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ESCUELA PROFESIONAL DE

INGENIERIA ALIMENTARIA

Microbiología (Practica)
Docente: Ing. Nilda Quispe Alvarado

Integrantes:
Perez Vilches Albert Joham.
Vasques Diaz Cristian.
Quispe Perez, Gabriela
PRACTICA N° 4
Cultivo de Microorganismos
Métodos de siembra.
OBJETIVOS

• Aprender los principales métodos de siembra


utilizados en el cultivo de microorganismos.

• Conocer los medios de cultivo de uso general,


diferenciales y selectivos.

• Conocer las condiciones de incubación.


INTRODUCCION
• Un cultivo es el proceso
por el cual se promueve el
crecimiento en el
laboratorio de estos
diminutos seres vivos
(microorganismos) , la
siembra de cultivos es
empleado como un método
fundamental para el
estudio de las bacterias y
otros microorganismos.
MARCO TEORICO:
• Un microorganismo se
puede sembrar en un
medio líquido o en la
superficie de un medio
sólido de agar. Los medios
de cultivo contienen
distintos nutrientes que
van, desde azúcares
simples hasta sustancias
complejas como la sangre
o el extracto de caldo de
carne.
MEDIOS DE CULTIVO:
• Medios Líquidos o caldos de cultivo :
Son los que una vez preparados se
mantienen en estado líquido. Suelen
utilizarse para realizar la suspensión de
disolución de la muestra a analizar con el
fin de conseguir la disolución madre.
Pueden presentarse en bolsas de 5
litros, en frascos de 250 ml, o en tubos
de un solo uso.

• Medios sólidos: Contiene un agente


espesante, por lo general agar a una
concentración del 1,5 %. El agar es un
derivado de algas. Es sólido a
temperaturas inferiores a los 40º 45.
•Medios semisólidos:

Tienen una consistencia


intermedia entre la de los
anteriores Suelen
contener una
concentración de agar
del 0,7 %.Tal como
hemos apuntado, la
mayoría de los medios
de cultivo se compran
hoy en día
ya preparados.
METODOS DE SIEMBRA:
• A) EN PLACAS:
* Técnica: estría simple:
es la ejecución de líneas
con la ayuda de un asa
bacteriológica en
horquilla introduciendo
ésta al inoculo
preparado, en la
superficie del medio de
cultivo (AGAR) para
obtener colonias
aisladas.
• B) EN TUBOS:
* Técnica: picadura profunda
(aplicada con asa B en
punta)
* Técnica: homogenización
(aplicada con asa B en
horquilla)
* La técnica se realiza
introduciendo el asa con
firmeza hasta lo profundo del
tubo de ensaye.
Luego del sembrío en tubos
se procede a tapar con un
tapón de algodón.
• C) MÉTODOS DE
SIEMBRA POR ESTRÍA EN
PLACA:
* Es el método más fácil y
más usado para obtener
cultivos axénicos.* Con un
asa de siembra se toma una
muestra de la población
mixta y a continuación se
hacen estrías sobre la
superficie de un medio
sólido, preparado en una
placa Petri conforme se van
haciendo estrías con la
superficie de un medio
sólido en forma de zigzag
con el asa.
]
PARTE EXPERIMENTAL
MATERIALES EQUIPOS Y
REACTIVOS
•Espátula
•Balanza de
torsión
•Papel Kraft
•Balones
•Probetas
•Vasos de
precipitado
•Encendedor
•Gradillas
•Tubos de
ensayo
•Mechero
Fisher
•Mechero
bunsen
•Autoclave
•Agua
destilada
•Agar
tripticasa
de soya
•Agar TSI
(con hierro
y tres
azúcares)
•Caldo
nutritivo
PROCEDIMIENTOS
1000ml de
•Solución Salina Peptonada PCA Sol.salina
peptonada
MEZCLA EN BALON
1. Añadir H2O destilada en 100ml de PCA
una probeta de 200 ml con
PCA.
2. Añadir a un balón 1000 ml DISTRIBUCION 2 matraces de
450ml y 2 tubos
de solución salina DEL CONTENIDO de ensayo de 9
Peptonada. ml
3. En el balón se había
agregado 100 ml del PCA ACONDICIONAMIE
(Play Count agar). NTO
4. Se distribuye el contenido
del balón en 2 matraces de
450 ml cada uno, y dos ESTERILIZACIÓN
tubos de ensayo de 9 ml
cada uno.
5. Se acondiciona para su
posterior esterilización en
autoclave.
•Caldo Nutritivo

