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Replicación

Objetivos

- Identificar las principales características de la replicación, así como,


las proteínas involucradas en el proceso.
Criterios de evaluación

- Define replicación, indicando las características más importantes del proceso.

- Enumera las enzimas y proteínas que participan en el proceso, indicando la función de


cada una de ellas.

- Explica el proceso de replicación para la hebra continua y discontinua, señalando las


diferencias más importantes.

- Señala específicamente los lugares de la célula donde ocurre el proceso.

- Señala en qué etapa del ciclo celular ocurre la replicación.

- Deduce los efectos esperados en la célula debido a alteraciones en la replicación del DNA.
Generalidades
El DNA se replica una vez en el ciclo celular.

Durante la fase S
Generalidades
Se duplica toda la
información genética de la
célula
Replicación del ADN
• Es el proceso necesario para que se realice la
división celular.
• Ocurre en la fase S del ciclo celular.
• El mecanismo de replicación se basa en la
complementariedad de bases.
• Inicialmente se plantearon tres posibles modelos
de replicación:
o Modelo conservativo
o Modelo dispersivo
o Modelo semiconservativo
Modelos de la replicación del ADN

CONSERVATIVO

DISPERSIVO

SEMICONSERVATIVO
Generalidades - Modelos
Demostración experimental
Meselson y Stahl, 1957
Consiste en cultivar la bacteria E. coli
en un medio que contenga nitrógeno
pesado (15Nitrógeno que es mas
pesado que el isótopo mas común: el
14Nitrógeno ).

La primera generación de bacterias


se hizo crecer en un medio que
únicamente contenía 15Nitrógeno

como fuente de N. La bacteria se


transfirió luego a un medio con 14N.
Watson y Crick habían pronosticado
que la replicación del DNA era
semiconservativa, de ser así el DNA
extraído de las bacterias luego de
cultivarlas por una generación en 14N
tendría un peso intermedio entre el
DNA extraído del medio con 15N y el
del extraído de medio con 14N y así
fue.
Replicación semiconservativa
Experimento de Meselson y Stahl
CONTROL (Centrifugación del ADN RESULTADOS DEL
conocido) 14 EXPERIMENTO
ADN N y
ADN 14N ADN 15N 1ª generación 2ª generación 3ª generación
ADN 15N

Descarta el modelo Descarta el modelo


conservativo dispersivo

INTERPRETACIÓN DEL EXPERIMENTO 3ª generación


Cultivo con 15N Cultivo con 14N 2ª generación
1ª generación
Replicación del ADN – Características generales
1. Proceso de duplicación del ADN mediante un modelo
semiconservativo.
2. Comienza en sitios específicos (orígenes de replicación)
3. El proceso de replicación es bidireccional
4. Las dos hebras nuevas se van alargando progresivamente, por
adición secuencial de nucleótidos
5. La replicación siempre se produce en sentido 5' → 3', siendo el
extremo 3'-OH libre el punto a partir del cual se produce la
elongación del DNA.
6. Como las dos hebras de ADN son antiparalelas, una de las hebras
se sintetiza de forma continua y otra de forma discontinua.
7. El proceso de duplicación está catalizado por las enzimas ADN
polimerasas (aunque intervienen muchas otras enzimas en el
proceso)
8. Hay una corrección de errores para asegurar la fidelidad de las
copias
Origen de replicación
Características

• Ocurre una sola vez en cada generación celular.

• La dirección de replicación es 5` a 3 `

• Es bidirecional

• La replicación del DNA en el ser humano ocurre a una velocidad de 50


nucleótidos por segundo, en procariotas a 500/segundo
.
• Comienza en el origen de la replicación.

• Requiere entre otras de:

– Las enzimas helicasas para romper los puentes hidrógeno


– Las topoisomerasas para aliviar la tensión
– Las proteínas de unión a cadena simple para mantener separadas las
cadenas abiertas.
Proteínas requeridas
DNA polimerasas
Replicación en procariotas

• El proceso de replicación de DNA es el mecanismo que permite


al DNA duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica).

