La pérdida de la proteína

estabilizadora de
α-hemoglobina perjudica la
eritropoyesis e intensifica la
β-talasemia

Ariadna García
Patricio Gómez
Maite Inthamoussu
Juan Martín Mayora
A3, seminario 1
 INTRODUCCIÓN
Hemoglobina (Hb):
• En eritrocitos
• Proteína tetramérica, 4 cadenas de globina
• Grupo hemo: protoporfirina IX + hierro
• Hb A: Hb normal del adulto (2 α y 2 β)
• Hb F: Hb fetal (2 α y 2 γ)
• Función principal: transporte de O2
 INTRODUCCIÓN
Subunidades α y β libres:
• Inestables
• Citotóxicas
•  esperanza de vida de eritrocitos
• Eritropoyesis inefectiva
 INTRODUCCIÓN

β-talasemia:
• Anemia hereditaria
• Mutación en gen de β-globinaHb = α-Hb
• α-Hb: generan radicales libres (ROS)
• Mecanismo de protección: Proteína
Estabilizadora de la Hemoglobina (AHSP)
 OBJETIVOS

• Comprobar que la unión de AHSP a

la α-globina protege a la célula

• Estudiar efectos de la pérdida de

AHSP en la vida media de los
eritrocitos y consecuencia de esto en
hematopoyesis y β-talasemia
 METODOLOGÍAS Y
TECNOLOGÍAS
• Inactivación del gen de la AHSP en ratones
• Tinción con Wright-Giemsa, de los cuerpos de
Heinz y azul prusiana
• Inyección de eritrocitos con N-
hidroxisuccinilbiotina, marcador con biotina
• Citometría de flujo
• Espectroabsorción
• Apareamiento de ratones knockout con
ratones talasémicos
 RESULTADOS

Figura 1: (A) Paneles de arriba: tinción Wright-Giemsa. Paneles

de abajo: tinción de los cuerpos de Heinz. (B) Cinética de la
supervivencia de los eritrocitos. (C) Tinción de prusiana
 RESULTADOS

Figura 3. Eritropoyesis inefectiva en el raton

Figura 2. Hiperplasia en eritrocitos de ratones AHSP-/-. AHSP-/- . Análisis de los precursores de
(A) Incremento en la masa del bazo en ratones AHSP-/-. eritrocitos esplácnicos de acuerdo a los niveles
(B) Proporción elevada de Ter119+ en eritrocitos en ratones de expresión de Ter119 y CD71..
AHSP-/- , determinados por citometría de flujo.
RESULTADOS

Figura 4. Hemoglobina inestable en eritrocitos AHSP-/-.

(A) Análisis en gen TAU de las cadenas globina asociadas a la
membrana con los genotipos AHSP indicados arriba.
(B) Prueba de estabilidad de la hemoglobina con isopropanol.
RESULTADOS

Figura 5. (A) Valores relativos de ROS en eritrocitos

al inicio y con adición de H2O2. (B) Susceptibilidad a
la fenitidrazine indujo anemia hemolítica.
 RESULTADOS

Figura 6. La AHSP previene la producción de ROS mediada por α-Hb y oxidación de Hb A en solución.
(A) α- y β-Hb fue preincubada con AHSP, luego mezclada con H2O2 y TMPO, un marcador indicador de
ROS. (B) Evaluación de la pérdida de hemo a partir de α –Hb y AHSP. (C) Efecto de la AHSP o proteína
control SBTI en la oxidación de Hb A mediada por α-Hb .
 RESULTADOS

Figura 7. La pérdida de la AHSP intensifica la precipitación de α-globina en el ratón adulto con β-talasemia
intermedia. (A) Lámina periférica de ratones talasémicos con genotipos AHSP+/+ y AHSP-/- . (B) Valor relativo de la
precipitación de α-globina en eritrocitos talasémicos de diferentes genotipos AHSP.
 CONCLUSIONES
• Proteína AHSP se une a α-Hb libre
estabilizándola y evitando que genere ROS
• Cuando AHSP está ausente, α-Hb es
citotóxica e inestable
• α-Hb libre precipita en reacciones REDOX
• En β-talasemia: acumulación y precipitación
de α-Hb reduce supervivencia de eritrocitos
y causa eritropoyesis inefectiva
 CONCLUSIONES
• β-talasemia y AHSP: comparten
características patológicas
• Ratones AHSP-/-: eritrocitos con vida media
acortada con precipitados de α- y β-globina
equimolares y eritropoyesis inefectiva; ROS
elevado y daño oxidativo
• Hb A sufre daños por ROS por presencia de
precipitados
• β-talasemia: mayoritariamente precipitados
de α-globina
 CONCLUSIONES

• Aplicaciones clínicas de AHSP:

variaciones de los niveles de
AHSP pueden modular severidad
de la β-talasemia
FIN