1. Llenar 100ml de agua


destilada en una
probeta
2. Pesar en la balanza 2g
de caldo nutritivo (C.N)
ya que en etiqueta la
proporcion era 20g/1L
3. Acondicionar
mezclando el contenido
en un balon y tapar con
algondon.
4. Llevar a 20 tubos de
ensayo con 5ml de
contenido c/u.
5. Llevar a esterilizar
poniendo los tubos en
un envase de metal
rotulado.
• Agar Nutritivo
1. Llenar 100ml de agua
destilada en una
probeta.
2. Pesar 2.3 gramos en la
balanza ya que en
etiqueta la proporción es
de 23g/1L.
3. Acondicionar mezclando
el contenido en un balón
y tapar con algodon.
4. Llevar a la llama azul del
mechero hasta leve
ebullición.
5. Repartir la mezcla en 20
tubos de ensayo de 5ml
c/u con tapa rosca.
6. Llevar a un envase de
metal rotulado y
esterilizar.
•Caldo Lactosado Verde Bilis Brillante

1. En una probeta llenar


200ml de agua destilada.
2. En una balanza pesar 8g de
caldo BRILLA ya que en
etiqueta la proporción era
40g/1L.
3. Acondicionar en un balón y
mezclar.
4. Llevar a 22 tubos de
ensayo de 9ml c/u con una
campana Durham ya en el
interior y tapar con
algodón cada tubo.
5. Llevar a un envase de
metal rotulado y esterilizar.
•Agar Nutritivo

1. En una probeta
llenar 600ml de agua
destilada.
2. Pesar en una
balanza en dos
partes 6.9 g de A.N.
ya que en etiqueta la
proporción es de
23g/1L.
3. Repartir en dos
balones 300ml de
agua destilada y
mezclar con el A.N y
tapar con algodon.
4. Llevar a la llama del
mechero y mover
hasta homogenizar.
5. Dejar enfriar rotular
y llevar al autoclave.
•Agar Saboruod
Dextrosa (ASD)

