de èste y para la sìntesis de àcidos grasos.
 Algunos microorganismos como la Neisseria y la Brucella
requieren una concentraciòn màs elevada de CO 2 (10%)
para su desarrollo que la que habitualmente està presente
en la atmòsfera (0.03%).
REQUERIMIENTOS PARA EL DESARROLLO

 REQUERIMIENTOS FISICOS
 Para cada bacteria existe una temperatura òptima en la
cual el microorganismo se desarrolla en forma màs ràpida y
un espectro de temperatura en la cual el desarrollo puede
producirse.
 Las bacterias se dividen en tres grupos sobre la base de los
espectros de temperatura en los cuales se pueden
desarrollar: psicròfilas, -5 a 30ºC, òptima 10 a 20ºC;
mesòfilas, 10 a 45ºC, òptima 20 a 40ºC; termòfilas, 25 a
80ºC, òptima 50 a 60ºC.
 Para la mayor parte de las bacterias patògenas el ph
òptimo es 7.2 a 7.6.
 Los microorganismos fermentadores presentan un espectro
mayor de valores de ph dentro de los cuales se produce su
crecimiento que los m.o. que emplean vìas respiratorias.
CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
 Cuando una célula bacteriana se coloca en un medio
nutricionalmente complejo aumenta de tamaño y con el
tiempo se divide para formar dos células. Esto prosigue, lo
que da lugar a una población de células no diferenciadas.
 En el desarrollo de un cultivo bacteriano se produce un
aumento de la masa celular y del número de
microorganismos, pero no existe una relación constante
entre los dos parámetros, por consiguiente es necesario
diferenciar entre la concentración celular, o sea el número
de células por unidad de volumen de cultivo y la densidad
bacteriana, que se define como el protoplasma total por
unidad de volumen.
CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
 DETERMINACION DE LA MASA BACTERIANA
 Se puede determinar directamente en terminos de peso
seco.
 El método más difundido para la estimación de la biomasa
total en suspensión es la medición de la densidad óptica de
un caldo de cultivo en un espectrofotómetro.
 DETERMINACION DEL NUMERO DE CELULAS
 Se puede determinar por un recuento total directo o por un
recuento viable indirecto.
 Para la determinación del número de bacterias viables es
necesario plaquear una muestra del cultivo.La población
microbiana se diluye en un diluyente no tóxico y se
dispersa una alicuota de la población diluida en un medio
sólido adecuado, de manera que después de un período de
incubación cada unidad viable forme una colonia.
CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
 El número de individuos o agregados viables originalmete
presentes, se determina a partir del recuento de colonias y
de la dilución.
 SISTEMAS DE CULTIVO BACTERIANO
 Cuando un medio adecuado se inocula con bacterias y se
toman muestras pequeñas a intervalos regulares, la
representación gráfica de los datos dará una curva de
crecimiento característica. Las variaciones de la pendiente
en un gráfico de este tipo indican la transición de una a otra
fase del desarrollo. Los logaritmos en base 2 son los más
útiles, ya que cada unidad en la ordenada representa una
duplicación de la población.
CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
 La curva de crecimiento bacteriano se puede dividir en
cuatro fases principales: fase de latencia, fase del
crecimiento exponencial, fase estacionaria y fase de
declinación. Estas fases reflejan el estado fisiológico de los
microorganismos en el cultivo en cada momento particular.
 Fase de latencia: después de la inoculación se produce un
incremento en el tamaño de la célula en un momento en el
cual la división celular es escasa o nula. Durante esta fase
hay un marcado aumento de los componentes
macromoleculares, de la actividad metabólica y de la
susceptibilidad a los agentes químicos y físicos.
 Fase de crecimiento exponencial: en la fase exponencial o
logarítmica las células se encuentran en un estado de
desarrollo equilibrado. Durante este estado la masa y el
volumen de las células aumentan y las células se dividen a
una velocidad constante determinada.
CRECIMIENTO DE POBLACIONES
BACTERIANAS
 El tiempo de duplicación para cultivos de E coli en caldo a
37°C es de alrededor de 20 minutos, comparado con un
tiempo de duplicación mínimo de alrededor de 10 horas
para las células de mamíferos mantenidas a la misma
temperatura.
 Fases estacionaria y de declinación: cuando se emplean las
condicones de cultivo de rutina la acumulación de productos
de desecho, el agotamiento de los nutrientes y la variación
del ph ejercen un efecto nocivo sobre el cultivo, lo que
produce una disminución de la velocidad del crecimiento.
Durante la fase estacionaria el recuento de las células
viables se mantiene constante durante un período variable
pero que con el tiempo lleva a un período en que disminuye
la población. Las células en un cultivo que está muriendo
aparecen elongadas, henchidas o distorsionadas.
CICLO DE LA CELULA BACTERIANA

 Las cèlulas en desarrollo estàn destinadas a dividirse. Su


ìndice de crecimiento, y por lo tanto la frecuencia con que
se dividen, depende de la especie y de las condiciones
ambientales. Dentro de un perìodo corto, con frecuencia de
sòlo 20 minutos, una bacteria puede crear un duplicado
completo de sì misma, el que a su vez es capaz de
duplicarse.
 En las bacterias la replicaciòn cromosòmica es un proceso
bidireccional que implica dos horquillas de replicaciòn que
se mueven en direcciones opuestas alrededor del
cromosoma.
CICLO DE LA CELULA BACTERIANA

 En una E coli con un tiempo de generaciòn de 60 minutos


se requieren alrededor de 40 minutos para que una de
estas horquillas de replicaciòn recorra una mitad del
cromosoma. Debido al desplazamiento simultàneo de las
dos horquillas, es posible lograr una duplicaciòn completa
de la molècula de DNA durante este perìodo de 40 minutos.
 La divisiòn celular ocurre unos 20 minutos despuès de que
se ha completado cada ronda de replicaciòn. Durante este
perìodo de 20 minutos no hay una nueva replicaciòn del
cromosoma. La replicaciòn se inicia a los 60 minutos
cuando la cèlula ha alcanzado el doble de su uindad de
masa inicial.