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MICROBIOLOGIA
ALUMNO:
JANDER VELA MONTENEGRO
MEDIOS DE
CULTIVO
REQUERIMIENTOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Requerimientos energéticos y no energéticos
Las bacterias son cultivables en medios artificiales de laboratorio de tal forma que el medio
de cultivo le proporciona los elementos necesarios para su crecimiento y multiplicación. De
acuerdo con esto, siempre se requerirá una fuente de energía y una fuente no energética
como son las sales, factores de crecimiento, etc., que sin proporcionar energía son necesarias
para su desarrollo.
Los requerimientos energéticos son los nutrientes de ese medio de cultivo, que va a ser
utilizado por la bacteria para su crecimiento. Van a ser fuentes de energía en un medio de
cultivo, al menos, una fuente de carbono y una fuente de nitrógeno, y fuentes no energéticas
pueden ser una fuente de fósforo, determinados iones como el hierro, el potasio, el sodio, el
zinc, el magnesio, etc.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Entre los requerimientos energéticos de los medios
de cultivo tenemos:
• 1. Fuente de Carbono
• 2. Fuente de Nitrógeno
1. Fuentes de carbono
Existen muchos tipos de fuentes de carbono, ya que
esto está ligado al metabolismo energético de la especie
microbial.
En la mayor parte de los casos, la fuente de carbono
corresponde a azúcares en forma de mono o
disacáridos, como glucosa, lactosa, maltosa, etc.,
Incluso hay microorganismos que pueden utilizar
azúcares más complejos para obtener energía, como es
el caso del almidón.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Fuentes de carbono
Existen también bacterias capaces de utilizar el
gas carbónico CO2 hecho que es característico
de las bacterias fotosintetizantes y
quimiolitótrofas.
Otros microorganismos pueden crecer a
expensas del metano, benceno e, incluso,
hidrocarburos como fuente de energía: Ejemplo:
Cladosporium.
Por último, existen especies como Pseudomonas,
que pueden utilizar como fuente de energía un
gran número de componentes hidrocarbonados
diferentes.
En general, conocer el tipo de azúcar utilizado
por cada bacteria es muy útil para su
identificación bioquímica y consiguiente
clasificación taxonómica.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
2. Fuente de nitrógeno
Es una fuente bastante menos energética que la fuente de carbono
pero es necesaria para el metabolismo microbiano, produciendo
también energía.
Esta fuente de nitrógeno la van a formar las proteínas, péptidos o
aminoácidos. Pueden presentarse como proteínas completas, que
sería el caso de la gelatina cuya presencia sirve para determinar la
actividad proteolítica o gelatinasa del microorganismo problema, o
incluso proteínas aún más complejas, como es el caso de los
extractos de carne, sales de amonio, etc.
REQUERIMIENTOS ENERGETICOS
Fuente de nitrógeno
Existen muchos tipos de peptonas y son excelentes fuentes de
nitrógeno.
Entre las más frecuentes y conocidas se encuentran los extractos
de levadura que son extractos hidrosolubles preparados a partir
de un lisado de levadura que se utiliza en muchos medios de
cultivo.
2. Fuente de fósforo
En general, las bacterias que utilizan el fósforo lo suelen hacer
en forma de fosfatos.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
3. Iones metálicos
Son utilizados por las bacterias bajo la forma de iones a
concentraciones muy bajas. Por ej: el Sodio, el Potasio,
Magnesio, Hierro,etc.
.
Estos iones son esenciales para el crecimiento
microbiano y dependiendo de su concentración pueden
inhibir el crecimiento de otros
Agar Manitol Salado contienen 7.5% ClNa permite el
crecimiento de Staphylococous.
Agar Streptococus KF contiene 6.5% ClNa permite el
crecimiento del Enterococus.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
4. Factores de Crecimiento
.
Existen bacterias que son muy exigentes. A este tipo de bacterias les hace falta
además una serie de componentes definidos que muchas bacterias no son capaces de
fabricar por sí solas para su crecimiento.
A este tipo de componentes se denomina factores de crecimiento y van a
corresponder a algún tipo de aminoácido incluso vitaminas, bases púricas o
pirimidinicas, etc.