1. En una probeta llenar


300ml de agua destilada.
2. Pesar 19.5g de ASD ya
que en etiqueta la
proporción es de 65g/1L.
3. Llevar a un balon el
agua y el ASD y
homogenizar llevando a
llama del mechero hasta
ebullición leve.
4. Dejar enfriar, rotular y
llevar al autoclave.
DISCUSION:
• Según Luis Roberto Alarcón en su obra
Manual de practicas de Microbiología básica
y Microbiología de alimentos en un ejemplo
con el cultivo tripticasa-agar-soya, según
instrucciones de etiqueta decia tape con
algodón y un gorro de papel. Esterilice con
calor húmedo en autoclave a 121ºC y 15lb de
presión durante 15 minutos.
• En la practica no se conoció la presión a la
que estaba el autoclave ya que el manómetro
estaba malogrado pero si se dejo por 15
minutos la esterilización.
CONCLUSIONES:
• Se aprendió que los principales cultivos de microorganismos
es en medio liquido, los caldos nutritivos y en medio sólido ,el
agar.
• Se aprendió que para diseñar un medio de cultivo se debe
tener en cuenta no sólo los nutrientes requeridos por el
microorganismo que se desea estudiar, sino también las
condiciones físicas que le permitan crecer (temperatura, pH,
etc.)
• Se aprendió que un cultivo microbiano que ha estado
creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz, debe
ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el
crecimiento y sobrevivencia no pueden continuar
TAREA
1. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO:
Se almacena a corto plazo un cultivo bacteriano
por congelación.
A largo plazo se puede almacenar por:
• Ultra congelación:
• Proceso en donde se coloca un cultivo puro
de microbios suspendido liquido y se congela
rápidamente de -50ºC a 95ºC.
• El cultivo pude descongelarse y cultivarse
incluso varios años después.
• Liofilización (Congelación-desecación):
• La suspensión de microbios se congela
rápidamente a temperaturas entre -54ºC a -
72ºC y el agua se elimina por vacío elevado
(sublimación).
• Mientras se produce el vacío el recipiente se
sella fundiendo el vidrio con un soplete a
alta temperatura.
2. DEFINICION DE CADA
INGREDIENTE DE LOS MEDIOS
• Agar-agar:
DE CULTIVO
• Es un polisacárido sin ramificaciones obtenido de
la pared celular de varias especies de algas de
los géneros Gelidium, Euchema y Gracilaria,
entre otros, resultando, según la especie, de un
color característico.
• Químicamente, el agar es una mezcla
de heterogénea de dos clases de
polisacáridos: agaropectina y agarosa. Aunque
ambas clases de polisacáridos comparten el
mismo esqueleto degalactosa, la agaropectina
está modificada con grupos ácidos, tales
como sulfato y piruvato.
• El agar nutritivo es usado como medio de cultivo
para el crecimiento de bacterias y hongos, pero
no para virus (aunque los
virus bacteriófagos crecen frecuentemente en
bacterias cultivadas en agar).
• Peptonas:
• Son polipéptidos formados durante
la degradación enzimática de proteínas.
• Son la principal fuente de nitrógeno en el
medio orgánico para
el cultivo de bacterias,
contienen aminoácidos libres y cadenas
cortas de péptidos, ciertas vitaminas y a
veces carbohidratos.
• Es soluble en agua e insoluble en etanol
y éter.
• Para uso en laboratorio, la peptona se
presenta como un polvo amorfo, o bien
como escamas o masas irregulares,
esponjosas, de color blanco amarillento o
amarillo parduzco; con olor característico
que recuerda al de la carne asada; de
sabor amargo (peptona pancreática) o
amargo y salado (peptona pépsica). Es
muy higroscópica y por tanto se altera
con facilidad en contacto con aire
húmedo.
• Sistemas amortiguadores (soluciones tamponadas):
• Algunos componentes son incorporados al medio de
cultivo para mantener el pH dentro del parámetro optimo
del crecimiento bacteriano.
• Los microorganismos mas comunes son neutrófilos (el pH
optimo para su crecimiento esta próximo a la neutralidad
y sales como fosfatos bi sódicos o bi potásicos, o
sustancias como las peptonas previenen variaciones en
el pH del cultivo.
• Extractos:
• Para su preparación ciertos órganos o tejidos animales o
vegetales como (carne de hígado, cerebro, semillas) son
extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados
hasta la forma final de pasta o polvo.
• Estos preparados deshidratados se emplean con
frecuencia en la confección de medios de cultivo.
• Ejemplos:
• Extractos de carne, levaduras de malta, etc.
• Fluidos corporales:
• Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o
suero sanguíneo frecuentemente añadido a los
medios empleados para el cultivo de algunos
patógenos. La sangre no puede esterilizarse y
debe, por tanto obtenerse en condiciones
asépticas directamente de un animal sano. Los
fluidos corporales no solo contribuyen con
factores de crecimiento, si no también con
sustancias que neutralizan inhibidores del
crecimiento de algunas bacterias.
• Indicadores de pH:
• Indicadores acido-base se añaden a menudo a
los medios de cultivo para detectar variaciones
del pH.
3. CONCEPTOS
IMPORTANTES:
• Medios de cultivo: es un conjunto de
nutrientes y factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de
microorganismos.
• Fuente de carbono y sales: en muchos casos
la glucosa, lactosa u otras dextrosas se
emplean como fuente de carbono. Algunos
medios de cultivo se complementan con
sales como el NaCl o diversos fosfatos y/o
sulfatos de potasio, magnesio, amonio, etc.
• Agentes reductores:
• Cisteína, tioglicolato y otros son agentes
reductores que se añaden a los medios de
cultivo para crear condiciones que permitan el
desarrollo de microorganismos microaerofilos o
anaerobios.
• Agentes selectivos:
• La adición de determinadas sustancias al medio
de cultivo puede convertirlo en selectivo.
• Ejemplos:
• Cristal violeta, sales biliares, azida sódica,
telurito potásico, antibióticos, etc. Ala cantidad
adecuada actúan como agentes selectivos
frente a otros microorganismos.
• Tipos de medio de cultivo:
 Medios generales:
Se desarrollan gran variedad de microorganismos.
 Medios de enriquecimiento:
Favorece el crecimiento de un determinado tipo de
microorganismo, no inhibe totalmente el crecimiento
del resto.
 Medios selectivos:
Permite el crecimiento de un tipo microbiano
determinado, inhibe el desarrollo de los demás.
 Medios diferenciales:
Son aquellos en los que se pone de relieve
propiedades que posee un determinado tipo de
microorganismo.
BIBLIOGRAFIA:

Gerard J. Tortora,Berdell R. Funke,Christine L.


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