• Esta duplicación se produce según el modelo semiconservativo,


lo que indica que las dos cadenas complementarias del DNA
original, al separarse, sirven de molde cada una para la síntesis
de una nueva cadena complementaria de la cadena molde.

• El proceso se ha estudiado en la bacteria E. Coli


• Consta de las siguientes fases:
1. Iniciación
2. Elongación
3. Terminación

• Durante la elongación se da una corrección de errores


http://highered.mcgraw-hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/bidirectional_dna_replication.html
Fase de iniciación
La replicación comienza en sitios específicos del ADN conocidos
como “origen de replicación” o región oriC.

Los orígenes de replicación son los puntos fijos que están


a partir de los cuales se lleva cabo la replicación, que
avanza de forma secuencial formando estructuras con
forma de horquilla.

1. Procariontes: Un origen de replicación.


2. Eucariontes: Múltiples orígenes de replicación.

El DNA se replica desenrollando la hélice


y rompiendo los puentes de
hidrógeno entre las hebras
complementarias.
El DNA se replica desenrollando la
hélice y rompiendo los puentes de
hidrógeno entre las hebras
complementarias.

Se forma la burbuja de replicación,


con dos horquillas de replicación,
que se van extendiendo en las dos
direcciones: replicación bidireccional

Comienza la fase de elongación.


Fases de la replicación: iniciación
Consiste en el desenrollamiento y apertura de la doble hélice de ADN

Ori C
Evitan las tensiones debidas a un superenrrollamiento
Girasa
Topoisomeras
Proteínas a
específicas

Proteínas SSB

Impiden que el ADN


se vuelva a enrollar

Helicasa
Las proteínas
específicas se
unen al punto La helicasa rompe los
de iniciación enlaces de hidrógeno Burbuja de
entre las bases y abre la replicación
doble hélice
Resumen
1. Reconocimiento del OriC por proteínas específicas
2. Las helicasas rompen los puentes de H
3. Las girasas y topoisomerasas alivian las tensiones del
desenrrollamiento.

4. Las proteínas SSB


evitan que se vuelvan a
unir las cadenas
sencillas y se enrollen
de nuevo
5. Formación de la
burbuja de replicación

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/dna_replication.html
Fase de elongación

Se sintetiza la nueva hebra de ADN sobre la hebra original.

Se debe a la actuación de las ADN polimerasas.

En procariotas hay tres y su función es doble:

1. Actividad polimerasa. Va uniendo los desorribonucleotidos


trifosfatos complementarios a la cadena original.

2. Actividad exonucleasa. Elimina nucleótidos mal emparejados y


trozos de ARN cebador
Actividad de las ADN polimerasas
Junto a las enzimas que participan en la iniciación, en esta fase
actúan las ADN polimerasas.

EXONUCLEASA POLIMERIZACIÓN
POLIMERASA INICIACIÓN
dirección función dirección función
elimina
5’ 3’
I cebador
5’ 3’ síntesis no
3’ 5’ reparación

II 3’ 5’ reparación 5’ 3’ síntesis no

III 3’ 5’ reparación 5’ 3’ síntesis no

• La ADN pol III crea la mayor parte del ADN nuevo.


• La ADN pol I elimina los cebadores y rellena los huecos.
• y la ADN pol II interviene en la corrección de errores.
La ADN polimerasa no puede actuar desde un principio, necesita un pequeño
fragmento sobre el que empezar a añadir nucleótidos.

Este primer fragmento es un trozo de unos 10 nucleótidos de ARN llamado


cebador o primer, que presenta el extremo 3’ libre

El primer es sintetizado por una ARN polimerasa o primasa, que actúa en la


zona donde comienza la replicación.

A partir de este fragmento, la ADN


polimerasa comienza la adición de
nucleótidos sobre el extremo 3’ libre.