Agar sangre enriquecido con metionina, ácido glutámico y ácido nicotínico para el
crecimiento de Xanthomonas.
AGAR CHOCOLATE
HAEMOPHYLLUS
BORDETELLA
Agar Sangre enriquecido con
Glicerol - papa (Bordet Gengou)
para crecimiento de Bordetella
pertusis.
Se observa colonias en “gotas de
mercurio” brillantes es fácil de
apreciar.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
5. Factores de Arranque
Son sustancias que van a permitir a la
bacteria en estudio, salir de su fase de
latencia y comenzar su fase de
crecimiento exponencial.
Son fundamentalmente fuentes de
energía ”glucosa” que es utilizado por
las bacterias.
Un factor de arranque puede ser una
fuente no energética como algún ión
que estimule el crecimiento.
REQUERIMIENTOS NO ENERGETICOS
DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
6. Factores Inhibidores
Son componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo de microorganismo
por bloqueo de sus procesos metabólicos.
Los antibióticos son agentes inhibidores o destructores de la propia bacteria.
La azida sódica inhibe el crecimiento de los Gram negativos.
Algunos colorantes : Eosina Azul de metileno impide el crecimiento bacteriano de
los Gram positivos.
Cristal Violeta impide el crecimiento de los Gram positivos.
Agar Mac Conkey :
Agar Eosina Azul de Metileno
Agar Salmonella Shigella
Agar Verde brillante
E.
C
O
LI
M
ac
C
O
N
K
AGAR EOSINA AZUL DE METILENO
4. SEGÚN SU PRESENTACIÓN
MEDIOS DE CULTIVO
SEGÚN SU CONSISTENCIA
1. Medios sólidos.
2. Medios líquidos.
3. Medios semisólidos
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Corresponden a aquellos medios donde la proporción en
agar está siempre por encima del 1.5% a 2% . Koch utilizó, en
1881, por primera vez la gelatina para obtener un medio
sólido.
La importancia, pues, de los medios sólidos es muy grande, ya
que nos permite el aislamiento, purificación y visualización de
su crecimiento en colonias, así como su posible identificación
a través de medios específicos y diferenciales de caracteres
sólidos, elaboración de antibiogramas, etc.
POR SU CONSISTENCIA
1. MEDIOS SOLIDOS.
Agar Sangre, observar la morfología de las colonias y el tipo
de hemolisis.
Agar Mac Conkey, los diferentes tipo de colonias de acuerdo
al consumo de lactosa.
Agar Mueller Hinton, prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos.
AGAR MAC CONKEY
AGAR SANGRE
HEMOLISIS
Los Streptococcus se clasifican en base a su
propiedades hemolíticas en agar sangre.
La hemolisis parcial de los eritrocitos da como un
resultado un color verdoso del medio sólido que
rodea las colonias (alfa-hemolisis).
Los que producen hemolisinas que lisan los
eritrocitos, produce un aclaramiento del medio
que rodea las colonias (beta-hemolisis).
Gama-hemolisis no presenta hemolisis.
AGAR SANGRE
ANTIBIOGRAMA
Se basa en la difusión del
antibiótico sobre el agar, y
determinar la sensibilidad
(formación de halo alrededor del
antibiótico) y/o resistencia
(crecimiento alrededor del
antibiótico).
POR SU CONSISTENCIA
2. MEDIOS LIQUIDOS.
Corresponden a los que también se denominan caldos, no
contienen agar y su composición, además de agua suele
contener al menos una fuente de carbono, sales minerales, y,
en algunas ocasiones según las características del medio,
factores de crecimiento, vitaminas, peptonas, ciertos
aminoácidos, etc.
Caldo MR-VP, Medio utilizado para la realización del ensayo
de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de
enterobacterias.
Caldo Peptona, para investigar la producción de Indol y
como enriquecimiento.
Caldo Lactosado, para investigar la formación de ácido y gas
POR SU CONSISTENCIA
3. MEDIOS SEMISÓLIDOS.
Son medios intermedios entre los medios líquidos y los sólidos donde su proporción
en agar suele ser al 0.5% pero siempre suelen presentar una cierta cantidad que le
proporcione una consistencia semisólida.
