MICROSCOCOPIA Y PREPARACION

DE MUESTRAS
• LENTES Y DESVIACION DE LA LUZ
- Refracción
- Indice de refracción
-Punto focal
-Distancia focal (f) : a < f > potencia
Unidades: 1cm=10-2 m: 1mm=10-3mt: 1m=10-6
mt: 1nm=10-9 mt:1A=10-10mt:1pc=10-12mt
 MICROSCOPIO
• Inventado en 1610 por GALILEO
• Antony V.L Observa microorganismos
• E.AbbeSiglo XVIII Microsc.inmersion
• Max Knoll y E. Ruska1931 Desarrollan
el MET
• 1942 se desarrolla el MEB
TAMAÑO DE LAS BACTERIAS
• LAS BACTERIAS OSCILAN
DEPENDIENDO DEL TIPO ENTRE 0.5 A
2 MICRAS.
• SI TOMAMOS COMO EJEMPLO 0.5 MC
• 0.5 MICRAS*10-6MT*100 CM=0.0005 CM
• ESTO EQUIVALE A 1/2000 CM
• 1 CM FRAGMENTADO EN 2000 PARTES
 MICROSCOPIO OPTICO
• Clasificación: Microscopio simple
Microscopio Compuesto
• Tipos: Campo Luminoso, Campo oscuro,
Contraste de fases, Fluorescencia,
electrónico, etc.
 MICROSCOPIO LUMINOSO
• PARTES
-Sistema optico
-Sistema de iluminacion
-Sistema mecánico
• SISTEMA OPTICO
- Oculares : 4x, 10x, 15x, 20x
-Objetivos: Secos y Húmedos
 MICROSCOPIO LUMINOSO
• Sistema de iluminacion
- Bombilla
- Reostato
- Condensador
-Diafragma
 MICROSCOPIO LUMINOSO
• Sistema mecánico
- Brazo
- Pie
- Tornillo macro y micrometrico
- Platina
-Pinzas y sus tornillos
- Revolver
 MICROSCOPIO LUMINOSO
• Resolución de un microscopio
- Resolución.- Cap. de la lente distinguir
entre objetos muy próximos.
d= 0.5 / nsen 
• Resolución total del microscopio
dtotal=  / (Anobj+Ancond)
LIMITES DE RESOLUCION DE
MICROSCOPIOS
• MICROSCOPIO OPTICO
- 100 nm-100 micrometros (micoplasmas,
bacterias, mohos, levaduras, eritrocitos,
celulas epiteliales,etc)
• MICROSCOPIO ELECTRONICO
- 0.1 nm- 100 micrometros(Todo lo anterior
mas virus, proteinas, amonoacidos,
atomos, etc.)
FORMACION DE LA IMAGEN
PREPARACION Y TINCIONES
• Procedimientos de observación
- Observación en húmedo (Cámara
cuentaglobulos)
- Observación en seco o peliculas secas y
coloreadas
CAMARA CUENTAGLOBULOS
1. Preparar una dilución 10-1
2. Descargar sobre la cámara
3. Tapar con el cubreobjetos
4. Realizar el recuento
# Cel = 4000* (1/D)*N/F
N= # de m.o. Contados
F= Numero de campos contados
 OBSERVACION EN SECO
• Coloraciones simples
• Coloraciones diferenciales
• METODOS
• Fijación.- Conservan y fijan en su posición
e inactivan enzimas.
• 2 clases de fijación: - Fijación Física
- Fijación química (Etanol, Ac. Acético, etc.)
 COLORANTES
• Característica: Orgánicos y t. reacción
Clasificación:
-Colorantes básicos o cationicos:
Azul de metileno, safranina, verde
malaquita,Fucsina básica,Violeta cristal (Violeta
de genciana).
- Colorante ácidos o anionicos:
Eosina, rosa de bengala y fucsina ácida.
- Colorantes liposolubles: (ej. Negro Sudan)
 TIPOS DE COLORACIONES
• Coloraciones simples: 1 solo colorante.
• Coloraciones diferenciales: Más de un
colorante.
• Tinción de Gram (Diferencial)
-Pasos.
1. Realizar el frotis
2. Realizar fijación
 TINCIÓN DE GRAM
3. Violeta cristal 30 seg
4. Enjuagar con agua 2 seg
5. Aplicar Lugol por 1 min
6. Enjuagar con agua
7. Lavar con alcohol al 95% por 10-30 seg
8. Enjuagar con agua
9. Aplicar safranina por 30-60 seg.
10. Enjuagar con agua.
T. ACIDO ALCOHOL RESISTENTE
• METODO DE ZIEHL-NEELSEN
1. Realizar el Frotis
2. Realizar la fijación.
3. Calentar una mezcla de fucsina básica y
fenol (fucsina fenicada)
4. Verter la muestra sobre la mezcla (t=5min)
5. Lavar con alcohol al 95%
6. Lavar con agua.
7. Solución de contraste (V. Genciana) t= 5
min.
8. Enjuagar con agua
 TINCION DE ESPORAS
• Metodo de Shaefer Foulton
1. Frotis
2. Fijación
3. Teñir con verde malaquita a emisiones de vapor
por 8-10 min.
4. Lavar con agua destilada
5. Fucsina básica por 3 min.
6. Lavar secar y observar con obj. de inmersión.
Tinción de esporas