Este enzima recorre la cadena


molde en sentido 3’5’ y sintetiza
la nueva cadena en sentido 5’3’
(las cadenas de ADN son
antiparalelas)
El mecanismo de elongación es distinto en las dos cadenas:

1. En una de las cadenas, la hebra conductora, la síntesis es


continua.

2. En la otra cadena, la hebra retardada, se produce una síntesis


a base de pequeños fragmentos de ADN (fragmentos de
Okazaki).

3. La síntesis de cada uno de los fragmentos de Okazaki necesita


de su cebador correspondiente (sintetizado por la primasa).

4. Los cebadores serán posteriormente eliminados por la ADN


polimerasa I que rellena el hueco con desoxirribonucleotidos.

5. Finalmente una ligasa une los fragmentos sueltos.


El mecanismo de elongación
La ADN polimerasa recorre las hebras molde en el sentido 3’-5’
uniendo los nuevos nucleótidos en el extremo 3’.
3’

5’
5’ Una de las hebras se
sintetiza de modo contínuo.
3’ Es la conductora o lider.
Fragmentos de
5’ Okazaki
3’ 3’
3’
5’ 3’
La ADN polimerasa necesita un
fragmento de ARN (cebador o
primer) con el extremo 3’ libre 5’
para iniciar la síntesis.

La otra hebra se sintetiza de modo


discontinuo formándose fragmentos que
se unirán más tarde. Es la retardada.
El mecanismo de elongación
La primasa sintetiza un cebador en Las ADN polimerasa comienzan la
1 cada hebra conductora de la burbuja de 2 síntesis de la hebra conductora por el
replicación. extremo 3’ de cada cebador.
Cebador

Primasas

Cebador
La ADN polimerasa comienza a
3 La primasa sintetiza un nuevo cebador 4 sintetizar un fragmento de ADN a partir
sobre cada hebra retardada.
Hebra retardada del nuevo cebador.

Hebra retardada

Cuando la ADN polimerasa llega al


5 6 La ligasa une los fragmentos de ADN.
cebador de ARN, lo elimina y lo reemplaza
por ADN.
Nuevo cebador

Ligasas

Nuevo cebador
Terminación del
proceso

La replicación termina cuando se


unen todos los fragmentos de
Okazaki de la hebra retardada
Corrección de errores
1. Durante la replicación se puede producir un error en el
apareamiento de bases con una tasa de 1/100.000 bases.

2. Parte de estos errores se corrigen durante la replicación. La


ADN polimerasa actúa como exonucleasa y elimina los
nucleótidos mal apareados y rellena el hueco con los
nucleótidos correctos.

3. La ADN ligasa une los fragmentos resultantes.

4. A pesar de todo, siempre quedan algunos errores


(mutaciones)
http://highered.mcgraw-hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/direct_repair.html

http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/nucleotide_excision_repair.html

http://highered.mcgraw-
hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/proofreading_function_of_dna_polymerase.html
Enzima Acción Función en la célula.

Añade nucleótidos a la Llena huecos en el DNA, para


molécula de DNA en reparación. Remueve los
DNA Polimerasa I formación. Remueve cebadores de RNA.
cebadores de RNA.
Añade nucleótidos a la Replica DNA.
molécula de DNA en
DNA Polimerasa III formación. Revisa y corrige
la secuencia.
Existen cinco tipos de ADN polimerasas (,
, , , y  ). Promueve el Mantiene la compactación
DNA girasa (topoisomerasa II) superenrrollamiento. del DNA.

