EL NUCLEO

En eucariontes la información genética está almacenada como DNA de doble hebra en el

núcleo, el cual ocupa aprox. 10% del volumen celular
El núcleo está rodeado por una envoltura nuclear o carioteca formada por una doble
membrana correspondiente a una membranas interna y otra externa
La carioteca presenta poros nucleares por donde pasan los RNAm y RNAr unidos a
proteinas, los factores de transcripción, proteínas de la replicación, etc.
La carioteca está sostenida internamente por una fina lámina de filamentos intermedios
de tipo V conformados por proteínas láminas y externamente por filamentos intermedios
La carioteca está conectada directamente con el retículo endoplásmico
EL EMPAQUETAMIENTO DEL DNA
Las células eucariontes contienen DNA de
doble hebra de aprox. 2 metros de largo y el
núcleo sólo tiene 6 µm de diámetro. Esto
equivale a empaquetar una fibra delgada de 40
km en una pelota de tenis.
Los procariontes tiene un genoma más pequeño
que los eucariontes (600-1000 veces menor en
tamaño) pero igual el DNA de doble hebra
tiene que caber en una célula que tiene sólo
algunos µm de diámetro. Esto implica que el
DNA está altamente compactado
LOS CROMOSOMAS
Las células humanas contienen 24
cromosomas lineales conformados por
3200 millones de pares de bases las cuales
están empaquetadas como cromatina con
proteínas específicas. Los cromosoma
humanos son 22 cromosomas autosómicos
que están dos copias y dos cromosomas
sexuales que corresponden a XX en
mujeres y XY en hombres. Por lo tanto, el
cariotipo humano está compuesto por 46
cromosomas (22 pares de cromosomas
autosómicos y 2 cromosomas sexuales) y
es un genoma diploide.
Las células procariontes contienen un sólo
cromosoma circular formado por 4-5
millones de pares de bases empaquetado
también con proteínas específicas pero
poco conocidas y distintas a las proteínas
de la cromatina eucarionte
 TINCION DE CROMOSOMAS

Los cromosomas en forma de

cromatina condensada pueden ser
teñidos con colorantes que muestran
patrones de bandeo característicos.
El colorante Hoechst tiñe zonas ricas
en A-T y muestra las bandas G
(Giemsa) y el colorante olivomicina
tiñe zonas ricas en G-C y muestra las
bandas R (Reversas).
Cada especie tiene un juego de
cromosomas que presenta un bandeo G
y R específico el cual permite
identificar cada uno de los cromosomas
del cariotipo.

BANDAS G DE CROMOSOMAS HUMANOS

NUMERO DE CROMOSOMAS
 COMPLEJIDAD DE LOS GENOMAS Y NUMERO DE
CROMOSOMAS
Las células humanas tienen 46 cromosomas, un venado tiene 6 cromosomas, una
carpa tiene 100 cromosomas y la levadura (eucarionte inferior) tiene 16 cromosomas.
El tamaño del genoma humano es 200 veces mayor que el de levadura y 600 veces
mayor que el E. coli. Sin embargo, el genoma humano es 30 veces más pequeño que
el de muchas plantas y 200 veces menor que el de una ameba. Esto último se explica
por la abundancia de secuencia no codificantes en las últimas especies. Por lo tanto, el
número de cromosomas y el tamaño del genoma no guardan relación con la
complejidad del organismo o célula

Los cromosomas de levadura

LOS CENTROMEROS, TELOMEROS Y
ORIGENES DE REPLICACION
En eucariontes cada cromosoma lineal
tiene varios orígenes de replicación que
corresponden a secuencias ubicadas a lo
largo del cromosoma y que permiten la
unión de la maquinaria de replicación. El
cromosoma circular de procariontes tiene
un sólo origen de replicación.
Hacia el centro de cada cromosoma lineal
se ubica una secuencia denominada
centrómero la cual permite la unión del
cromosoma al haz mitótico y la separación
posterior de las cromátidas (cromosoma
duplicado y condensado).
En los extremos del cromosoma lineal se
ubica una secuencia denominada telómero
que contienen secuencias repetidas que
permiten que el cromosoma se replique
eficientemente
 LOS GENES EN LOS CROMOSOMAS
Aquí se presenta un segmento del cromosoma 22 humano y la disposición de
los genes en un segmento de éste. Se observa también el detalle de un gen
humano el cual está interrumpido por múltiples secuencias no codificantes
(intrones), lo cual es muy común en humanos
 LAS SECUENCIAS NO CODIFICANTES
Más de la mitad del genoma humano está compuesto por secuencias que no
aportan a la expresión génica. Estas secuencias “basura” corresponden a
secuencias retrovirales repetidas miles de veces, a secuencias de tranposones,
segmentos duplicados y repetición de secuencias cortas. La otra mitad
corresponde a secuencias regulatorias ubicadas delante de los genes, a intrones
y sólo el 2% son secuencias codificantes (exones).
 LA CROMATINA
En eucariontes, el DNA de doble doble hebra se encuentra compactado en
forma de cromatina mediada por el enrollamiento en torno a proteínas
pequeñas (102 a 135 aa) muy alcalinas (20 a 30% de lys y arg) denominadas
histonas junto a proteínas no histónicas que median mayores grados de
compactación. Al microscopio electrónico, la cromatina amorfa del núcleo
interfásico se observa como una fibra de 30 nm y si ésta se trata con fuerza
iónica se obtiene la fibra de 10 nm