Son útiles para ciertas pruebas bioquímicas como por ejemplo, la prueba de
oxidación- fermentación, que permiten conocer el tipo de metabolismo oxidativo o
fermentativo de la bacteria problema.
Agar O-F Hugh Leiffson
Agar SIM, estudiar movilidad, Producción de H2S, Indol.
Agar MIO, estudiar movilidad, Producción de Indol y Ornitina.
SIM
1. MEDIOS DESHIDRATADOS
Son medios que se comercializan tal cual y una
vez en el laboratorio deben ser preparados
adicionando la cantidad de agua
correspondiente en condiciones totalmente
asépticas o una vez preparados en estas
condiciones lo esterilizaríamos en el autoclave.
Su composición es muy variable y puede ser de
tipo básico o más complejo.
POR SU PRESENTACION
2. MEDIOS YA PREPARADOS
Son medios que han sido elaborados por las casas
comerciales presentando un determinado control de calidad
y características específicas adecuadas a cada tipo de
cultivo. Este tipo de medios pueden presentarse en forma de
placas, en tubo, como formas sólidas, en frascos, como
medios semisólidos o líquidos, en sistemas de doble fase, etc.
POR SU PRESENTACION
A. Medios enriquecidos
Son medios a los cuales, como su nombre indica, se les añade
ademas de los componentes básicos, uno o varios elementos,
como por ejemplo caseína soja, triptófano, etc., que facilitan
el crecimiento de algún tipo de microorganismo
generalmente exigentes, lo que nos permite aislar el
microorganismo que buscamos.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
B. Medios selectivos
Son medios en cuya composición presentan algún componente o
componentes que van a impedir el crecimiento de algún tipo
bacteriano, estableciendo con ello una selección en el tipo de
microorganismo que sí puede crecer; por ejemplo, el medio
Rothe se caracteriza porque en su composición aparece azida
sódica confiriendo al medio propiedades selectivas ya que tal
componente va impedir el crecimiento de todas las bacterias
Gramnegativas, permitiendo el crecimiento de algunas
Grampositivas como Streptococus faecalis.
Medio Salmonella Shigella, contiene en su composición sales
biliares, citrato de sodio y el verde brillante que inhibe a la flora
Grampositiva y los hacen con el grupo coliforme.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
C. Medios diferenciales
Corresponden a aquellos medios que presentan las mismas propiedades que los
medios selectivos, es decir, tienen componentes que inhiben el crecimiento de
algunas bacterias y, lo que es más característico de este medio, presentan sustancias
que al ser utilizadas, o no, por las bacterias que van a crecer en dicho medio, dan
una información suplementaria y específica, es decir, diferencial; por ejemplo:
El medio Levine (EMB) es te medio presenta en su composición eosina y azul de
metileno que inhibe el crecimiento de los Gram positivos y algunas Gram
negativas, facilitando el crecimiento de la enterobacterias, que según utilicen o no
la lactosa darán lugar a una coloración característica para cada tipo de
microorganismo.
Los medios diferenciales suelen ser también selectivos y se usan con fines de
aislamiento e identificación.
POR SU USO O UTILIZACIÓN
1. Medios naturales.
2. Medios semisintéticos.
3. Medios sintéticos.
4. Medios complejos.
POR SU COMPOSICIÓN QUE
PRESENTAN
2. MEDIOS SEMISINTETICOS
1. COMPOSICION
Fosfato monopotásico 4.0 g
Sulfato de magnesio 0.4 g
Citrato de magnesio 1.0 g
Asparragina 6.0 g
Glicerol 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. PREPARACION
Disolver los ingredientes y hervir durante 2 horas. Luego añadir
50 g de almidón de papa.
Cascar 5 huevos en condiciones asépticas en un matraz y con
ayuda de perlas de vidrio.
Agregar 50 ml de verde malaquita en solución al 2%
Distribuir en condiciones asépticas en tubos con tapa de rosca y
dejar solidificar.
3. FINALIDAD
Permitir el crecimiento del Mycobacterium.