Se une al DNA cerca de la Promueve la separación de


DNA helicasa
horquilla de replicación. las hebras de DNA.
Relaja el DNA Mantiene el nivel adecuado
Topoisomerasa I
superenrrollado. de enrollamiento.
Hace cadenas pequeñas de Necesaria para que la DNA
Primasa RNA usando DNA como polimerasa replique la hebra
molde. “retrasada”.
Replicación en los eucariontes
Es muy parecida a la de los procariontes, salvo en algunas diferencias
debidos a las propias diferencias en el material genético de procariotas y
eucariotas:
 El material genético de eucariotas esta dividido en varios
cromosomas, mucho mas largos que el cromosoma procariota.
 La replicación se origina simultáneamente en muchos puntos: los
replicones (puede haber mas de6000 en un solo cromosoma).
 Existen cinco tipos de ADN polimerasas (, , , , y  ).
 El ADN eucariota está asociado a histonas, que se tienen que
duplicar durante la duplicación para formar los nucleosomas.
 Los nuevos nucleosomas se incorporan a la hebra retardada y los
viejos se quedan en la conductora
Replicación en los eucariontes
Cuando se elimina el último cebador, la ADN polimerasa no podrá rellenar el
hueco, al no poder sintetizar en dirección 3’ - 5’.

Debido a esto el extremo

Telómero
del cromosoma (telómero) 3’
se va acortando cada vez 5’ 3’ 5’
5’
que la célula se divide. 5’
Cebador Último cebador

Esto se asocia al
envejecimiento y muerte 5’
3’
celular.
5’
La ADN polimerasa polimeriza Eliminación
desde el extremo 3’ libre de cebadores

3’
Hebra más corta
5’

5’
Hebra continua y retardada
Hebra continua y retardada

• Todas la DNA polimerasa catalizan la síntesis de DNA en dirección


5’ 3’
• Como se replica la hebra parental con sentido 5’ 3’? (Fragmentos
de Okasaki
Hebra continua y retardada
Mecanismo
Mecanismo
Mecanismo
Mecanismo
Mecanismo
Mecanismo
Mecanismo
Replicación en eucariontes y procariontes

En procariontes
La replicación es bidirecional a
partir de un único origen de
replicación
Replicación en eucariontes y procariontes

En eucariontes
La replicación es bidirecional a
partir de un múltiples orígenes
de replicación
Experimentos de Meselson y Stahl

http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120076/bio22.swf

Replicación del ADN

http://highered.mcgraw-hill.com/olc/dl/120076/micro04.swf

http://www.johnkyrk.com/DNAreplication.esp.html

Experimentos de Hershey y Chase

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/9834092339/student_view0/chapter14/hershey_and_chase_experiment.html

http://biologia.uab.es/genomica/swf/dna.htm
En cuanto a la Replicación responda:

1.- ¿Qué es la replicación?

2.- ¿Qué características tiene la replicación?

3.- Escriba la cadena complementaria de:

5’-ATGGCACAA-3’
Cuál es la función de las enzimas:

1.- ADN ligasa

2.- Primasa

3.- Topoisomerasa:

4.- Helicasa:

5.- ADN polimerasa:


http://www.bionova.org.es/animbio/anim/dn
areplicacion/menu.swf
Cuál es la función de las enzimas:

1.- ADN ligasa: Se encarga de unir los fragmentos de los nuevos nucleótidos que ha puesto
el ADN polimerasa al corregir los errores.

2.- Primasa: sintetiza pequeños fragmentos de ARN sobre la cadena rezagada en la


replicación del DNA, de unos 10 nucleótidos, conocidos como cebadores,

3.- Topoisomerasa: Cuando la helicasa desenrolla el ADN se producen tensiones que pueden romper
las cadenas. La topoisomerasa y las girasas rompen y soldan el ADN para evitar estas tensiones.

4.- Helicasa: Rompe los puentes de hidrógeno entre las bases nitrogenadas permitiendo que
se abra la doble hélice.

5.- ADN polimerasa: Se encarga de recorrer la cadena molde seleccionando los desoxirribonucleótidos con la
base complementaria correspondiente y los unen para formar la nueva cadena. También se encargan de la
corrección de errores, substituyendo las bases mal emparejadas y el ARN cebador.
• http://www.mhhe.com/sem/Spanish_Animati
ons/spanishanimations_index.html
Replicación