Fibra de 30 nm

Fibra de 10 nm
LA FIBRA DE 30 NM

La fibra de 30 nm es una forma

de cromatina más condensada que
la fibra de 10 nm y para su
formación se requiere de la
histona H1. En la fibra de 30 nm
cada giro contiene 6 nucleosomas
enrollados de manera adyacente.
 LA FIBRA DE 10 NM

La fibra de 10 nm es la forma más descondensada de la cromatina y se observa al

microscopio electrónico como un collar de perlas. La fibra de 10 nm está compuesta por
el DNA de doble hebra enrollado alrededor de esferas compuestas por un octámero de
histonas (2 monómeros de las histonas H2a, H2b, H3 y H4). El DNA de doble hebra se
enrolla espontáneamente alrededor del octámero de histonas y forma un nucleosoma. El
tamaño del DNA enrollado alrededor del octámero de histonas es de 146 pb. La fibra de
10 nm puede ser cortada con nucleasa micrococal que digiere el DNA de doble hebra que
no está asociado a proteínas y permite liberar un fragmento de DNA de aprox. 200 pb
junto con el octámero de histonas.
 DIGESTION CON
NUCLEASA
MICROCOCAL
La nucleasa micrococal requiere Ca+2 para
cortar la cromatina entre los nucleosomas.
La digestión por la nucleasa se detiene
agregando EGTA, el cual quela el Ca+2.
Una digestión breve con nucleasa
micrococal genera una familia de
fragmentos de DNA de 200 pb y múltiplos
de este fragemento. Una digestión larga
genera sólo fragmentos de 200 pb. El DNA
y las histonas de los nucleosomas se
disocian agregando fueza iónica.
La cromatina se descondensa y solubiliza
agregando NaCl 0.7 M porque se libera la
histona H1. La cromatina se condensa y
precipita bajando la fuerza iónica a 0.15 M
NaCl porque la histona H1 interacciona
fuertemente con el octámero de histonas.
FRAGMENTOS DE DNA E HISTONAS ASOCIADAS
AL OCTAMERO

DNA asociado a nucleosomas Histonas linfocitos de bazo de rata

gel de agarosa al 1 % gel de acrilamida al 12%
LAS HISTONAS
ENSAMBLAJE DE UN NUCLEOSOMA

El ensamblaje del octámero de histonas

es espontáneo (no requiere ATP), así
como el enrollamiento del DNA en
torno al octámero. El DNA se enrolla
de manera espontánea girando hacia la
izquierda y dando 1.65 vueltas en torno
al octámero de histonas y forma así un
nucleosoma
Las histonas del octámero tocan el
DNA principalmente en zonas ricas en
A-T ubicadas en el zurco menor. Las
zonas ricas en A-T son más flexibles
que las zonas ricas en G-C.
ENSAMBLAJE DEL OCTAMERO DE HISTONAS
El octámero de histonas tiene una
masa molecular de 100 kDa y se
forma por asociación de dos dímeros
de histonas H3-H4 y dos dímeros de
histonas H2a-H2b. Todas las histonas
presentan tres alfa-hélices conectadas
por dos loops y un extremo amino
terminal sin estructura secundaria que
sobresale del octámero. La secuencia
primaria de las histonas es muy
conservada, por ej. la histona H4 de
una arveja sólo difiere en 2 aa de los
102 aa de la histona H4 de una vaca.
El genoma humano diploide requiere
la formación de 30 millones de
nucleosomas por lo que la cantidad de
histonas en una célula es enorme. Los
genes de histonas están presente en
miles de copias y son altamente
expresados
LA FIBRA DE 30 NM Y LA HISTONA H1
 COMPACTACION DE LA
CROMATINA PARA
FORMAR CROMOSOMAS

La formación de la fibra de 10 nm permite

la compactación en 7 veces del ADN. La
formación de la fibra de 30 nm a su vez
permite una compactación de 100 veces
más. Para formar los cromosomas, la
cromatina debe compactarse 100.000 veces
para lo cual la fibra de 30 nm debe
enrollarse formando 6 loops para constituir
una roseta solenoidal. Esto último requiere
que la histona H1 esté fosforilada en 5
serinas y que los loops se unan a la matriz
nuclear. Luego, las 30 rosetas forman un
giro y finalmente 10 giros constituyen una
cromátida.
UNION DE OTRAS PROTEINAS A LA CROMATINA
 REMODELAMIENTO DE LA CROMATINA

En las células eucariontes existen varios complejos de remodelamiento de la cromatina

formados por varias subunidades y que requieren hidrólisis de ATP para su
funcionamiento. Estos complejos mueven los nucleosomas y permiten que proteínas
involucradas en la expresión génica, replicación y reparación se unan al DNA.
MODIFICACION DE HISTONAS Y FUNCIONES

El extremo amino terminal de las

histonas puede sufrir varios tipos
de modificacioes covalentes. Estas
modificaciones son la acetilación
y metilación de lisinas y la
fosforilación de serinas
La acetilación descompacta la
cromatina y permite la unión de
factores de transcripción. La
acetilación y desacetilación de las
histonas en el nucleosoma está
mediada por acetil trasferasas
(HAT) y desacetilasas (HDAC)
nucleares. La metilación, por el
contrario, compacta la cromatina e
impide la transcripción de ciertas
zonas del DNA.
La combinación de acetilación, metilación y fosforilación de los extremos amino terminales
de las histonas serviría como señal de que diversos procesos celulares han ocurrido.