INFUSION CEREBRO CORAZON
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g
Infusión corazón de res 25.0 g
Peptonas 10.0 g
Fosfato disódico 2.5 g
Glucosa 2.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agua destilada 1000 ml
2. FINALIDAD
Permite el crecimiento de microorganismos considerados muy dificiles de
cultivar, en él los gérmenes mantienen su virulencia , antigenicidad y otras
características serológicas.
AGAR NUTRITIVO
1. COMPOSICION
Peptona 17.0 g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agar - Agar 12.5 g
Agua destilada 1000 ml
1. COMPOSICION
Peptona de caseína 17.0 g Rojo neutro 0.03 g
Peptona de carne 3.0 g Cristal violeta 0.001 g
Lactosa 10.0 g Agar - Agar 12.5 g
Sales biliares 1.5 g Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
TIPO DE COLONIAS
Superficie de agar Mac Conkey con desarrollo de colonias a las 24 horas.
Se observa colonia rojas fermentadoras de lactosa, el color rojo se debe a que el microorganismo produce
grandes cantidades de ácido mixtos.
Se observa colonias no fermentadoras de lactosa, son colonias pequeñas y transparentes.
AGAR MAC CONKEY
AGAR TCBS
1. COMPOSICION
Peptona de caseína 5.0 g Citrato de sodio 10.0 g
Peptona de carne 5.0 Tiosulfato de sodio 10.0 g
Bilis de buey desecada 5.0 Colato de sodio 3.0
Sacarosa 20.0 Citrato hierro (III) 1.0
Cloruro de sodio 10.0 Azul de timol 0.04
Agar-agar 14.0 Azul de Bromotimol 0.04
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR TCBS
Las colonias amarillas, se deben a la
utilización del citrato y a la formación
de ácido por la utilización de la sacarosa
del medio.
Vibrio Cholerae.
V. Algynolyticus
V. Cincinatiensis
V.fluvialis
V. Furnisii
V. metsnichnikovii
1. COMPOSICION
Extracto de carne 5.0 g Citrato de fierro amoniacal 1.0 g
Proteosa peptona 5 Verde brillante 0.0003
Lactosa 10 Rojo neutro 0.025
Bilis de buey 8.5 Agar-agar 13
Citrato de sodio 8.5 Agua destilada 1000 ml
Tiosulfato de sodio 8.5
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR SALMONELLA SHIGELLA
El agar SS es un medio altamente selectivo, que inhibe el desarrollo de la mayoría de los
coliformes y permite el crecimiento de Salmonella y Shigella.
La alta concentración de sales biliares y citrato de sodio inhibe a todas las bacterias Gram
positivas y muchas Gram negativas, incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el único carbohidrato y el rojo neutro detecta la producción de ácido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S, permitiendo la detección del H2S por el
precipitado negro formado con el citrato férrico.
Colonias incoloras, son no fermentadores de lactosa y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias fermentadoras de lactosa se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son no fermentadores de lactosa y H2S (+), Proteus,
Salmonella.
AGAR SALMONELLA SHIGELLA
AGAR MANITOL SALADO ROJO FENOL
1. COMPOSICION
Extracto de carne 1.0 g Agua destilada 1000 ml
D-Manitol 10 g Agar agar 15 g
Peptona 10.0 Rojo fenol 0.025 g
Cloruro de sodio 75 g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
• A. INTRODUCCION
• La configuración del medio en pico de flauta (Pico y
Fondo) determina la existencia de 2
compartimientos La porción inclinada, expuesta al
oxígeno atmosférico es aerobia.
• - La porción inferior llamada fondo esta protegida
del aire y es relativamente anaerobia.
• La porción expuesta al oxigeno (INCLINADA),
tiende a tornarse alcalina por la descarboxilación
oxidativa de proteínas, y se desarrolla un pH
alcalino y se vuelve rojo.
• En el fondo del tubo donde no hay oxígeno , la
degradación proteica es mínima y se pueden detectar
incluso pequeñas cantidades de ácido por la
aparición de un color amarillo.
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
• .
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
K/A Microorganismo no
fermentador de lactosa
• El microorganismo es
capaz de utilizar la glucosa
pero no a lactosa, por lo
cual produce una
pequeña cantidad de
ácido, ya que la
concentración del medio
es de 0.1% de glucosa, por
lo cual al comenzar a
degradarse las proteínas
del pico se comienza a
liberar aminas lo que da un
color rojo en el pico. En el
fondo del tubo la
degradación proteica es
insuficiente para
contrarrestar el ácido
formado y es de color
amarillo.
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
• Lactosa:
• Glucosa:
• CO2 ó Gas:
• H2S:
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
• Lactosa:
• Glucosa:
• CO2 ó Gas:
• H2S:
TRIPLE AZUCAR HIERRO
T.S.I.
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
• Lactosa:
• Glucosa:
• CO2 ó Gas:
• H2S:
AGAR LIA
1. COMPOSICION
Peptona 3.0 Tiosulfato de sodio
0.04 g
Extracto de levadura 3.0 gPúrpura de bromocresol
0.02g
Dextrosa 1.0 gAgar - Agar 15.0 g
Lisina 10.0 gAgua destilada
1000 ml
Citrato amonio férrico 0.5g
2. DESCRIPCION DEL MEDIO
A. Requerimiento energético:
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición
que presenta
F. Según su presentación
LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/k
Microorganismo:
Lisina (+)
Descarboxilacion (+)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
R/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (+)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
k/A
Microorganismo:
Lisina (-)
Descarboxilacion (-)
Desaminacion (-)
LISINA HIERRO AGAR
LIA
SIMBOLO:
INTERPRETACION:
• DESCARBOXILACION
DESAMINACION
• LISINA
• H2S
CALDO PEPTONA
1. COMPOSICION
Peptona 10.0 g
Cloruro de sodio 9 g
Agua destilada 1000 ml
REACTIVO DE KOVAC
Alcohol amílico o isoamílico puro 150 ml
p-dimetilaminobenzaldehido 10 g
HCl concentrado 50 ml
TECNICA:
Inocular el caldo peptonado e incubar a 37ºC por 24 horas. Luego
añadir 5 gotas del reactivo por la pared del tubo.
INTERPRETACION:
Positivo: El desarrollo de un color rojo fucsia en la interfase del
reactivo y el caldo, indica la presencia del indol.
INDOL
B. Requerimiento no energético
C. Según su proporción en agua
D. Según su uso o utilización
E. Según la composición que presenta
F. Según su presentación
AGAR S.I.M.
Este medio de cultivo permite comprobar la formación de sulfuro, la producción de
indol y observar la movilidad.
PRODUCCION DE H2S
MOVILIDAD
Los medios para detectar movilidad contienen
concentraciones de agar de 0.4% o menos. A
mayor concentración del gel es demasiado firme
como para permitir la diseminación de los
organismos.
La Motilidad se pone de manifiesto por la
turbidez difusa del medio de cultivo alrededor
del canal de la picadura.
INDOL
Después de agregar unas gotas del reactivo de
kovacs, si aparece un color rojo-cereza dela capa
del reactivo indica la presencia de Indol positivo.
I.M.V.I.C.
I N D O L
R O J O D E M E T I L O
V O G E S P R O S K A U E R
C I T R A T O D E S I M M O N S
I.M.V.I.C.
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
Indol:
Rojo de Metilo:
Voges Proskauer:
Citrato de Simmons:
INFUSION CEREBRO CORAZON (BHI)
1. COMPOSICION
Infusión cerebro de ternera 20.0 g Fosfato disódico 2.5 g
Infusión corazón de res 25.0 g
Glucosa2.0 g
Peptonas 10.0 g
Agua destilada 1000 ml
Cloruro de sodio 5.0 g
B. Requerimiento no energético
F. Según su presentación
AGAR XILOSA LISINA
DESOXICOLATO XLD
• Agar XLD con colonias de especies de
Enterobacterias fermentadoras de lactosa.
• Los hidratos de carbono son: Xilosa, Lactosa
y Sacarosa.
• El indicador es el rojo fenol.
• Las colonias que fermentan uno o más de
estos hidratos de carbono producen ácido,
son de color amarillo claro.
• Los microorganismos como Escherichia coli,
Klebsiella y Enterobacter pueden utilizar
más de un hidrato de carbono y forman
colonias color amarillo brillante.
ALMACENAMIENTO DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO